烟草4种病毒的多重RT-PCR检测方法构建

发布时间：2021-05-15 07:06

　　为有效鉴定烟草的主要病毒,包括烟草普通花叶病毒（Tobacco mosaic virus,TMV）、黄瓜花叶病毒（Cucumber mosaic virus,CMV）、马铃薯Y病毒（Potato virus Y,PVY）和烟草脉带花叶病毒（Tobacco vein banding mosaic virus,TVBMV）,建立了一种同时检测这4种病毒的多重RT-PCR检测方法。通过人工接种4种病毒试验,发现TVBMV在混合侵染中受TMV、CMV和PVY的拮抗作用。为提高4种病毒复合侵染下TVBMV的检测灵敏度,筛选出TVBMV中表达水平最高的PIPO基因,利用该基因结合TMV、CMV和PVY的CP基因,基于保守区域设计引物,并优化引物及模板的浓度,在一个PCR反应体系中稳定扩增获得大小分别为700、452、275和235 bp的产物。该方法实现了对多种病毒的同时检测,适用于目前大部分烟区田间病毒复合侵染的监控。 

【文章来源】：烟草科技. 2020,53(09)北大核心CSCD

【文章页数】：6 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 病叶材料
    1.2 试剂
    1.3 烟草病叶总RNA的提取
    1.4 反转录
    1.5 引物设计
    1.6 单重PCR
    1.7 多重PCR
2 结果与分析
    2.1 烟草病叶总RNA检测
    2.2 TMV和CMV的双重PCR检测体系构建
    2.3 TMV、CMV和PVY的3重PCR检测体系构建
    2.4 TMV、CMV、PVY和TVBMV的4重PCR检测体系构建
        2.4.1 TVBMV引物筛选
        2.4.2 TVBMV在复合侵染中的分析
        2.4.3 4重PCR反应条件的优化
3 讨论
4 结论


【参考文献】：
期刊论文
[1]检测三种烟草病毒的一步法多重RT-PCR[J]. 张俊祺,杨军,宋纪真,罗朝鹏,王燃,李锋,周小龙.  烟草科技. 2014(02)
[2]云南烟草蚀纹病毒与其他病毒复合侵染的多重RT-PCR检测[J]. 佟爱仔,赵兴能,孔宝华,陈海如,蔡红,杨根华,秦西云,莫笑晗.  云南农业大学学报(自然科学). 2013(03)
[3]2011年云南烟草病毒病发生动态及复合侵染分析[J]. 佟爱仔,赵兴能,孔宝华,陈海如,蔡红,杨根华,秦西云,莫笑晗.  植物病理学报. 2013(01)
[4]陕西省烟草主要病毒病种类及植物带毒的检测[J]. 李金岭,罗晶,牛小义,成巨龙,陈德鑫,安德荣.  西北农林科技大学学报(自然科学版). 2013(01)
[5]五种烟草病毒TMV、CMV、TEV、PVY及TVBMV的多重RT-PCR同步检测[J]. 郑轩,成巨龙,赵震,李正男,王威麟,张昊,吴云锋.  植物病理学报. 2011(02)
[6]烟草中TMV、CMV和PVY多重RT-PCR检测体系的建立与应用[J]. 杨金广,张帅,申莉莉,钱玉梅,陈德鑫,王长栓,黄瑾,王凤龙.  中国烟草学报. 2010(04)
[7]RT-PCR快速检测3种烟草病毒技术[J]. 谷瑞华,王进忠,文思远,王升启,张爱环,魏艳敏.  华北农学报. 2007(S1)
[8]应用多重RT-PCR检测烟草上的TMV和CMV[J]. 宋婷婷,陈荣溢,杨雷亮.  辽宁农业科学. 2007(01)
[9]陕西烟草病毒病毒原鉴定及种群区系分布[J]. 王秀敏,郝兴安,吴云锋,成巨龙,黎登寨.  烟草科技. 2005(08)
[10]全国16个主产烟省（区）烟草侵染性病害调研报告[J]. 陈瑞泰,朱贤朝,王智发,郭振业,董汉松,王兰珍,刘延荣,石金开.  中国烟草科学. 1997(04)



本文编号：3187189