家蚕抗菌肽DefensinB的抑菌活性和品种间的序列差异分析

发布时间：2021-05-21 14:30

　　抗菌肽（Antibmicrobial peptides）是体液免疫中产生的效应分子,在昆虫的免疫防御中起重要作用。家蚕是一种重要的经济昆虫,也是鳞翅目昆虫的模式代表,其免疫机制的研究备受关注。根据抗菌肽的结构和功能特点,家蚕中的抗菌肽被分为7个家族,其中Cecropin、Attacin、Lebocin、Moricin、Enbocin和Gloverin 6个家族抗菌肽的功能和活性已有报道,而Defensin家族的两个抗菌肽成员DefensinA和DefensinB的功能尚未得到鉴定,仍有待进一步研究。论文首先通过杆状病毒真核表达系统表达家蚕抗菌肽DefensinB,检测重组蛋白DefensinB的抑菌活性;其次,从不同家蚕品种扩增DefensinB的基因序列,分析品种间的序列差异,并进一步检测细菌和真菌诱导后不同品种中家蚕DefensinB基因的转录表达情况。研究获得以下主要结果:1、以家蚕幼虫脂肪体cDNA为模板,通过RT-PCR扩增得到C端带有His.tag的DefensinB编码序列,酶切连接到pFastBac1载体,成功构建pFast Bac1-DefensinB重组载体,利用B... 

【文章来源】：华南农业大学广东省

【文章页数】：71 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
abstract
1 前言
    1.1 家蚕的体液免疫
    1.2 昆虫Defensin的研究概况
    1.3 本论文的研究目的和意义
2 材料与方法
    2.1 实验材料
        2.1.1 实验质粒、菌株、细胞和家蚕
        2.1.2 主要药品及试剂
        2.1.3 主要消耗品及其处理方法
        2.1.4 常用溶液及培养基的配制
        2.1.5 Tricine-SDS-PAGE相关试剂
        2.1.6 蛋白质纯化试剂
        2.1.7 蛋白质免疫印记试剂
        2.1.8 主要仪器及设备
    2.2 实验方法
        2.2.1 真核表达载体pFastBac1-DefensinB的构建
        2.2.2 重组杆状病毒的获得
        2.2.3 重组病毒AcMNPV-DefensinB的制备与增殖
        2.2.4 目的蛋白DefensinB的表达与鉴定
        2.2.5 重组杆状病毒表达蛋白的大量纯化
        2.2.6 DefensinB重组蛋白抑菌活性鉴定
        2.2.7 不同品种家蚕DefensinB的序列差异分析
        2.2.8 不同品种家蚕DefensinB对微生物诱导的转录活性检测
3 结果与分析
    3.1 家蚕与其他鳞翅目昆虫Defensin序列的比对分析
    3.2 家蚕DefensinB基因PCR扩增
    3.3 重组表达载体的构建
    3.4 重组杆状病毒的获得
    3.5 杆状病毒感染的Sf9细胞的病变分析
    3.6 重组蛋白DefensinB的表达鉴定
        3.6.1 Western blot鉴定DefensinB的表达
        3.6.2 重组蛋白DefenisnB的纯化与质谱鉴定
    3.7 DefensinB蛋白的大量纯化
    3.8 DefensinB蛋白的抑菌活性
        3.8.1 重组蛋白DefensinB对细菌的抑菌活性
        3.8.2 重组蛋白DefensinB对真菌的抑菌活性
    3.9 不同品种的家蚕DefensinB序列分析
    3.10 不同家蚕品种DefensinB的转录活性
        3.10.1 定量引物的特异性检测
        3.10.2 qRT-PCR检测靶基因转录活性
4 讨论
    4.1 抗菌肽的重组表达策略
    4.2 DefensinB蛋白的抑菌活性
5 结论
致谢
本论文研究受到以下项目的资助
参考文献
附录


【参考文献】：
期刊论文
[1]家蚕防御素基因的序列特征与表达模式分析及原核表达试验[J]. 马振刚,贾俊杰,陈全梅,黄为,李田,潘国庆,周泽扬.  蚕业科学. 2012(02)



本文编号：3199871