转基因抗虫早粳稻HD 2 和HD 4 品系性状鉴定及土壤环境安全性评估

发布时间：2021-05-22 22:25

　　水稻（Oryza sativa）是一种世界上重要的谷类作物,是全球近30多亿人的主食。同时水稻也是遭受虫害最为严重的农作物之一,全球每年因鳞翅目害虫所造成的稻米减产就达到了近1000万吨。而长期使用化学农药,不但增加了种植成本、引起害虫抗性,还会使环境造成污染,破坏生态平衡。因此,利用转基因技术将外源抗虫基因导入到水稻基因组中是最有效的解决虫害的途径。目前,最常用的抗虫基因为Bt基因,并且也获得了多种具有抗虫性状的转Bt基因水稻品系。本研究以转cry2A*基因抗虫水稻空育131（HD₂品系）和松粳9号（HD₄品系）为实验材料,采用Basta抗感性检测、PCR检测、胶体金免疫层析检测、real time PCR检测、酶联免疫吸附实验（ELISA）、Southern印迹杂交、全基因组重测序及土壤微生物检测等方法,从DNA水平、mRNA水平、蛋白水平及转基因植株与非转基因对照间土壤微生物的差异性进行研究,鉴定出目的基因拷贝数低、遗传稳定性强且外源蛋白表达量高、对土壤环境的安全性影响不显著的转基因抗虫水稻植株。主要研究结果为:1、利用Basta筛选、... 

【文章来源】：黑龙江大学黑龙江省

【文章页数】：71 页

【学位级别】：硕士

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中文摘要
Abstract
第1章 引言
    1.1 转基因抗虫植物应用的抗虫基因
        1.1.1 Bt基因
        1.1.2 蛋白酶抑制剂基因
        1.1.3 植物外源凝集素基因
    1.2 转基因抗虫植物的检测方法
        1.2.1 PCR检测
        1.2.2 胶体金免疫层析技术
        1.2.3 酶联免疫吸附试验
        1.2.4 Southern印迹杂交
        1.2.5 全基因组重测序
    1.3 转基因植物对土壤生态系统的影响
        1.3.1 转基因植物外源基因在土壤中的残留
        1.3.2 转基因植物对土壤微生物的影响
        1.3.3 转基因植物对土壤动物的影响
        1.3.4 转基因植物对土壤理化性质的影响
    1.4 转基因水稻的食用安全性评价
        1.4.1 转基因水稻食用安全性评价原则
        1.4.2 转基因水稻实质等同性评价
        1.4.3 转基因水稻毒理学评价
        1.4.4 转基因水稻致敏性评价
    1.5 研究目的及意义
第2章 材料与方法
    2.1 实验材料
        2.1.1 供试水稻
        2.1.2 土壤
        2.1.3 外源基因及其表达载体
        2.1.4 主要实验试剂
        2.1.5 主要实验仪器
    2.2 实验方法
        2.2.1 Basta抗感性检测
        2.2.2 PCR检测
        2.2.3 Real-time PCR检测
        2.2.4 Bt蛋白检测
        2.2.5 Southern blot检测
        2.2.6 农艺性状考察及米质检测
        2.2.7 全基因组重测序
        2.2.8 土壤微生物检测
第3章 结果与分析
    3.1 水稻HD_2和HD_4的筛选及PCR检测
        3.1.1 Basta筛选
        3.1.2 胶体金免疫层析试纸条筛选
        3.1.3 cry2A*基因PCR检测
    3.2 水稻HD_2和HD_4目的基因表达量
        3.2.1 mRNA
        3.2.2 蛋白质
    3.3 水稻HD_2和HD_4目的基因拷贝数
    3.4 水稻HD_2和HD_4农艺性状及米质
    3.5 水稻HD_2和HD_4目的基因插入位点
    3.6 水稻HD_2和HD_4对土壤微生物的影响
        3.6.1 对土壤微生物数量的影响
        3.6.2 目的基因向土壤微生物的水平扩散
第4章 讨论
    4.1 转cry2A*基因早粳稻农艺性状发生改变的分析
    4.2 种植转基因作物对土壤微生物造成潜在影响的分析
    4.3“绿色超级稻”的培育及后续实验的展望
第5章 结论
参考文献
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]国家“绿色超级稻新品种选育”现场会召开[J]. 蔡秋华.  福建稻麦科技. 2016(04)
[2]动物基因组学重测序的应用研究进展[J]. 汪文强,赵生国,马利青,郭继军,马月辉,赵倩君.  畜牧兽医学报. 2016(10)
[3]基于重测序的大豆新品种齐黄34的全基因组变异挖掘[J]. 张彦威,李伟,张礼凤,王彩洁,戴海英,徐冉.  中国油料作物学报. 2016(02)
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[5]转基因玉米种植对土壤动物的影响[J]. 刘新颖.  北京农业. 2016(02)
[6]外源基因在转基因植物中高效表达的研究进展[J]. 韩岚,张金然,吴娜,张海霞.  北京农业. 2015(35)
[7]关于我国转基因粮食作物商业化种植问题的思考[J]. 马翠萍.  价格理论与实践. 2015(11)
[8]诊断家畜日本血吸虫感染胶体金免疫层析试纸条的研制[J]. 许瑞,赵登云,陆珂,洪炀,李浩,林矫矫,刘金明,徐玉梅,朱传刚.  中国血吸虫病防治杂志. 2015(05)
[9]基于全基因组重测序的SNP分析在作物基因定位中的研究进展[J]. 袁金红,李俊华,黄小城,李莎,高武军.  植物生理学报. 2015(09)
[10]不同植物种植对松嫩平原盐碱地土壤理化性质与细根生长的影响[J]. 魏晨辉,沈光,裴忠雪,任蔓莉,路嘉丽,王琼,王文杰.  植物研究. 2015(05)

博士论文
[1]抗RBSDV转基因水稻田间生物学调查及分子特征分析[D]. 林超.山东农业大学 2016
[2]苏云金芽胞杆菌资源多样性分析与杀虫基因发掘[D]. 束长龙.东北农业大学 2013
[3]RNAi介导的棉铃虫HaHR3基因沉默及转基因植物抗虫机理研究[D]. 熊叶辉.中国农业科学院 2013
[4]转基因产品检测标准物质研究[D]. 张丽.中国农业科学院 2012
[5]两种转基因大米食用安全性的毒理学研究[D]. 周兴华.江苏大学 2012



本文编号：3201764