噻呋酰胺残留酶联免疫吸附分析方法的建立

发布时间：2021-05-25 18:28

　　农药的合理使用能有效地提高农产品的产量,促进了农业经济的发展。噻呋酰胺是一种作用广泛的含氟杀菌剂,可有效防治谷物,水果,蔬菜中的多种病害。尽管噻呋酰胺是一种低毒农药,它的残留情况却依然不容忽视。随着农业生产活动中对噻呋酰胺的需求量加大的同时,人们在日常生活中与之接触的风险也在逐渐升高,使人类健康受到威胁。农药残留情况一直是人们关注的焦点,也是食品安全问题中急需解决的重点。现有的噻呋酰胺残留的检测方法仅仅局限于高效液相色谱法（HPLC）,气相色谱法（GC）等化学检测方法,此类方法不仅操作复杂,耗时耗力,而且无法摆脱对大型仪器和专业操作人员的依赖,因此有必要建立一种更为方便、迅速、灵敏、仪器要求不高的方法来对噻呋酰胺的残留进行有效检测,酶联免疫吸附分析方法（ELISA）则合此要求。本研究以2-甲基-4-三氟甲基-5-噻唑甲酸为半抗原,采用活泼酯法、混合酸酐法、CDI/DMAP 法合成了 免疫原 Hapten-1-BSA 和包被原 Hapten-1-OVA-1、Hapten-1-OVA-2、Hapten-1-OVA-3;以2,6-二溴-4-三氟甲氧基苯胺为半抗原,采用重氮法合成了免疫原Hap... 

【文章来源】：华中师范大学湖北省 211工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：59 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
1. 绪论
    1.1 农药综述
        1.1.1 农药使用的经济效益与地位
        1.1.2 农药的生产和应用
        1.1.3 农药的分类
        1.1.4 农药的使用存在的问题与危害
    1.2 农药残留的检测方法
        1.2.1 色谱法
        1.2.2 免疫分析法
        1.2.3 酶抑制法
        1.2.4 生物传感器法
        1.2.5 光谱分析法
    1.3 噻呋酰胺概述
        1.3.1 噻呋酰胺的理化性质
        1.3.2 噻呋酰胺的应用
        1.3.3 噻呋酰胺的毒理研究
        1.3.4 噻呋酰胺的残留与检测
    1.4 小分子ELISA检测方法的建立
        1.4.1 小分子人工抗原的合成
        1.4.2 小分子抗体的制备
    1.5 选题目的与意义
2. 材料与方法
    2.1 实验材料与用品
        2.1.1 实验材料
        2.1.2 主要试剂
        2.1.3 主要溶液
        2.1.4 主要实验仪器
    2.2 实验方法
        2.2.1 噻呋酰胺人工抗原的合成
        2.2.2 噻呋酰胺人工抗原的蛋白浓度测定
        2.2.3 噻呋酰胺人工抗原的鉴定
        2.2.4 动物免疫
        2.2.5 小鼠抗血清效价的检测
        2.2.6 抗血清对噻呋酰胺的灵敏度检测
        2.2.7 小鼠抗血清对噻呋酰胺的的特异性检测
        2.2.8 多克隆抗体的应用——添加回收实验
        2.2.9 噻呋酰胺的HPLC检测
        2.2.10 噻呋酰胺单克隆抗体制备过程中融合细胞的制备
3. 实验结果
    3.1 噻呋酰胺人工抗原的蛋白含量的测定
    3.2 噻呋酰胺人工抗原鉴定
        3.2.1 紫外吸收光谱扫描
        3.2.2 人工抗原的SDS-PAGE
    3.3 小鼠抗血清效价的检测
        3.3.1 A组小鼠抗血清效价
        3.3.2 B组小鼠抗血清效价
    3.4 小鼠抗血清灵敏度的检测
    3.5 噻呋酰胺的ic-ELISA方法的建立
    3.6 抗体特异性的检测
    3.7 添加回收检测
    3.8 HPLC检测
    3.9 细胞融合
4. 讨论
    4.1 噻呋酰胺人工抗原的合成
        4.1.1 半抗原的选择
        4.1.2 噻呋酰胺人工抗原的鉴定与合成方法的比较
    4.2 噻呋酰胺多克隆抗体的制备
    4.3 多克隆抗体的特异性
    4.4 噻呋酰胺残留检测的ELISA方法与HPLC方法的比较
    4.5 细胞融合
5. 结论与展望
参考文献
附录一 主要英文缩写词
附录二 攻读学位期间论文发表情况
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]噻呋酰胺对3种水生物的急性毒性与安全性评价[J]. 沈艳,陈亮,孙如意,周凤艳,王梅,张勇.  农药. 2016(11)
[2]农产品/食品中农药残留快速检测方法研究进展[J]. 蒋雪松,王维琴,许林云,卢利群,周宏平,陈卉卉.  农业工程学报. 2016(20)
[3]烟嘧磺隆人工抗原的合成与鼠源多克隆抗体的制备[J]. 李潇潇,尤会会,郭晴,杜俊婷,丁书茂,杨旭,袁均林.  化学与生物工程. 2016(09)
[4]色谱技术在农药残留检测中的应用综述[J]. 阳仲斌,李甲枚,李伟,金晨钟,胡军和.  现代农业科技. 2016(14)
[5]噻呋酰胺原药的高效液相色谱分析[J]. 郭利丰,丁佩,徐永.  现代农药. 2014(04)
[6]噻呋酰胺在马铃薯和土壤中检测方法及残留动态研究[J]. 秦旭,孙扬,徐应明,王倩,姚金刚,高阳.  农业资源与环境学报. 2013(06)
[7]新型杀菌剂噻氟菌胺的合成研究[J]. 刘安昌,周青,沈乔.  世界农药. 2012(03)
[8]酶联免疫法检测新型除草剂双甲胺草磷[J]. 张存政,杨春龙,刘贤进,陈敏,俞杰.  分析化学. 2011(02)
[9]农药残留的检测[J]. 何艳芬,穆筱梅,郭晓丽,张晓环,陈泽智.  广东化工. 2009(03)
[10]毛细管电泳和毛细管电色谱技术在农药残留检测中的应用[J]. 林振宇,黄露,陈国南.  色谱. 2009(01)

硕士论文
[1]乙嘧酚磺酸酯单克隆抗体的制备与性质鉴定[D]. 张亚然.华中师范大学 2012
[2]邻苯二甲酸二丁酯的酶联免疫吸附分析研究[D]. 魏晨曦.华中师范大学 2011



本文编号：3205807