CSBV重组结构蛋白抗原性研究和双抗夹心ELISA试剂盒研制

发布时间：2021-06-11 20:45

　　中华蜜蜂囊状幼虫病（Chinese Sacbrood Disease,CSBD）,是由中华蜜蜂囊状幼虫病毒（Chinese Sacbrood Virus,CSBV）引起的一种高致病性、高传染性的病毒性疾病,俗称为“蜂癌”,可以造成蜜蜂幼虫的大量死亡。然而,目前还没有合适的包括CSBV在内的蜜蜂病毒培养体系,这极大地限制了CSBV的研究和防治。在CSBV的检测上,症状诊断不够确切,电镜观察和血清学检测费力耗时,尤其是很难获得CSBV标准阳性血清,使得通过免疫学方法对CSBV进行检测的研究鲜有报道,而分子生物学诊断则面临需要特殊实验设备、成本较高等问题,只能用于实验室检测,无法大面积推广。鉴于此,本研究以本实验室分离到的CSBV基因为基础,分别以优化改造后用Linker连接的VP1、VP2基因和优化后的连续编码VP2、VP4和VP1整段基因为靶基因,进行原核表达,并用纯化的表达蛋白免疫小鼠和鸡,比较这两个表达蛋白的抗原性,筛选出抗原性较好的蛋白代替CSBV作为免疫原,制备单克隆抗体。利用制备的单克隆抗体研制双抗体夹心ELISA检测试剂盒,并对试剂盒的性能进行检测。具体研究内容如下:1.目的... 

【文章来源】：东北农业大学黑龙江省 211工程院校

【文章页数】：77 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

CSBV结构蛋白Fig.1-1StructuralProteinofCSBV

东北农业大学兽医专业学位博士学位论文成功的扩增出了 VP2-P-VP1（1708bp）和 VP2-VP4-VP1（1771bp）（图 3-2）。连接到 pMD1载体上，经双酶切鉴定（图 3-3）为阳性的质粒，送生工生物工程（上海）股份有限公司行测序，测序结果正确，成功构建了 pMD18-T-VP2-P-VP1 和 pMD18-T-VP2-VP4-VP1 质

东北农业大学兽医专业学位博士学位论文成功的扩增出了 VP2-P-VP1（1708bp）和 VP2-VP4-VP1（1771bp）（图 3-2）。连接到 pMD1载体上，经双酶切鉴定（图 3-3）为阳性的质粒，送生工生物工程（上海）股份有限公司行测序，测序结果正确，成功构建了 pMD18-T-VP2-P-VP1 和 pMD18-T-VP2-VP4-VP1 质

【参考文献】：
期刊论文
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[2]我国单克隆抗体药物产业化进展浅谈[J]. 陶维红,李宗海,李荣秀.  生物产业技术. 2019(02)
[3]RNAi靶向VP2基因抑制中蜂囊状幼虫病毒在中华蜜蜂幼虫体内复制研究[J]. 马跃宇,费东亮,郭亚茜,金宏凯,张溪研,马鸣潇.  病毒学报. 2019(01)
[4]防治中蜂囊状幼虫病的思考[J]. 刘守礼,李旭涛.  蜜蜂杂志. 2017(09)
[5]二重PCR快速检测中蜂囊状幼虫病病毒与东方蜜蜂微孢子虫方法的建立[J]. 林丽花,黄伟峰,陈琼艳,郭少娟,赵翠霞,雷珊珊,苏松坤,李继莲,黄少康.  中国科技论文. 2016(18)
[6]狄斯瓦螨和蜜蜂残翅病毒对蜜蜂健康的协同影响[J]. 蔺哲广,秦瑶,李利,王帅,郑火青,胡福良.  昆虫学报. 2016(07)
[7]2015年江西省部分蜂场意蜂大量死亡的初步分析[J]. 夏晓翠,杨柳,刘锋.  中国蜂业. 2016(06)
[8]杂交-杂交瘤技术制备BsMAb的研究进展及其在食品安全检测中的应用[J]. 王锋,王宇,王弘,肖治理.  食品科学. 2016(13)
[9]蜜蜂囊状幼虫病研究进展[J]. 李薇,薛菲,Wubie Abebe Jenberie,黄家兴,国占宝,周婷,徐书法.  动物医学进展. 2014(06)
[10]蜂农“伤不起”——对2013年陕西几起重大蜜蜂死亡事件的思考[J]. 黎九洲,黎哲.  蜜蜂杂志. 2013(12)

硕士论文
[1]猪A型口蹄疫病毒sIgA间接ELISA方法的建立[D]. 罗虹.甘肃农业大学 2018
[2]中蜂幼虫膜蛋白酵母双杂交文库构建及与中蜂囊状幼虫病毒VP2互作宿主蛋白筛选[D]. 岳金金.锦州医科大学 2018
[3]抗中蜂囊状幼虫病毒VP2蛋白卵黄抗体制备及其间接ELISA检测方法的建立[D]. 李芳兵.锦州医科大学 2017



本文编号：3225253