示踪家蚕微粒子的创制研究

发布时间：2021-06-25 04:52

　　微孢子虫（Microsporidia）是一类专性寄生于细胞内的单细胞真核微生物,在自然界中广泛存在。微孢子虫寄主广泛,影响宿主的生长发育,严重时可导致宿主死亡。家蚕微粒子（Nosema bombycis,N.b）是最早被认识的微孢子虫,也是Nosema属的重要成员之一,它能够感染重要泌丝经济昆虫家蚕（Bombyx mori）引发家蚕微粒子病（Pébrine）,给养蚕业造成巨大的经济损失。因此,对家蚕微粒子生活史的研究以及对其侵染路径和增殖过程进行标记示踪,将为家蚕微粒子的基础研究和有效防控奠定基础。家蚕微粒子具有严格的寄生生活方式,只有在宿主细胞内才能进行增殖,完成生活周期。目前微孢子虫示踪大多采用标记成熟微孢子虫的方法,而胞内阶段的未成熟微孢子虫很难被发现,且不能对微孢子虫进行活体标记和实时观察,限制了对其生活周期和侵染增殖机制的研究。可视化的示踪技术是研究病原入侵、增殖以及和宿主互作的有效手段,通过基因操作实现外源荧光蛋白活体示踪已在其他病原中广泛应用,但由于缺乏微孢子虫遗传操作体系,现阶段尚未获得活体示踪微孢子虫。鉴于此,本文首先对家蚕微粒子侵染BmE-SWU1细胞的特征进行了分... 

【文章来源】：西南大学重庆市 211工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：78 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

成熟微孢子虫超微结构简图

将感染性的孢原质通过极管注入到宿主细胞内，进行胞内增殖，该过有大量证据证明并普遍被人们所接受[29-31]。在对兔脑炎微孢子虫侵染细胞研过程中还发现一种通过吞噬作用的感染方式，孢子在弹出极管之前通过吞噬进入宿主细胞，转化为溶菌体，一些孢子在溶菌体中被消化，还有一些能够消化之前弹出极管将孢原质释放到宿主细胞内，完成入侵[32,33](图 1.2)。无论种方式，微孢子虫入侵宿主都离不开极管的弹出，这一过程包括了巨大力量累和控制释放，是一个快速并紧密相连的级联事件[2,34]。微孢子虫的发芽需要物理或化学因子的刺激，其中包括环境 pH 的变化、Ca2+、阴离子和阳离子、压变化、暴露于紫外辐射下或过氧化物中等条件[35-38]。这些物理或化学刺激微孢子虫内部渗透压升高。关于这种压力产生的机制有两种观点，一种认为子虫的孢壁上有特殊的跨膜水通道，水分可以快速特异的通过水通道蛋uaporin)运输到孢原质内，导致孢内压力增大，引发孢子的发芽[23,39]。另一种认为，微孢子虫的海藻糖降解为葡萄糖和其他相关的代谢导致孢内葡萄糖浓升，促使水分进入孢子内部，孢子内压升高[40]。孢子内部具体发生了哪些分件最终导致极管的弹出尚未完全清楚。

虫的 EnP1 均含有 2～3 个糖胺聚糖的结合基序，体外实验表明外源1 通过自身肝素结合基序参与孢子的粘附过程，孢壁蛋白在孢子接近附过程中起着重要的作用，但具体作用机制尚不清楚[40,43]。抑制微过程会降低孢子的感染率，表明微孢子虫的粘附和侵染有着直接的目前认为微孢子虫弹出极管侵染宿主细胞的事件分为 5 个步骤：(胞的粘附；(2)孢子发芽；(3)孢子内部渗透压上升；(4)极管外翻弹通过极管释放到宿主细胞的细胞质中[40,41]。孢子虫的生活史孢子虫作为严格寄生于宿主细胞内的微生物，只有在感染宿主细胞的生活周期。微孢子虫的生活周期不仅是分类的依据也是研究侵染径。各国学者对微孢子虫的生活史进行了深入、细致的研究，从不子虫的生活周期进行界定，尽管结果存在差异，但总体上可以分为期(infective phase)、裂殖增殖期(proliferative phase)和孢子增殖期(,23](图 1.3)。


本文编号：3248533