番茄、马铃薯及西瓜病毒病的病原鉴定
发布时间：2021-07-11 12:57
近年来,番茄斑萎病毒（Tomato spotted wilt orthotospovirus,TSWV）在多地发生严重危害。采用小RNA深度测序和RT-PCR相结合的方法对采自黑龙江省的番茄病毒病样品中病毒进行了鉴定。提取番茄样品的RNA并构建小RNA文库进行测序,数据分析发现比对至TSWV基因组的reads数占比对到病毒核酸总reads数的92.64%,表明侵染此番茄样品的病原物可能是TSWV。利用RT-PCR方法进一步确定侵染此番茄样品的病毒为TSWV,将其命名为TSWV-HLJ1。对TSWV-HLJ1的全序列进行分析并构建系统进化树,结果表明TSWV-HLJ1与TSWV云南甜椒分离物YNgp的亲缘关系最近。介体传毒试验表明,西花蓟马可将TSWV-HLJ1传播感染健康寄主植物,且健康蓟马对带毒辣椒的选择性更强。汁液摩擦试验表明,TSWV黑龙江分离物能够侵染本氏烟、辣椒和番茄。这是我国首次在黑龙江省报道TSWV。2016年,我们在海南发现了呈严重斑驳、皱缩症状的番茄植株,利用Dot-ELISA和RT-PCR技术相结合的方法对病原进行鉴定。Dot-ELISA结果显示,感病番茄样品的汁液...
【文章来源】：中国农业科学院北京市
【文章页数】：78 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
疑似感病的番茄样品症状
士学位论文 第二章 黑龙江省番茄斑萎病小 RNA 高通量测序结果及数据分析提取番茄样品的的总 RNA，送到北京诺禾致源生物公司小RNA深度测序共得到14 800 277条reads，经质量控制后s 占总 reads 数量的 97.43%，其中 unique reads 3 258 792上 TSWV 三条链的 reads 数占比对到病毒数据库的总 rea到参考病毒序列的小 RNA 进行分析，结果显示番茄样品在 20～24 nt,其中 21 nt 和 22 nt 大小的小 RNA 占得比例5.43%（图 2.2）。
图 2.3 不同 TSWV 分离物全基因组核苷酸序列的系统进化树。a，b 和 c 分别为 TSWV 分离物的 RNA L、RNA M、RNA S 全核苷酸序列的系统进化树Fig.2.3 Phylogenetic tree based on full length genome nucleotide sequences of different isolates of TSWV. a, b and c arethe phylogenetic tree based on TSWV RNA L, RNA M and RNA S nucleotide sequences, respective2.3.4 西花蓟马对 TSWV-HLJ1 的传播为了探究西花蓟马能否传播 TSWV-HLJ1，将 6 株健康的番茄和辣椒植株分别与 30 头饲毒的西花蓟马成虫一同置于网笼中，以健康蓟马取食的植株作为对照，2 周后发现，饲毒蓟马取食的番茄和辣椒植株呈现黄化、坏死等明显的病毒侵染症状（2.4a）。单株提取番茄和辣椒样品的 RNA，利用 TSWV-HLJ1 的特异性引物 TSWV-M-5F/TSWV-M-3R 对番茄和辣椒植株进行 RT-PCR 检测，12 株植株均扩增到目的条带，而阴性对照中未检测得到任何条带（图 2.4b）。以上结果证明，西花蓟马可将 TSWV- HLJ1 传播感染健康寄主植物。
【参考文献】：
期刊论文
[1]烟草花叶病毒山西番茄分离物的全基因组序列测定及分析[J]. 庞小静,赵慧琪,王德富,刘勇,牛颜冰. 中国蔬菜. 2017(06)
[2]烟草花叶病毒辽宁分离物Northern杂交检测体系的建立[J]. 李艳丽,安梦楠,王冠中,吴元华. 生物技术通报. 2017(04)
[3]植物病毒检测方法的研究进展[J]. 陶源,吴兴泉. 分子植物育种. 2017(07)
[4]云南天竺葵上发现番茄斑萎病毒[J]. 朱敏,王泊婷,黄莹,李佳,陶小荣. 南京农业大学学报. 2017(03)
[5]山东烟台地区发生番茄斑萎病毒病危害[J]. 李洁,迟胜起,杨勤民,丁天波,褚栋. 植物保护. 2017(01)
[6]利用小RNA高通量测序技术检测玉米病毒[J]. 王芳,高正良,周本国,赵霞. 植物病理学报. 2017(03)
[7]云南西瓜银灰斑驳病毒病害的鉴定[J]. 尹跃艳,卢训,李婷婷,李红祥,郭淼,赵丽玲,张晓云,丁铭. 植物病理学报. 2016(04)
[8]西瓜花叶病毒（WMV）单克隆抗体的制备及其应用[J]. 陈浙,宋革,周雪平,吴建祥. 中国农业科学. 2016(14)
[9]李宝聚博士诊病手记(九十三) 番茄斑萎病毒病在宁夏的发现与防治[J]. 曹金强,谢学文,柴阿丽,李宝聚. 中国蔬菜. 2016(04)
[10]介体蓟马传播番茄斑萎病毒能力的研究进展[J]. 卢小雨,林伟,张伟锋,徐浪,郑耘,余道坚. 湖北农业科学. 2016(06)
博士论文
[1]番茄花叶病毒（ToMV）和黄瓜花叶病毒（CMV）单克隆抗体制备及ToMV在烟草上致病分子机理研究[D]. 于翠.浙江大学 2004
硕士论文
[1]西花蓟马在不同寄主植物上对番茄斑萎病毒传播效率的研究[D]. 张玉秀.南京农业大学 2013
本文编号：3278139
【文章来源】：中国农业科学院北京市
【文章页数】：78 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
疑似感病的番茄样品症状
士学位论文 第二章 黑龙江省番茄斑萎病小 RNA 高通量测序结果及数据分析提取番茄样品的的总 RNA，送到北京诺禾致源生物公司小RNA深度测序共得到14 800 277条reads，经质量控制后s 占总 reads 数量的 97.43%，其中 unique reads 3 258 792上 TSWV 三条链的 reads 数占比对到病毒数据库的总 rea到参考病毒序列的小 RNA 进行分析，结果显示番茄样品在 20～24 nt,其中 21 nt 和 22 nt 大小的小 RNA 占得比例5.43%（图 2.2）。
图 2.3 不同 TSWV 分离物全基因组核苷酸序列的系统进化树。a，b 和 c 分别为 TSWV 分离物的 RNA L、RNA M、RNA S 全核苷酸序列的系统进化树Fig.2.3 Phylogenetic tree based on full length genome nucleotide sequences of different isolates of TSWV. a, b and c arethe phylogenetic tree based on TSWV RNA L, RNA M and RNA S nucleotide sequences, respective2.3.4 西花蓟马对 TSWV-HLJ1 的传播为了探究西花蓟马能否传播 TSWV-HLJ1，将 6 株健康的番茄和辣椒植株分别与 30 头饲毒的西花蓟马成虫一同置于网笼中，以健康蓟马取食的植株作为对照，2 周后发现，饲毒蓟马取食的番茄和辣椒植株呈现黄化、坏死等明显的病毒侵染症状（2.4a）。单株提取番茄和辣椒样品的 RNA，利用 TSWV-HLJ1 的特异性引物 TSWV-M-5F/TSWV-M-3R 对番茄和辣椒植株进行 RT-PCR 检测，12 株植株均扩增到目的条带，而阴性对照中未检测得到任何条带（图 2.4b）。以上结果证明，西花蓟马可将 TSWV- HLJ1 传播感染健康寄主植物。
【参考文献】：
期刊论文
[1]烟草花叶病毒山西番茄分离物的全基因组序列测定及分析[J]. 庞小静,赵慧琪,王德富,刘勇,牛颜冰. 中国蔬菜. 2017(06)
[2]烟草花叶病毒辽宁分离物Northern杂交检测体系的建立[J]. 李艳丽,安梦楠,王冠中,吴元华. 生物技术通报. 2017(04)
[3]植物病毒检测方法的研究进展[J]. 陶源,吴兴泉. 分子植物育种. 2017(07)
[4]云南天竺葵上发现番茄斑萎病毒[J]. 朱敏,王泊婷,黄莹,李佳,陶小荣. 南京农业大学学报. 2017(03)
[5]山东烟台地区发生番茄斑萎病毒病危害[J]. 李洁,迟胜起,杨勤民,丁天波,褚栋. 植物保护. 2017(01)
[6]利用小RNA高通量测序技术检测玉米病毒[J]. 王芳,高正良,周本国,赵霞. 植物病理学报. 2017(03)
[7]云南西瓜银灰斑驳病毒病害的鉴定[J]. 尹跃艳,卢训,李婷婷,李红祥,郭淼,赵丽玲,张晓云,丁铭. 植物病理学报. 2016(04)
[8]西瓜花叶病毒（WMV）单克隆抗体的制备及其应用[J]. 陈浙,宋革,周雪平,吴建祥. 中国农业科学. 2016(14)
[9]李宝聚博士诊病手记(九十三) 番茄斑萎病毒病在宁夏的发现与防治[J]. 曹金强,谢学文,柴阿丽,李宝聚. 中国蔬菜. 2016(04)
[10]介体蓟马传播番茄斑萎病毒能力的研究进展[J]. 卢小雨,林伟,张伟锋,徐浪,郑耘,余道坚. 湖北农业科学. 2016(06)
博士论文
[1]番茄花叶病毒（ToMV）和黄瓜花叶病毒（CMV）单克隆抗体制备及ToMV在烟草上致病分子机理研究[D]. 于翠.浙江大学 2004
硕士论文
[1]西花蓟马在不同寄主植物上对番茄斑萎病毒传播效率的研究[D]. 张玉秀.南京农业大学 2013
本文编号：3278139
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