白星花金龟幼虫血腔注射干扰体系构建

发布时间：2021-07-12 05:33

　　本研究针对重要的农业害虫白星花金龟Protaetia brevitarsis幼虫,建立RNA干扰体系,以期为免疫相关基因功能研究奠定基础。通过血腔注射dsRNA,成功干扰了肽聚糖识别蛋白（peptidoglycan-recognition protein LB,PGRP-LB）基因的表达,发现dsRNA注射量为9μg,注射后48 h取样,pgrp-lb基因沉默效率最高。通过血腔注射对白星花金龟无杀虫活性的Bt菌株G03,发现pgrp-lb基因沉默破坏了白星花金龟幼虫的免疫防御系统,显著提高了白星花金龟对G03菌株的敏感性。表达免疫识别基因dsRNA菌株的构建,将为白星花金龟的生物防治提供新思路。 

【文章来源】：植物保护. 2020,46(04)北大核心CSCD

【文章页数】：8 页

【图文】：

dsRNA注射后不同时间采样目的基因

为了进一步分析免疫相关蛋白PGRP-LB在鞘翅目及其他昆虫中的亲缘关系并预测其生物学功能,构建了PGRP-LB蛋白亲缘关系树。其中,白星花金龟与鞘翅目多食亚目的食粪金龟Onthophagus taurus序列相似程度较高,说明两者遗传关系较为接近,PGRP-LB蛋白序列具有较高的相似性,这与物种亲缘关系分布一致。说明了其PGRP-LB蛋白在功能和结构上与已报道的其他鞘翅目昆虫相似(图1)。2.2 pgrp-lb基因RNA干扰载体构建

通过在线预测(http://rnaidesigner.thermofisher.com/rnaiexpress/)蛋白表达的ORF区541 bp位点到1 207 bp位点中潜在的RNAi靶位点,在734～1 059 bp位点处得到10个可能的RNAi位点,所以选择了该325 bp序列作为干扰片段进行克隆。同时以实验室已有的GFP蛋白核酸序列为模板,对其中173～677 bp片段进行克隆。将目的片段和L4440载体进行双酶切并连接,成功构建了L4440-pgrp-lb及L4440-gfp重组质粒(图2)。2.2.2 pgrp-lb-dsRNA及gfp-dsRNA的诱导表达

【参考文献】：
期刊论文
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硕士论文
[1]蛴螬体内环境对Bt杀虫活性的影响[D]. 黄颖.中国农业科学院 2017
[2]小菜蛾免疫Bt动力学的DGE分析及其PGRP-LB基因的克隆[D]. 张玉清.华南农业大学 2016
[3]PGRP-LB和PGRP-SB基因在橘小实蝇免疫及肠道微生物调控中的作用研究[D]. 王爱琳.华中农业大学 2015
[4]白星花金龟生物学及其对玉米秸秆取食习性的研究[D]. 杨诚.山东农业大学 2014



本文编号：3279312