大豆疫霉OG5 1 54821新型外泌蛋白家族部分成员功能鉴定和ADA2基因在植物免疫过程中的作用

发布时间：2021-07-18 14:25

　　大豆根腐病是大豆生产上的毁灭性病害之一,是一种典型的土传性病害,其中部分病害就是由大豆疫霉（Phytophthorasojae）侵染大豆引起的。由大豆疫霉单独引起的生产损失在世界范围内每年达到了 10-20亿美元。大豆疫霉隶属于卵菌,呈丝状生长,在进化上与藻类相近,但是与真菌相差甚远。生物信息学分析发现在大豆疫霉中存在超过400个RXLR效应分子。越来越多的研究证明,效应分子对于病原菌的侵染过程中发挥着至关重要的作用,能够从多个层面,以不同的机制完成侵染过程。利用植物表达载体对OG5_<sub>154821外泌家族蛋白的功能进行研究。在大豆疫霉的基因组中存在着许多的外泌蛋白基因。除了典型的RXLR,CRN和NLP等家族外,还有许多功能未知的蛋白家族。通过生物信息学分析筛选到OG5₁54821外泌家族,在侵染过程中高表达。利用植物表达载体在烟草上过表达该家族的部分成员基因,筛选到候选效应分子Ps₁28701能够引起细胞坏死,SignalP3.0在线预测发现,该候选效应分子具有信号肽,利用酵母信号肽序列预测系统对其... 

【文章来源】：南京农业大学江苏省 211工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：87 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图１－３?ＣＲＮ类效应分子的结构分析

?下篇研宄内容?第一章大豆疫霉ＯＧ５＿１５４８２１新型外泌蛋白家族功能鉴定???１．６利用酵母系统验证信号肽的功能??１．６．１重组质粒的构建??利用信号肽在线预测工具?Ｓｉｇｎａｌ?Ｐ?３，０（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｃｂｓ．ｄｔｕ．ｄｋ／ｓｅｒｖｉｃｅｓ／ＳｉｇｎａｌＰ－３．０／）??对目的蛋白序列进行预测，然后将预测到的信号肽氨基酸残疾序列构建在??ｐＳＵＣ２Ｔ７Ｍ１３０ＲＩ（ｐＳＵＣ２）载体上，该载体含有一个缩短的逆转录酶基因ＳＵＣ２，但??是缺少起始密码子和信号肽（Ｊａｃｏｂｓ?ａ／．，１９９７），载体上含有ＥｃｏＲ?Ｉ和Ｘｈｏ丨两个??限制性内酶切位点用于将目的基因片段构建在载体上（图丨－１）。??

?１．９．２?ＳｇＲＮＡ?的克隆??在大豆疫霉中，用ｐＹＦ２．２－ＧＦＰ－Ｒｉｂｏ－ｇＲＮＡ作为ｓｇＲＮＡ的载体图（图１－２），??ＲＰＬ４１为启动子，用ＲＮＡ聚合酶ＩＩ型调控元件来调控ＳｇＲＮＡ的转录。同时在ｓｇＲＮＡ??的５＇和３＇端同时引入了核糖酶来移除围绕在ｓｇＲＮＡ周围的过多的核苷酸从而保证??ｓｇＲＮＡ在转录过程中的准确性（图１－２）。核糖酶的设计是根据Ｇａｏ?＆?Ｚｈａｏ在２０１４年??发表的文章中提供的方法（Ｇａｏ?２０１４）。从给出的图示中可以看到，两个剪刀状的??位置即为ｓｇＲＮＡ的剪切位点。为了确保ＨＨ－Ｒｊｂｏ形成正确的二级结构来发挥核糖酶??功能，在我们设计靶标序列引物时，根据２０?ｂｐ的靶序列，应在ＨＨ－Ｒｉｂｏ区域的前??后设计６个碱基的互补序列，如图１－３中绿色标记的碱基序列所示。??ｐ－?．ｈ?ｙ????ｐＹＦ２．２－ＧｆＰ－Ｒｉｂｏ－ｇＲＮＡ??ＵＡ?＾?产３，??Ｇ?Ｇ?ＡＵ?—〇?／??Ａ?Ｃ?Ｃ－Ｇ?Ｇ—Ｃ??ｒ、Ｕ?Ｇ－Ｃ＼?Ｕ－?Ａ??Ｃ?Ｃ?Ｇ－ｃ＼?Ｃ－Ｇ??Ｃ－Ｇ?＼?Ｃ－Ｇ??ＡＡＡ＇＇Ｕｆ，?＿?＼ｒ－ｃ?＼?Ａ－ｕ??〇Ａ?Ｇ?


本文编号：3289754