南方水稻黑条矮缩病毒非结构蛋白P6是病毒复制的关键因子

发布时间：2021-07-24 20:56

　　南方水稻黑条矮缩病毒（Southern rice black-streaked dwarf virus,SRBSDV）由介体白背飞虱传播,不经卵传播。SRBSDV编码的非结构蛋白P5-1、P6和P9-1是病毒复制和装配的场所—病毒原质（viroplasm）的组分。这三种非结构蛋白在病毒的复制过程中扮演着至关重要的作用。已知P6能分别与P5-1和P9-1互作,而P5-1和P9-1不能互作,那么这三种非结构蛋白在病毒原质的形成过程中是否由某一个蛋白起着决定性的作用,需要我们深入的研究。本实验首先通过免疫荧光标记技术在介体白背飞虱培养细胞中观察SRBSDV侵染后P5-1、P6和P9-1表达的先后顺序,结果发现当SRBSDV侵染18 h时,P9-1没有表达,P6的表达量稍多于P5-1,且以颗粒状形态分布在细胞质周围;36 h时,P5-1和P6都大量表达,而此时P9-1也开始少量表达;随着侵染时间的延长,P5-1,P6和P9-1的表达量都显著升高;72h时,三种非结构蛋白均匀分布在细胞质中。所以这三种蛋白表达的先后顺序为P6,P5-1和P9-1。其次,利用RNAi（RNAinterference... 

【文章来源】：福建农林大学福建省

【文章页数】：59 页

【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
1 前言
    1.1 南方水稻黑条矮缩病毒的研究概况
        1.1.1 南方水稻黑条矮缩病危害、发生特点和症状
        1.1.2 南方水稻黑条矮缩病的寄主及传播介体
        1.1.3 SRBSDV的基因组结构与功能
    1.2 SRBSDV侵染诱导形成的病毒原质形成机制
    1.3 昆虫细胞的培养及其应用
        1.3.1 昆虫细胞培养
        1.3.2 昆虫细胞在杆状病毒表达载体中的应用
        1.3.3 昆虫培养细胞在水稻呼肠孤病毒中的应用研究
    1.4 免疫荧光标记技术的特点及其应用
    1.5 RNA干扰(RNA interference,RNAi)的原理及应用
    1.6 本研究的目的和意义
2 材料和方法
    2.1 材料
        2.1.1 水稻和昆虫
        2.1.2 实验菌株和载体
        2.1.3 实验试剂
    2.2 实验方法
        2.2.1 体外培养白背飞虱细胞
        2.2.2 源于SRBSDV基因片段的dsRNA对病毒复制的影响
        2.2.3 免疫荧光标记检测dsRNA处理后的细胞
        2.2.4 RTqPCR检测dsRNA处理白背飞虱细胞对SRBSDV复制的影响
        2.2.5 Western blot检测dsRNA处理后病毒原质组分蛋白在白背飞虱细胞内表达量的变化
        2.2.6 重组穿梭载体的构建
        2.2.7 杆状病毒表达系统表达SRBSDVP5-1、P6、P9-1蛋白
3 结果与分析
    3.1 白背飞虱细胞的培养
    3.2 病毒原质组分蛋白在昆虫培养细胞内的表达
    3.3 dsRNA抑制病毒编码蛋白的表达对病毒复制的影响
        3.3.1 dsRNA抑制病毒编码蛋白的表达对侵染率的影响
        3.3.2 dsRNA抑制病毒编码蛋白的表达对病毒原质形态的影响
        3.3.3 RT-qPCR检测dsRNA处理对SRBSDV相关基因表达量的影响
        3.3.4 Western blot检测dsRNA处理对SRBSDV相关基因表达的影响
    3.4 目的载体的PCR验证
    3.5 杆状病毒表达载体在Sf9细胞中的表达
4 讨论
    4.1 培养细胞在病毒复制机制中的优势
    4.2 病毒原质组分蛋白的作用机制
参考文献
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]细胞共培养模型及其在中枢神经系统疾病研究中的应用[J]. 杨盛,何然,张飞燕,薛强,徐晓玉.  药学学报. 2016(03)
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[4]干扰水稻齿叶矮缩病毒（RRSV）非结构蛋白Pns6的表达阻碍病毒在褐飞虱体内的增殖[J]. 陈红燕,李俊钦,刘宇艳,郭年梅,魏太云,贾东升.  农业生物技术学报. 2015(11)
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博士论文
[1]橘小实蝇RNAi及其对RNAi的免疫耐受机制研究[D]. 李晓雪.华中农业大学 2015
[2]SRBSDV和RRSV在介体飞虱体内的侵染机理[D]. 贾东升.福建农林大学 2013

硕士论文
[1]利用RNAi技术鉴定SRBSDV在白背飞虱体内增殖的关键因子[D]. 曹金强.福建农林大学 2015
[2]橘小实蝇rpl19 dsRNA对橘园非靶标昆虫干扰效应研究[D]. 陈爱娥.华中农业大学 2014
[3]RNAi介导的百合双抗LMoV和CMV病毒的研究[D]. 徐雷锋.中国农业科学院 2014
[4]SRBSDV非结构蛋白P6在病毒侵染白背飞虱过程中的功能分析[D]. 郑胜兰.福建农林大学 2014
[5]南方水稻黑条矮缩病毒侵染细胞诱导形成病毒原质的机制[D]. 韩庆梅.福建农林大学 2013



本文编号：3301412