甘蔗黄叶病毒运动蛋白的原核表达和抗血清制备

发布时间：2021-07-26 13:42

　　甘蔗黄叶病毒（Sugarcane yellow leaf virus,ScYLV）属于黄症病毒科（Luteoviridae）、马铃薯卷叶病毒属（Polerovirus）,主要由蚜虫传播,能够侵染甘蔗、玉米等多种作物,引发严重的植物病害。本研究将编码ScYLV运动蛋白（Movement protein,MP）的基因连接到pDB-His-MBP原核表达载体上,转化到大肠杆菌菌株Rosetta中,经IPTG诱导,表达分子量大小约为70 kDa的融合蛋白,将纯化后的融合蛋白制备多克隆抗血清。利用western blot检测抗血清的效价为1∶128 000,灵敏度为1∶256,抗血清不与马铃薯卷叶病毒属（Polerovirus）的其它病毒以及黄症病毒属（Luteovirus）病毒发生交叉反应,具有很好的特异性。本文制备的ScYLV MP抗血清可以用于ScYLV的检测,并为深入研究ScYLV与寄主的相互作用等问题提供材料基础。 

【文章来源】：植物病理学报. 2020,50(06)北大核心CSCD

【文章页数】：8 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 材料
    1.2 方法
        1.2.1 ScYLV MP原核表达载体的构建
        1.2.2 ScYLV MP原核表达和纯化
        1.2.3 多克隆抗血清的制备
        1.2.4 pMDC32-MPScYLV农杆菌转化和浸润接种
        1.2.5 植物组织总蛋白提取
        1.2.6 抗血清效价检测
        1.2.7 抗血清灵敏度检测
        1.2.8 抗血清特异性检测
        1.2.9 抗血清田间应用
2 结果与分析
    2.1 构建获得ScYLV MP重组原核表达载体
    2.2 利用表达纯化融合蛋白制备ScYLV MP抗血清
    2.3 明确ScYLV MP抗血清的效价
    2.4 明确ScYLV MP抗血清的灵敏度
    2.5 明确ScYLV MP抗血清的特异性
    2.6 模拟天然寄主甘蔗感染ScYLV的抗血清检测
3 讨论与展望


【参考文献】：
期刊论文
[1]甘蔗黄叶病毒外壳蛋白基因原核表达研究[J]. 黄振瑞,孟岩,高三基,许莉萍,郭晋隆.  植物遗传资源学报. 2007(01)



本文编号：3303674