家蚕二分浓核病毒基因中特征性加尾序列的研究
发布时间：2021-08-02 03:27
家蚕二分浓核病毒（Bombyx mori bidensovirus,BmBDV）是2012年国际病毒分类委员会（ICTV）新设立的二分DNA病毒科中的唯一病毒种。BmBDV是一种侵染家蚕中肠柱状细胞的病原,可引发家蚕罹患类似昆虫浓核症。其基因组由两条线性ssDNA分子组成（VD1;VD2）,并分别独立包装于不同的病毒衣壳中。VD1中分别编码主要衣壳蛋白（MCP）与DNA聚合酶（pPolB）的基因中3’端非翻译区部分相互重叠,形成了一个双功能加尾信号（BDVpA）,发挥着转录后修饰及有效终止蛋白表达的作用。在本研究中我们评估了这段简短的BDVpA序列对外源基因表达调控的影响。荧光显微技术检测可视化蛋白GFP的表达,定性分析BDVpA（63）与SV40polyA活性的强弱。构建以包含重叠区的BDVpA（63）为多聚腺苷酸化信号的gfp瞬时表达质粒（pT-p5-gfp-BDVp A（63）和pT-ie1-gfp-BDVp A（63））,并构建无polyA的gfp瞬时质粒作为阴性对照组。分别转染三种昆虫细胞（Hi5、BmN和Sf9）,荧光倒置显微镜观测细胞内的荧光。含有BDVpA（63）的转染...
【文章来源】：江苏大学江苏省
【文章页数】：83 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
BmBDV基因组VD1的结构特点（引自王永杰）
图 1.3 多聚腺苷酸化的过程Fig1.3 The process of polyadenylation.3.2 多聚腺苷酸化的调控机制目前研究比较透彻的主要是真核基因的多聚腺苷酸化，含有多个 polyA 位近端的 polyA 位点在基因的外显子或者内含子上，则形成的转录本会缺失近 polyA 位点与远端的 polyA 间的内含子与外显子区域。当近端 polyA 位点位’UTRs 时，则产生具有不同长度 3’UTRs 的 mRNA 转录本，但编码相同的蛋1]。此外，有关研究还发现 polyA 位点附近的 DNA 甲基化的状态可能与多聚酸化 polyA 位点的选择有关，但其具体的调控机制有待深入研究[48]。影响多聚腺苷酸化调控机制的因素主要分为以下三类：特异性 polyA 因子为 polyA 位点选择的核心调节因子，但一些蛋白因子和辅助序列也对 polyA
于昆虫转基因载体中，尤其是 piggyBac 转座载体限广泛，对生产外源蛋白及分子育种等方面的研究有着转基因载体外，作为四大表达系统之一的昆虫杆状病动物的病毒的加尾信号 SV40 polyA，在多角体启动白。目前 Bac-to-Bac 表达系统运用最为广泛，改变了可在昆虫细胞内表达外源蛋白[67]。陆续出现的多聚腺苷酸化信号如 HSVtk polyA（单纯 polyA（人工合成的人源化生长因子）、sNRP-1 polyA被运用于克隆或者病毒载体的构建[68]。但是这些多哺乳动物有关，可能在昆虫细胞中表达外源基因存在成潜在的影响。
【参考文献】：
期刊论文
[1]家蚕二分浓核病毒感染家蚕后的释放动态研究[J]. 胡朝阳,张晓龙,张清,刘伟,李国辉,姚勤. 微生物学通报. 2017(02)
[2]蛋白质起始的DNA病毒复制机制[J]. 邢亚丽,司亚运,袁弋,张清,姚勤,陈克平. 微生物学杂志. 2015(03)
[3]可选择性多聚腺苷酸化的生物学功能[J]. 杨亮,张红星,崔英,周钢桥. 军事医学. 2015(05)
[4]家蚕二分浓核病毒在家蚕细胞中的体外拯救[J]. 张苗苗,马瑛,潘晓利,胡朝阳,李国辉,司亚运,邢亚丽,陈克平,姚勤. 生物工程学报. 2015(01)
[5]家蚕二分浓核病毒DNA聚合酶基因启动子P97的研究[J]. 马瑛,吕鹏,张苗苗,胡朝阳,李国辉,陈克平,姚勤. 蚕业科学. 2013(04)
[6]家蚕二分浓核病毒VD1-ORF4基因截短多肽的表达和抗体制备[J]. 李国辉,王鹏,胡朝阳,姚勤. 生物技术通报. 2012(11)
[7]双荧光素酶报告基因系统的应用研究进展[J]. 耿德玉,原媛,郭华荣. 科技资讯. 2012(21)
[8]家蚕细小病毒样病毒的研究进展[J]. 李光田,郭旭丽,朱守林,马瑛,胡朝阳,李国辉,陈克平,姚勤. 生命科学. 2012(03)
[9]SV40 PolyA序列及其AATAAA信号对上游GFP基因表达及转录终止的影响[J]. 李书平,冯晶晶,王红钢,王秀芳,吕占军. 遗传. 2012(01)
[10]家蚕浓核病毒BmDNV-3（中国株）VD1基因组结构与转录分析[J]. 王永杰,姚勤,陈克平,韩序. 生物工程学报. 2006(05)
硕士论文
[1]家蚕二分浓核病毒感染的家蚕连续病理变化研究[D]. 张晓龙.江苏大学 2016
[2]家蚕二分浓核病毒线性化基因组的拯救与重组病毒的研究[D]. 张盼盼.江苏大学 2016
本文编号：3316794
【文章来源】：江苏大学江苏省
【文章页数】：83 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
BmBDV基因组VD1的结构特点（引自王永杰）
图 1.3 多聚腺苷酸化的过程Fig1.3 The process of polyadenylation.3.2 多聚腺苷酸化的调控机制目前研究比较透彻的主要是真核基因的多聚腺苷酸化，含有多个 polyA 位近端的 polyA 位点在基因的外显子或者内含子上，则形成的转录本会缺失近 polyA 位点与远端的 polyA 间的内含子与外显子区域。当近端 polyA 位点位’UTRs 时，则产生具有不同长度 3’UTRs 的 mRNA 转录本，但编码相同的蛋1]。此外，有关研究还发现 polyA 位点附近的 DNA 甲基化的状态可能与多聚酸化 polyA 位点的选择有关，但其具体的调控机制有待深入研究[48]。影响多聚腺苷酸化调控机制的因素主要分为以下三类：特异性 polyA 因子为 polyA 位点选择的核心调节因子，但一些蛋白因子和辅助序列也对 polyA
于昆虫转基因载体中，尤其是 piggyBac 转座载体限广泛，对生产外源蛋白及分子育种等方面的研究有着转基因载体外，作为四大表达系统之一的昆虫杆状病动物的病毒的加尾信号 SV40 polyA，在多角体启动白。目前 Bac-to-Bac 表达系统运用最为广泛，改变了可在昆虫细胞内表达外源蛋白[67]。陆续出现的多聚腺苷酸化信号如 HSVtk polyA（单纯 polyA（人工合成的人源化生长因子）、sNRP-1 polyA被运用于克隆或者病毒载体的构建[68]。但是这些多哺乳动物有关，可能在昆虫细胞中表达外源基因存在成潜在的影响。
【参考文献】：
期刊论文
[1]家蚕二分浓核病毒感染家蚕后的释放动态研究[J]. 胡朝阳,张晓龙,张清,刘伟,李国辉,姚勤. 微生物学通报. 2017(02)
[2]蛋白质起始的DNA病毒复制机制[J]. 邢亚丽,司亚运,袁弋,张清,姚勤,陈克平. 微生物学杂志. 2015(03)
[3]可选择性多聚腺苷酸化的生物学功能[J]. 杨亮,张红星,崔英,周钢桥. 军事医学. 2015(05)
[4]家蚕二分浓核病毒在家蚕细胞中的体外拯救[J]. 张苗苗,马瑛,潘晓利,胡朝阳,李国辉,司亚运,邢亚丽,陈克平,姚勤. 生物工程学报. 2015(01)
[5]家蚕二分浓核病毒DNA聚合酶基因启动子P97的研究[J]. 马瑛,吕鹏,张苗苗,胡朝阳,李国辉,陈克平,姚勤. 蚕业科学. 2013(04)
[6]家蚕二分浓核病毒VD1-ORF4基因截短多肽的表达和抗体制备[J]. 李国辉,王鹏,胡朝阳,姚勤. 生物技术通报. 2012(11)
[7]双荧光素酶报告基因系统的应用研究进展[J]. 耿德玉,原媛,郭华荣. 科技资讯. 2012(21)
[8]家蚕细小病毒样病毒的研究进展[J]. 李光田,郭旭丽,朱守林,马瑛,胡朝阳,李国辉,陈克平,姚勤. 生命科学. 2012(03)
[9]SV40 PolyA序列及其AATAAA信号对上游GFP基因表达及转录终止的影响[J]. 李书平,冯晶晶,王红钢,王秀芳,吕占军. 遗传. 2012(01)
[10]家蚕浓核病毒BmDNV-3（中国株）VD1基因组结构与转录分析[J]. 王永杰,姚勤,陈克平,韩序. 生物工程学报. 2006(05)
硕士论文
[1]家蚕二分浓核病毒感染的家蚕连续病理变化研究[D]. 张晓龙.江苏大学 2016
[2]家蚕二分浓核病毒线性化基因组的拯救与重组病毒的研究[D]. 张盼盼.江苏大学 2016
本文编号：3316794
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