稻曲病菌候选效应蛋白的功能研究

发布时间：2021-08-02 23:30

　　稻曲病是一种由稻曲病菌侵染引起的水稻穗部病害,近年来在我国发生日趋严重。稻曲病不仅影响水稻的产量和品质,而且在侵染过程中能够产生毒素,对人和动物的健康产生严重威胁。因此,稻曲病的防控是我国水稻生产的重要课题之一。本研究以稻曲病菌侵染阶段分泌的效应子为试验材料,在前期研究基础上,采用农杆菌介导的植物瞬时表达系统从预测的候选效应子中筛选能够抑制Bax引起的程序性细胞死亡（PCD）或者能够诱发过敏性坏死反应（HR）的效应子。本研究共筛选到12个能够抑制Bax引起坏死的效应子,其中3个表现为全长可以抑制,而缺失信号肽不能抑制;8个则为全长不能抑制坏死,信号肽缺失可以抑制坏死;另一个效应子GME₃212全长和缺失信号肽都可以抑制坏死。信号肽分泌功能验证表明,除GME₃186外,其余11个候选效应子的信号肽均具有分泌功能。辣椒疫霉侵染试验结果表明,可以抑制坏死的效应子多数可促进病原菌的侵染。同时发现GME₅236能够引起细胞坏死,亚细胞定位显示其有可能定位于叶绿体上,并且可以促进辣椒疫霉的侵染。序列分析表明GME₅

【文章来源】：华中农业大学湖北省 211工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：60 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

植物免疫系统的“zigzag”模型(JonesandDangl2006)

图 2-1 PVX 瞬时表达载体构建示意图Fig. 2-1 PVX transient expression vector construction diagram的克隆扩增候选效应子编码基因的引物详见附表 1，以被稻曲病 cDNA 为模板扩增目的基因。体系(25 μl)： 0.5 μl primer(10mM) 0.5 μlprimer(10mM) 0.5 μldNTPs 0.5 μl Buffer 2.5 μl0.3 μl20.2 μl程序：

Bax 是小鼠促凋亡蛋白，在本氏烟叶片上瞬时表达可以诱发本氏烟叶片的程序性细胞死亡(Programmed Cell Death, PCD)。本研究目的是通过本氏烟瞬时表达系统鉴定可以引起细胞死亡的效应子，或可以抑制 Bax 引起的细胞死亡的效应子。首先采用电击转化法将PVX瞬时表达载体(25个全长，25个信号肽缺失突变体)转入农杆菌中，并通过农杆菌渗透法在烟草叶片上表达，24h 后在以同样的方法在相同接种区域表达 BAX，筛选出可以抑制或引起细胞死亡的效应子。结果显示，在候选的 25 个效应子及其信号肽缺失突变体中，有 3 个效应子表现为全长可以抑制细胞死亡，而信号肽缺失突变体则不能抑制，分别为 GME_4848、GME_7290、GME_8464；有 8 个效应子则相反，表现为信号肽缺失突变体可以抑制细胞死亡，而全长则不能抑制，分别为 GME_1512、GME_2053、GME_3093、GME_3186、GME_5236、GME_5291、GME_7123、GME_10053；还有 1 个效应子GME_3212 的试验结果表现为全长和信号肽缺失突变体都可以抑制细胞死亡。此外发现全长的 GME_5236 可以引起细胞死亡，但时间比 Bax 更长，需要 5d 左右。诱发的死亡也相对比 Bax 弱(表 2-2)。


本文编号：3318479