水稻白叶枯病菌Ⅲ型分泌系统转位子的鉴定与效应因子XopN功能的研究
发布时间：2021-08-13 12:37
水稻白叶枯病菌Xoo（Xanthomonas oryzfae pv.oryzae,Xoo）能利用Ⅲ型分泌系统T3SS（Typethreesecretionsyetem）向细胞外分泌效应因子,从而表现出水稻白叶枯病菌的毒性。转位子是Ⅲ型分泌系统的重要组分,位于Ⅲ型分泌系统装置顶端,通常由两个疏水性转位子蛋白和一个亲水性转位子蛋白组成。有研究显示,水稻白叶枯病菌Xoo的亲水性转位子蛋白Hpa1xoo和疏水性转位子蛋白HrpFxoo是Ⅲ型分泌系统的重要组分,它们影响着水稻白叶枯病菌PX099A在水稻上的致病性。因此使用GAL4和膜酵母双杂交系统验证Hpa1xoo和HrpFxoo两者间是否存在直接互作,结果表明,两种蛋白之间并不存在直接互作。设计实验将hpa1和hrpF基因分别连接到表达载体pHM1上,并在设计hpa1引物时加上flag标签,在设计hrpF引物时加上his标签,通过Western bloting实验显示蛋白表达正确。之后分别通过Hpa1-Flag蛋白和HrpF-His蛋白在PXO99A总蛋白中进行免疫共沉淀（CO-IP）实验,然后将免疫沉淀的互作结合蛋白样品送公司进行质谱鉴定。...
【文章来源】：南京农业大学江苏省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：74 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图２－１?ＴＡＬ效应蛋白的结构和功能解析（Ｓｃｈｏｍａｃｋｅｔａｌ．，２０１３）??Ｆｉｇ．２－１?Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ?ａｎｄ?Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ?Ａｎａｌｙｓｉｓ?ｏｆ?ＴＡＬ?Ｅｆｆｅｃｔｏｒ?Ｐｒｏｔｅｉｎ??
２?ｎｏｎ－ＴＡＬ效应蛋白的研究进展??２．１?ｎｏｎ－ＴＡＬ效应蛋白的起源和特征??在黄单胞菌三型分泌系统分泌的效应因子中，通过基因组测序后结果的对比分发现，还存在一些ｎｏｎ－ＴＡＬ效应因子的类型（Ｚｈａｏｅｔａｌ．，２０１３）。ｎｏｎ－ＴＡＬ效应因在于绝大多数的黄单胞菌属中，主要由分泌或者信号转运区（ｓｅｃｒｅｔｉｏｎ／ｔｒａｎｓｌｏｃａｔｉｏｉｇｎａｌ）和特异功能结构域（ｆｕｎｃｔｉｏｎ?ｄｏｍａｉｎ）两部分组成（图２－３）。ｎｏｎ－ＴＡＬ效应一般具有下列共同的特征：Ｉ．启动子区域存在ＨｒｐＸ特异性结合位点ＰＩＰ－ｂｏｘ和－１序列（ＴＴＣＧＢ－Ｎ１５－ＴＴＣＧＢ－Ｎ３０－３２－ＹＡＮＮＲＴ）?，?Ｂ?代表?Ｃ、Ｇ?或者?Ｔ；Ｙ?代表?Ｃ?；Ｒ代表Ａ、Ｇ或者Ｔ），通常受ＨｒｐＸ蛋白的调控；２．分泌信号区是由位于Ｎ＿端５０个特定氨基酸组成的，位于Ｎ－端的分泌信号肽和ｍＲＮＡ序列的特征成为了对ｎｏＴＡＬ?效应蛋白鉴定研究的依据?（赵帅，２０１１）?。?通过这些典型的特点，?研究人员在胞菌中鉴定了大量的ｎｏｎ－ＴＡＬ效应蛋白，尤其是Ｘｃｃ中（Ｊｉａｎｇ?ｅｔａｌ．?，２００６）。??通过对Ｘｏｏ和Ａｂｅ？菌株基因组序列对比分析，发现不同的菌株中包含着数量不?ｎｏｎ－ＴＡＬ?蛋白，在义〇〇?的?ＭＡＦＦ３１１０１８、ＫＡＣＣ１０３３１、ＰＸ０９９Ａ＊分别有?２４、１９、??
ｐＧＢＫＴ７、ｐＧＡＤＴ７中。“诱饵”蛋白Ｘ克隆ＢＤ载体中，表达ＢＤ／Ｘ融合蛋白；待测??试蛋白Ｙ克隆到ＡＤ载体中，表达ＡＤ／Ｙ融合蛋白，如果Ｘ蛋白与Ｙ蛋白之间有作??用，则ＤＮＡ－ＢＤ和ＡＤ同样被连在一起，激活下游基因的转录，表达报告基因（图１－??１）?〇??（￣Ｂａｊｔ?ｙ￣Ｌｉｂｒａｒｙ??Ｖ?ｐｒｏｔｅｉｎ?ｐｒ〇ｔｅｉｎ??＾??ＧＡＬＵＡＳ?ｍｉｎｉｍａｌ?ｐｒｏｍｏｔｅｒ?［??图１－１酵母ＧＡＬ４系统双杂交原理图（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ，２００７）??Ｆｉｇ．?１－１．Ｔｈｅ?ｔｗｏ－ｈｙｂｒｉｄ?ｐｒｉｎｃｉｐｌｅ?ｏｆ?ＧＡＬ４?ｓｙｓｔｅｍ??１．１３．２?ＬｉＡｃ介导的酵母转化法??（１）
【参考文献】：
期刊论文
[1]水稻白叶枯病菌Ⅲ型效应物基因hpaF与毒力相关[J]. 刘国芳,蒋蓉,苏辉昭,牛祥娜,玉延华,姜伟,何勇强. 华南农业大学学报. 2015(05)
[2]黄单胞菌Ⅲ型分泌系统效应蛋白的研究进展[J]. 易杰祥,景晓辉,吴伦英. 热带农业科学. 2014(08)
[3]水稻黄单胞菌三型分泌系统效应物的研究进展[J]. 赵帅,张子宇,冯家勋. 微生物学通报. 2011(12)
[4]植物病原细菌Ⅲ型效应子的双向作用[J]. 付月灵,刘峙,张文蔚,简桂良,齐放军. 中国生物防治. 2010(S1)
[5]植物病原菌黄单胞菌的分类研究进展[J]. 龙海,李一农,李芳荣,徐浪. 植物保护. 2010(05)
[6]水稻条斑病菌xopQ1Xoc在病程中功能的初步研究[J]. 裴俊国,邹丽芳,邹华松,陈功友. 中国农业科学. 2010(17)
博士论文
[1]Harpins蛋白诱导植物生长和防卫的信号传导交叉调控及植物互作因子的研究[D]. 任秀艳.南京农业大学 2007
[2]水稻黄单胞菌遗传操作体系的建立及hrp基因和avrBs3/pthA家族基因的功能研究[D]. 邹丽芳.南京农业大学 2007
硕士论文
[1]水稻白叶枯病菌XopP/Q和Hpa1蛋白病理功能与植物防卫反应研究[D]. 高蓉.南京农业大学 2013
[2]水稻细条斑病菌harpinXooc蛋白功能域研究[D]. 郭晓静.南京农业大学 2004
本文编号：3340441
【文章来源】：南京农业大学江苏省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：74 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图２－１?ＴＡＬ效应蛋白的结构和功能解析（Ｓｃｈｏｍａｃｋｅｔａｌ．，２０１３）??Ｆｉｇ．２－１?Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ?ａｎｄ?Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ?Ａｎａｌｙｓｉｓ?ｏｆ?ＴＡＬ?Ｅｆｆｅｃｔｏｒ?Ｐｒｏｔｅｉｎ??
２?ｎｏｎ－ＴＡＬ效应蛋白的研究进展??２．１?ｎｏｎ－ＴＡＬ效应蛋白的起源和特征??在黄单胞菌三型分泌系统分泌的效应因子中，通过基因组测序后结果的对比分发现，还存在一些ｎｏｎ－ＴＡＬ效应因子的类型（Ｚｈａｏｅｔａｌ．，２０１３）。ｎｏｎ－ＴＡＬ效应因在于绝大多数的黄单胞菌属中，主要由分泌或者信号转运区（ｓｅｃｒｅｔｉｏｎ／ｔｒａｎｓｌｏｃａｔｉｏｉｇｎａｌ）和特异功能结构域（ｆｕｎｃｔｉｏｎ?ｄｏｍａｉｎ）两部分组成（图２－３）。ｎｏｎ－ＴＡＬ效应一般具有下列共同的特征：Ｉ．启动子区域存在ＨｒｐＸ特异性结合位点ＰＩＰ－ｂｏｘ和－１序列（ＴＴＣＧＢ－Ｎ１５－ＴＴＣＧＢ－Ｎ３０－３２－ＹＡＮＮＲＴ）?，?Ｂ?代表?Ｃ、Ｇ?或者?Ｔ；Ｙ?代表?Ｃ?；Ｒ代表Ａ、Ｇ或者Ｔ），通常受ＨｒｐＸ蛋白的调控；２．分泌信号区是由位于Ｎ＿端５０个特定氨基酸组成的，位于Ｎ－端的分泌信号肽和ｍＲＮＡ序列的特征成为了对ｎｏＴＡＬ?效应蛋白鉴定研究的依据?（赵帅，２０１１）?。?通过这些典型的特点，?研究人员在胞菌中鉴定了大量的ｎｏｎ－ＴＡＬ效应蛋白，尤其是Ｘｃｃ中（Ｊｉａｎｇ?ｅｔａｌ．?，２００６）。??通过对Ｘｏｏ和Ａｂｅ？菌株基因组序列对比分析，发现不同的菌株中包含着数量不?ｎｏｎ－ＴＡＬ?蛋白，在义〇〇?的?ＭＡＦＦ３１１０１８、ＫＡＣＣ１０３３１、ＰＸ０９９Ａ＊分别有?２４、１９、??
ｐＧＢＫＴ７、ｐＧＡＤＴ７中。“诱饵”蛋白Ｘ克隆ＢＤ载体中，表达ＢＤ／Ｘ融合蛋白；待测??试蛋白Ｙ克隆到ＡＤ载体中，表达ＡＤ／Ｙ融合蛋白，如果Ｘ蛋白与Ｙ蛋白之间有作??用，则ＤＮＡ－ＢＤ和ＡＤ同样被连在一起，激活下游基因的转录，表达报告基因（图１－??１）?〇??（￣Ｂａｊｔ?ｙ￣Ｌｉｂｒａｒｙ??Ｖ?ｐｒｏｔｅｉｎ?ｐｒ〇ｔｅｉｎ??＾??ＧＡＬＵＡＳ?ｍｉｎｉｍａｌ?ｐｒｏｍｏｔｅｒ?［??图１－１酵母ＧＡＬ４系统双杂交原理图（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ，２００７）??Ｆｉｇ．?１－１．Ｔｈｅ?ｔｗｏ－ｈｙｂｒｉｄ?ｐｒｉｎｃｉｐｌｅ?ｏｆ?ＧＡＬ４?ｓｙｓｔｅｍ??１．１３．２?ＬｉＡｃ介导的酵母转化法??（１）
【参考文献】：
期刊论文
[1]水稻白叶枯病菌Ⅲ型效应物基因hpaF与毒力相关[J]. 刘国芳,蒋蓉,苏辉昭,牛祥娜,玉延华,姜伟,何勇强. 华南农业大学学报. 2015(05)
[2]黄单胞菌Ⅲ型分泌系统效应蛋白的研究进展[J]. 易杰祥,景晓辉,吴伦英. 热带农业科学. 2014(08)
[3]水稻黄单胞菌三型分泌系统效应物的研究进展[J]. 赵帅,张子宇,冯家勋. 微生物学通报. 2011(12)
[4]植物病原细菌Ⅲ型效应子的双向作用[J]. 付月灵,刘峙,张文蔚,简桂良,齐放军. 中国生物防治. 2010(S1)
[5]植物病原菌黄单胞菌的分类研究进展[J]. 龙海,李一农,李芳荣,徐浪. 植物保护. 2010(05)
[6]水稻条斑病菌xopQ1Xoc在病程中功能的初步研究[J]. 裴俊国,邹丽芳,邹华松,陈功友. 中国农业科学. 2010(17)
博士论文
[1]Harpins蛋白诱导植物生长和防卫的信号传导交叉调控及植物互作因子的研究[D]. 任秀艳.南京农业大学 2007
[2]水稻黄单胞菌遗传操作体系的建立及hrp基因和avrBs3/pthA家族基因的功能研究[D]. 邹丽芳.南京农业大学 2007
硕士论文
[1]水稻白叶枯病菌XopP/Q和Hpa1蛋白病理功能与植物防卫反应研究[D]. 高蓉.南京农业大学 2013
[2]水稻细条斑病菌harpinXooc蛋白功能域研究[D]. 郭晓静.南京农业大学 2004
本文编号：3340441
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