大蒜X病毒开放阅读框6编码p15蛋白的功能研究
发布时间：2021-08-23 22:49
大蒜属于百合科（Lilicacene）葱属植物（Alliums）。自然情况下大蒜为多种病毒复合侵染,主要包括马铃薯Y病毒属病毒,麝香石竹潜隐病毒属病毒和青葱X病毒属病毒。大蒜X病毒（Garlic virus X,GarVX）是导致大蒜病毒病害的重要病原之一,隶属葱X病毒属（Allexivirus）。Gar VX是单链正义RNA病毒,由8106个核苷酸组成,除去3’末端poly（A）结构外,具有六个开放阅读框（Open Reading Frame,ORF）,其中ORF6编码的15kDa（p15）蛋白推测为一个半胱氨酸富集蛋白（cysteine-rich proteins,CRPs）。据报道称,植物病毒编码的CRPs蛋白多为病毒致病的决定因子,同时许多病毒的CRPs具有沉默抑制作用,但p15具体功能未知。本研究中,我们以GarVX ORF6编码的p15蛋白为研究对象。构建p15蛋白的绿色荧光表达载体,通过共聚焦显微镜观察显示p15蛋白定位在细胞外周、细胞核和核仁中。马铃薯X病毒（Potato virus X,PVX）介导p15蛋白过量表达（PVX-p15）与PVX-GFP对比能引起本氏烟矮...
【文章来源】：沈阳农业大学辽宁省
【文章页数】：61 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
世界上的青葱属病毒的分布
图 1.3 植物抗病毒 RNA 沉默的示意图Fig. 1.3 Schematic representation of plant antiviral RNA silencin..(Hedil and Kormelink,2016)毒、双链 RNA 病毒和单链环状 DNA 病毒编码至少一种 VSR(Cao, Zhou,2005)。这些蛋白质的结构和序列是不同的，并且基于它们对转基因沉默的表面作用，它们可能靶向PTGS / RNAi 过程的不同阶段(Brigneti, Voinnet,1998, Dunoyer, Lecellier,2004, Dunoyer,Lecellier,2004, Kasschau and Carrington,1998, Voinnet, Pinto,2015)。近年来，不同沉默抑制子与 RNA 沉默途径的相互作用已经被深入研究。在转基因拟南芥中，许多抑制因子诱导严重的发育障碍，并且畸形表型与 miRNA-介导的其靶 mRNA 切割的抑制有关，例如 芜 菁 花叶 病 毒 (Turnip mosaic virus, TuMV) 的 P1 / HcPro ， 番 茄丛 矮 病 毒(Tombusvirus ，TBSV)的 P19，花生簇病毒(Pecluvirus, PCV)的 P15 和甜菜黄病毒(Closterovirus, BYV)的 P21 (Chapman, Prokhnevsky,2004, Dunoyer, Lecellier,2004, KD,Z,2003)。另一方面，有些抑制子的表达在植物中不引起表型变化，并且主要抑制沉默信号的短距离或长距离传播，如马铃薯X病毒(Potato virus X, PVX)的P25细胞间运动蛋白，芜菁皱缩病毒的 P38 外壳蛋白(TCV，卡莫维病毒)和苹果褪绿叶斑病毒(Trichovirus,ACLSV) P50 运动蛋白 (MPs)(Bayne, Rakitina,2005, Deleris, Gallego-Bartolome,2006,
图 2.1 pGEM-T Easy Vector 示意图Fig. 2.1 Schematic diagram of pGEM-T Easy Vector纯化GAPlasmid Mini Kit I(200)说明书操作。平板上挑取单菌落，接种到 5 mL 含有相应抗性的 LB 液体培养基-16 h。好的菌液加入到 1.5ml 的 EP 管中，室温下 10000 rpm 离心 1-2 m纸上几分钟，使培养液尽量流尽。0 μl SolutionⅠ(RNase A)，涡旋震荡，使菌液均匀悬浮。0 μl SolutionⅡ，轻柔的颠倒混匀，静置 2-5 min。0 μl SolutionⅢ，快速颠倒混匀，至产生白色絮状沉淀(为蛋白质in。取上清到 HiBind Miniprep Column 中，10000 rpm 离心 1 min。液，加入 500 μl Buffer HB，10000 rpm 离心 1 min。
【参考文献】：
期刊论文
[1]植物病毒性疾病概述[J]. 逯宇婷. 乡村科技. 2016(18)
本文编号：3358739
【文章来源】：沈阳农业大学辽宁省
【文章页数】：61 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
世界上的青葱属病毒的分布
图 1.3 植物抗病毒 RNA 沉默的示意图Fig. 1.3 Schematic representation of plant antiviral RNA silencin..(Hedil and Kormelink,2016)毒、双链 RNA 病毒和单链环状 DNA 病毒编码至少一种 VSR(Cao, Zhou,2005)。这些蛋白质的结构和序列是不同的，并且基于它们对转基因沉默的表面作用，它们可能靶向PTGS / RNAi 过程的不同阶段(Brigneti, Voinnet,1998, Dunoyer, Lecellier,2004, Dunoyer,Lecellier,2004, Kasschau and Carrington,1998, Voinnet, Pinto,2015)。近年来，不同沉默抑制子与 RNA 沉默途径的相互作用已经被深入研究。在转基因拟南芥中，许多抑制因子诱导严重的发育障碍，并且畸形表型与 miRNA-介导的其靶 mRNA 切割的抑制有关，例如 芜 菁 花叶 病 毒 (Turnip mosaic virus, TuMV) 的 P1 / HcPro ， 番 茄丛 矮 病 毒(Tombusvirus ，TBSV)的 P19，花生簇病毒(Pecluvirus, PCV)的 P15 和甜菜黄病毒(Closterovirus, BYV)的 P21 (Chapman, Prokhnevsky,2004, Dunoyer, Lecellier,2004, KD,Z,2003)。另一方面，有些抑制子的表达在植物中不引起表型变化，并且主要抑制沉默信号的短距离或长距离传播，如马铃薯X病毒(Potato virus X, PVX)的P25细胞间运动蛋白，芜菁皱缩病毒的 P38 外壳蛋白(TCV，卡莫维病毒)和苹果褪绿叶斑病毒(Trichovirus,ACLSV) P50 运动蛋白 (MPs)(Bayne, Rakitina,2005, Deleris, Gallego-Bartolome,2006,
图 2.1 pGEM-T Easy Vector 示意图Fig. 2.1 Schematic diagram of pGEM-T Easy Vector纯化GAPlasmid Mini Kit I(200)说明书操作。平板上挑取单菌落，接种到 5 mL 含有相应抗性的 LB 液体培养基-16 h。好的菌液加入到 1.5ml 的 EP 管中，室温下 10000 rpm 离心 1-2 m纸上几分钟，使培养液尽量流尽。0 μl SolutionⅠ(RNase A)，涡旋震荡，使菌液均匀悬浮。0 μl SolutionⅡ，轻柔的颠倒混匀，静置 2-5 min。0 μl SolutionⅢ，快速颠倒混匀，至产生白色絮状沉淀(为蛋白质in。取上清到 HiBind Miniprep Column 中，10000 rpm 离心 1 min。液，加入 500 μl Buffer HB，10000 rpm 离心 1 min。
【参考文献】：
期刊论文
[1]植物病毒性疾病概述[J]. 逯宇婷. 乡村科技. 2016(18)
本文编号：3358739
本文链接：https://www.wllwen.com/nykjlw/dzwbhlw/3358739.html
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