Pectobacterium中不同蛋白致病相关功能分析与糖代谢途径的进化比较
发布时间：2021-09-23 04:34
果胶杆菌属（Pectobacterium）细菌是十大植物病原细菌之一,主要引起植物的黑胫病和软腐病。果胶杆菌向胞外分泌一系列植物细胞壁降解酶类（PCWDEs）,如果胶酶、纤维素酶等,是其主要的致病因子。果胶杆菌寄主范围广泛,亚种多样性丰富,然而目前生产上仍缺乏有效的防治措施,选育抗病品种和提高栽培技术可适当减少黑胫病和软腐病造成的损失。随着马铃薯主粮化的推进,马铃薯在中国的生产面积在不断扩大,马铃薯软腐病和黑胫病将会成为制约该产业发展的重要病害。因此,研究果胶杆菌的致病机制,从而为有效防控马铃薯该类病害提供科学依据,具有深远的意义。本实验室前期研究P.carotovorum subsp.carotovorum菌株PccS 1与寄主黄花马蹄莲互作时,鉴定了 53个受寄主诱导的差异表达蛋白。本文通过实时荧光定量PCR对其中11个蛋白的编码基因进行了转录水平的分析,其中共10个基因在活体互作时的差异表达情况与蛋白水平的一致,验证了蛋白差异表达结果。为了进一步筛选与致病性有关的蛋白,对活体互作时在转录和翻译水平均显著上调表达的两个蛋白:调控Pectobacterium和Dickeya中胞外果胶...
【文章来源】：南京农业大学江苏省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：135 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
图３－１糖类代谢途径（摘自Ｔａｎｇｅ／ａ／，?２０１１）??Ｆｉｇ．?３－１?Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ?ｃａｔａｂｏｌｉｓｍ（Ｔａｎｇ?ｅｔ?ａｌ，?２０１１）??３．１．１?ＥＭＰ?途径??
ｐｙｒｕｖａｔｅ?＝＝＾?ＴＣＡ?ｃｙｃｌｅ??图３－１糖类代谢途径（摘自Ｔａｎｇｅ／ａ／，?２０１１）??Ｆｉｇ．?３－１?Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ?ｃａｔａｂｏｌｉｓｍ（Ｔａｎｇ?ｅｔ?ａｌ，?２０１１）??３．１．１?ＥＭＰ?途径??ＥＭＰ途径又称为糖酵解途径（ｇｌｙｃｏｌｙｓｉｓ），是生物体中最普遍存在的途径，能够??把葡萄糖和其他单糖转化成丙酮酸。ＥＭＰ在有无氧气的条件下均可以进行，反应主要??分为两个阶段。第一阶段主要是葡萄糖磷酸化形成两个三碳的中间产物：磷酸二羟丙??酮和３－磷酸甘油醛。第二阶段是磷酸二羟丙酮和３－磷酸甘油醛经过氧化还原反应形成??２分子的丙酮酸，释放的能量储存在ＡＴＰ的高能磷酸键中，并形成还原力ＮＡＤＨ。在??ＥＭＰ途径中，磷酸果糖激酶、３－磷酸磷酸甘油酸激酶、丙酮酸激酶是ＥＭＰ途径中的??关键酶％３］。??３．１．２?ＰＰ?途径??ＰＰ途径又称为己糖单憐酸旁路（ｈｅｘｏｓｅ?ｍｏｎｏｐｈｏｓｐｈａｔｅ?ｓｈｕｔ?ＨＭＳ），是葡萄糖在体??内生成５－磷酸核糖的唯一途径，广泛分布在好氧和兼性厌氧的微生物中。该途径也有??两个阶段反应
下篇研究内容第一章ｃａｒ加ｏｖｏｒｗｍ菌株ＰｃｃＳｌ中ＫｄｇＲ和ＰｏｔＦＧＨＩ致病相关功能分析??（６）将制备管放入收集管，１２０００?ｒｐｍ室温离心１?ｍｉｎ，弃滤液。??（７）将制备管放入收集管，加入７５０?ｐＬ洗脱液（Ｗａｓｈ?Ｓｏｌｕｔｉｏｎ，使用前确认已加入??乙醇），１２０００?ｒｐｍ室温离心１?ｍｉｎ，弃滤液。??（８）加入２５０?ｐＬ洗脱液，重复步骤７。??（９）将制备管放入收集管，１２０００?ｒｐｍ室温离心２ｍｉｎ。??（１０）将制备管小心转移至新的１．５?ｍＬＥＰ管中，室温干燥５?ｍｉｎ。向制备管中间加入??１００?（ｉＬ?去核酸酶灭菌水（Ｎｕｃｌｅａｓｅ－Ｆｒｅｅ?Ｗａｔｅｒ），室温赌育?２?ｍｉｎ，?１２０００?ｒｐｍ?室温??离心２?ｍｉｎ以洗脱质粒ＤＮＡ。１．０％琼脂糖胶电泳检测，并将质粒ＤＮＡ置于－２０°Ｃ??保存。??２．４敲除突变体砂和ＡｐｏｆＦＧ／／／的构建??敲除突变体的构建采用同源重组的方法，流程如图１－１。??
【参考文献】：
期刊论文
[1]彩色马蹄莲细菌性软腐病菌的鉴定及其群体感应淬灭的研究[J]. 谷春艳,范加勤,杨雪,胡白石,刘凤权,张永春. 南京农业大学学报. 2009(03)
[2]野油菜黄单胞菌2-酮-3-脱氧-6-磷酸葡萄糖酸醛缩酶基因的突变分析[J]. 谭旖宁,彭方印,安世琦,陆光涛,何勇强,唐纪良. 广西农业生物科学. 2008(04)
[3]古菌独特的脱氧酮糖酸（ED）葡萄糖酵解途径[J]. 刘天明,申玉龙,刘庆军,刘波. 微生物学报. 2008(08)
[4]软腐欧氏杆菌在离体条件下产生胞外酶的比较研究[J]. 王金生,张学君,方中达. 植物病理学报. 1989(04)
硕士论文
[1]胡萝卜软腐果胶杆菌致病相关基因的筛选及功能分析[D]. 杜硕.南京农业大学 2013
[2]胡萝卜软腐果胶杆菌与黄花马蹄莲不同方式互作的蛋白比较分析及相应致病基因的研究[D]. 杨钟灵.南京农业大学 2012
本文编号：3405046
【文章来源】：南京农业大学江苏省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：135 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
图３－１糖类代谢途径（摘自Ｔａｎｇｅ／ａ／，?２０１１）??Ｆｉｇ．?３－１?Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ?ｃａｔａｂｏｌｉｓｍ（Ｔａｎｇ?ｅｔ?ａｌ，?２０１１）??３．１．１?ＥＭＰ?途径??
ｐｙｒｕｖａｔｅ?＝＝＾?ＴＣＡ?ｃｙｃｌｅ??图３－１糖类代谢途径（摘自Ｔａｎｇｅ／ａ／，?２０１１）??Ｆｉｇ．?３－１?Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ?ｃａｔａｂｏｌｉｓｍ（Ｔａｎｇ?ｅｔ?ａｌ，?２０１１）??３．１．１?ＥＭＰ?途径??ＥＭＰ途径又称为糖酵解途径（ｇｌｙｃｏｌｙｓｉｓ），是生物体中最普遍存在的途径，能够??把葡萄糖和其他单糖转化成丙酮酸。ＥＭＰ在有无氧气的条件下均可以进行，反应主要??分为两个阶段。第一阶段主要是葡萄糖磷酸化形成两个三碳的中间产物：磷酸二羟丙??酮和３－磷酸甘油醛。第二阶段是磷酸二羟丙酮和３－磷酸甘油醛经过氧化还原反应形成??２分子的丙酮酸，释放的能量储存在ＡＴＰ的高能磷酸键中，并形成还原力ＮＡＤＨ。在??ＥＭＰ途径中，磷酸果糖激酶、３－磷酸磷酸甘油酸激酶、丙酮酸激酶是ＥＭＰ途径中的??关键酶％３］。??３．１．２?ＰＰ?途径??ＰＰ途径又称为己糖单憐酸旁路（ｈｅｘｏｓｅ?ｍｏｎｏｐｈｏｓｐｈａｔｅ?ｓｈｕｔ?ＨＭＳ），是葡萄糖在体??内生成５－磷酸核糖的唯一途径，广泛分布在好氧和兼性厌氧的微生物中。该途径也有??两个阶段反应
下篇研究内容第一章ｃａｒ加ｏｖｏｒｗｍ菌株ＰｃｃＳｌ中ＫｄｇＲ和ＰｏｔＦＧＨＩ致病相关功能分析??（６）将制备管放入收集管，１２０００?ｒｐｍ室温离心１?ｍｉｎ，弃滤液。??（７）将制备管放入收集管，加入７５０?ｐＬ洗脱液（Ｗａｓｈ?Ｓｏｌｕｔｉｏｎ，使用前确认已加入??乙醇），１２０００?ｒｐｍ室温离心１?ｍｉｎ，弃滤液。??（８）加入２５０?ｐＬ洗脱液，重复步骤７。??（９）将制备管放入收集管，１２０００?ｒｐｍ室温离心２ｍｉｎ。??（１０）将制备管小心转移至新的１．５?ｍＬＥＰ管中，室温干燥５?ｍｉｎ。向制备管中间加入??１００?（ｉＬ?去核酸酶灭菌水（Ｎｕｃｌｅａｓｅ－Ｆｒｅｅ?Ｗａｔｅｒ），室温赌育?２?ｍｉｎ，?１２０００?ｒｐｍ?室温??离心２?ｍｉｎ以洗脱质粒ＤＮＡ。１．０％琼脂糖胶电泳检测，并将质粒ＤＮＡ置于－２０°Ｃ??保存。??２．４敲除突变体砂和ＡｐｏｆＦＧ／／／的构建??敲除突变体的构建采用同源重组的方法，流程如图１－１。??
【参考文献】：
期刊论文
[1]彩色马蹄莲细菌性软腐病菌的鉴定及其群体感应淬灭的研究[J]. 谷春艳,范加勤,杨雪,胡白石,刘凤权,张永春. 南京农业大学学报. 2009(03)
[2]野油菜黄单胞菌2-酮-3-脱氧-6-磷酸葡萄糖酸醛缩酶基因的突变分析[J]. 谭旖宁,彭方印,安世琦,陆光涛,何勇强,唐纪良. 广西农业生物科学. 2008(04)
[3]古菌独特的脱氧酮糖酸（ED）葡萄糖酵解途径[J]. 刘天明,申玉龙,刘庆军,刘波. 微生物学报. 2008(08)
[4]软腐欧氏杆菌在离体条件下产生胞外酶的比较研究[J]. 王金生,张学君,方中达. 植物病理学报. 1989(04)
硕士论文
[1]胡萝卜软腐果胶杆菌致病相关基因的筛选及功能分析[D]. 杜硕.南京农业大学 2013
[2]胡萝卜软腐果胶杆菌与黄花马蹄莲不同方式互作的蛋白比较分析及相应致病基因的研究[D]. 杨钟灵.南京农业大学 2012
本文编号：3405046
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