芒果胶孢炭疽菌中CgAAP基因功能研究
发布时间：2021-10-06 19:40
芒果是一种重要的热带水果。炭疽病是危害芒果最严重的病害之一,在全球范围内普遍发生,其中胶孢炭疽菌（Colletotrichum gloeosporioides（Penz.）Penz.&Sacc.）是芒果炭疽病的主要病原菌。本实验以胶孢炭疽菌作为研究对象,在前期研究中对产孢量较少的胶孢炭疽菌菌株进行了转录组测序,通过生物信息学分析筛选到一个氨基酸转运蛋白AAP家族的基因,命名为CgAAP,对其功能进行了初步的研究。得到以下结果:本研究通过PCR及RT-PCR技术扩增了CgAAP的DNA序列及cDNA序列,经测序后对该序列分析显示,CgAAP基因全长1858 bp,有4个内含子,cDNA全长1593 bp。CgAAP基因编码一个530个氨基酸的多肽,分子量约为57.1 kD,等电点pI为6.24,是一个中性蛋白,含有氨基酸渗透酶结构域。为了研究CgAAP基因的功能,构建了CgAAP基因的敲除载体pCB1532-CgAAP和过表达载体CgniaD-ToxA-GFP-CgAAP、互补载体pBARGPE1-Hygro-CgAAP,将敲除载体和过表达载体通过PEG介导转化的方法转化到胶孢炭...
【文章来源】：海南大学海南省 211工程院校
【文章页数】：63 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
芒果胶孢炭疽菌总RNA提取Fig.1TotalRNAofC.gloeosporioides
海南大学硕士学位论文26图2CgAAP基因的RT-PCR扩增与PCR扩增A:CgAAP基因的RT-PCR;B:CgAAP基因的PCR扩增;M:DL2000DNAMarkerFig.2RT-PCRandPCRamplificationofCgAAPgeneA:RT-PCRamplificationofCgAAPgene;B:PCRamplificationofCgAAPM:DL2000DNAMarker3.3芒果胶孢炭疽菌CgAAP基因的生物信息学分析使用PCR技术与RT-PCR技术扩增得到CgAAP基因的DNA和cDNA序列。经测序后对该序列分析显示，CgAAP基因DNA全长1858bp，有4个内含子，cDNA全长1593bp。根据该基因的编码区序列预测了其编码的蛋白质的氨基酸序列，ProtParam在线工具分析表明CgAAP基因编码一个530个氨基酸的蛋白质，分子量约为5.71×104，等电点Pi=6.24，是一个中性蛋白。SignalP4.1Server预测结果显示CgAAP基因编码的蛋白没有信号肽。用SMART在线预测其结构域显示，该基因编码产物具有氨基酸渗透酶（AAP）功能区域（图3）。CgAAP与茶树炭疽菌（Colletotrichumfructicola）XP_031893196.1的蛋白同源性为100%，在炭疽菌属中的保守度较高。此外，与大力轮枝菌（Verticilliumdahlia）RXG44079.1的同源性为70.59%，与尖孢镰刀菌（FusariumoxysporumFo47）EWZ48828.1同源性为68.54%，与水稻恶苗病菌（Fusariumfujikuroi）SCO40083.1同源性为67.18%。图3CgAAP基因氨基酸渗透酶（AAP）结构域Fig.3Aaminoacidpermease（AAP）domainofCgAAPgene
海南大学硕士学位论文26图2CgAAP基因的RT-PCR扩增与PCR扩增A:CgAAP基因的RT-PCR;B:CgAAP基因的PCR扩增;M:DL2000DNAMarkerFig.2RT-PCRandPCRamplificationofCgAAPgeneA:RT-PCRamplificationofCgAAPgene;B:PCRamplificationofCgAAPM:DL2000DNAMarker3.3芒果胶孢炭疽菌CgAAP基因的生物信息学分析使用PCR技术与RT-PCR技术扩增得到CgAAP基因的DNA和cDNA序列。经测序后对该序列分析显示，CgAAP基因DNA全长1858bp，有4个内含子，cDNA全长1593bp。根据该基因的编码区序列预测了其编码的蛋白质的氨基酸序列，ProtParam在线工具分析表明CgAAP基因编码一个530个氨基酸的蛋白质，分子量约为5.71×104，等电点Pi=6.24，是一个中性蛋白。SignalP4.1Server预测结果显示CgAAP基因编码的蛋白没有信号肽。用SMART在线预测其结构域显示，该基因编码产物具有氨基酸渗透酶（AAP）功能区域（图3）。CgAAP与茶树炭疽菌（Colletotrichumfructicola）XP_031893196.1的蛋白同源性为100%，在炭疽菌属中的保守度较高。此外，与大力轮枝菌（Verticilliumdahlia）RXG44079.1的同源性为70.59%，与尖孢镰刀菌（FusariumoxysporumFo47）EWZ48828.1同源性为68.54%，与水稻恶苗病菌（Fusariumfujikuroi）SCO40083.1同源性为67.18%。图3CgAAP基因氨基酸渗透酶（AAP）结构域Fig.3Aaminoacidpermease（AAP）domainofCgAAPgene
【参考文献】：
期刊论文
[1]基于CRISPR/Cas9技术的烟草CPS2基因敲除及功能分析[J]. 张思琦,何佳,贺凌霄,薛刚,孙聚涛,李晓辉,段杜薇,徐世晓. 烟草科技. 2020(05)
[2]基于RNAi技术的转基因植物研究进展[J]. 黄春蒙,朱鹏宇,王智,王晨光,杜智欣,魏霜,张永江,付伟. 生物技术进展. 2020(01)
[3]低温贮藏期对芒果果实抗氧化能力和品质的影响[J]. 陈丽,朱丽婵,张鲁斌,贾志伟,洪克前. 中国农学通报. 2019(34)
[4]基因敲除技术在微生物中的应用[J]. 王雪,黄建忠,李力. 微生物学杂志. 2019(04)
[5]浅析昌江地区芒果炭疽病的发生规律与综合防治措施[J]. 李曲,王义强. 农业科技通讯. 2018(12)
[6]杧果采后病害、品种抗性及其分子基础的研究进展[J]. 杨建波,欧阳秋飞. 现代园艺. 2018(17)
[7]浅谈海南芒果产业发展的现状及应对措施[J]. 黄海峰. 农业科技通讯. 2018(04)
[8]CgRGS7调控胶孢炭疽菌分生孢子产量、附着胞形成及致病性[J]. 吴曼莉,胡坚,张楠,柯智健,柳志强,李晓宇. 西南农业学报. 2017(08)
[9]农药残留对农产品安全的影响及控制措施[J]. 刘守广. 现代农业科技. 2017(11)
[10]我国芒果产业发展问题探析[J]. 南楠,傅再军,徐靖丞. 云南农业大学学报(社会科学). 2017(03)
博士论文
[1]芒果果实潜伏侵染、Botryodiplodia theobromae致腐机理及蒂腐病防治技术基础研究[D]. 胡美姣.海南大学 2013
[2]我国炭疽菌属Colletotrichum部分种分类及芒果胶孢炭疽菌生物学特性研究[D]. 兰建强.西北农林科技大学 2012
硕士论文
[1]小麦赤霉菌FGSG11341基因敲除及功能研究[D]. 郭雪芳.内蒙古师范大学 2018
[2]硼酸盐对芒果胶孢炭疽菌和链格孢菌线粒体蛋白表达的影响[D]. 何书婷.海南大学 2017
[3]橡胶树炭疽菌候选效应蛋白基因Cg4LysM的分离鉴定和初步功能分析[D]. 苏慧君.海南大学 2017
[4]我国芒果生产布局演变的实证研究[D]. 周启凡.海南大学 2017
[5]苹果树腐烂病菌木聚糖酶基因的克隆及功能分析[D]. 史祥鹏.青岛农业大学 2016
[6]橡胶树胶孢炭疽病菌两个候选效应蛋白基因CgBASP2和CgCFEM3的分离鉴定和功能分析[D]. 汪倩.海南大学 2015
[7]广西百色芒果炭疽病抗药性研究[D]. 杨光.广西大学 2014
[8]芒果炭疽病菌漆酶基因Lac1的克隆与致病相关功能鉴定[D]. 韦运谢.海南大学 2014
[9]苹果树腐烂病菌4个多聚半乳糖醛酸酶基因功能的初步研究[D]. 宋娜.西北农林科技大学 2014
[10]苹果树腐烂病菌2个己糖激酶基因功能的初步研究[D]. 戴青青.西北农林科技大学 2014
本文编号：3420626
【文章来源】：海南大学海南省 211工程院校
【文章页数】：63 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
芒果胶孢炭疽菌总RNA提取Fig.1TotalRNAofC.gloeosporioides
海南大学硕士学位论文26图2CgAAP基因的RT-PCR扩增与PCR扩增A:CgAAP基因的RT-PCR;B:CgAAP基因的PCR扩增;M:DL2000DNAMarkerFig.2RT-PCRandPCRamplificationofCgAAPgeneA:RT-PCRamplificationofCgAAPgene;B:PCRamplificationofCgAAPM:DL2000DNAMarker3.3芒果胶孢炭疽菌CgAAP基因的生物信息学分析使用PCR技术与RT-PCR技术扩增得到CgAAP基因的DNA和cDNA序列。经测序后对该序列分析显示，CgAAP基因DNA全长1858bp，有4个内含子，cDNA全长1593bp。根据该基因的编码区序列预测了其编码的蛋白质的氨基酸序列，ProtParam在线工具分析表明CgAAP基因编码一个530个氨基酸的蛋白质，分子量约为5.71×104，等电点Pi=6.24，是一个中性蛋白。SignalP4.1Server预测结果显示CgAAP基因编码的蛋白没有信号肽。用SMART在线预测其结构域显示，该基因编码产物具有氨基酸渗透酶（AAP）功能区域（图3）。CgAAP与茶树炭疽菌（Colletotrichumfructicola）XP_031893196.1的蛋白同源性为100%，在炭疽菌属中的保守度较高。此外，与大力轮枝菌（Verticilliumdahlia）RXG44079.1的同源性为70.59%，与尖孢镰刀菌（FusariumoxysporumFo47）EWZ48828.1同源性为68.54%，与水稻恶苗病菌（Fusariumfujikuroi）SCO40083.1同源性为67.18%。图3CgAAP基因氨基酸渗透酶（AAP）结构域Fig.3Aaminoacidpermease（AAP）domainofCgAAPgene
海南大学硕士学位论文26图2CgAAP基因的RT-PCR扩增与PCR扩增A:CgAAP基因的RT-PCR;B:CgAAP基因的PCR扩增;M:DL2000DNAMarkerFig.2RT-PCRandPCRamplificationofCgAAPgeneA:RT-PCRamplificationofCgAAPgene;B:PCRamplificationofCgAAPM:DL2000DNAMarker3.3芒果胶孢炭疽菌CgAAP基因的生物信息学分析使用PCR技术与RT-PCR技术扩增得到CgAAP基因的DNA和cDNA序列。经测序后对该序列分析显示，CgAAP基因DNA全长1858bp，有4个内含子，cDNA全长1593bp。根据该基因的编码区序列预测了其编码的蛋白质的氨基酸序列，ProtParam在线工具分析表明CgAAP基因编码一个530个氨基酸的蛋白质，分子量约为5.71×104，等电点Pi=6.24，是一个中性蛋白。SignalP4.1Server预测结果显示CgAAP基因编码的蛋白没有信号肽。用SMART在线预测其结构域显示，该基因编码产物具有氨基酸渗透酶（AAP）功能区域（图3）。CgAAP与茶树炭疽菌（Colletotrichumfructicola）XP_031893196.1的蛋白同源性为100%，在炭疽菌属中的保守度较高。此外，与大力轮枝菌（Verticilliumdahlia）RXG44079.1的同源性为70.59%，与尖孢镰刀菌（FusariumoxysporumFo47）EWZ48828.1同源性为68.54%，与水稻恶苗病菌（Fusariumfujikuroi）SCO40083.1同源性为67.18%。图3CgAAP基因氨基酸渗透酶（AAP）结构域Fig.3Aaminoacidpermease（AAP）domainofCgAAPgene
【参考文献】：
期刊论文
[1]基于CRISPR/Cas9技术的烟草CPS2基因敲除及功能分析[J]. 张思琦,何佳,贺凌霄,薛刚,孙聚涛,李晓辉,段杜薇,徐世晓. 烟草科技. 2020(05)
[2]基于RNAi技术的转基因植物研究进展[J]. 黄春蒙,朱鹏宇,王智,王晨光,杜智欣,魏霜,张永江,付伟. 生物技术进展. 2020(01)
[3]低温贮藏期对芒果果实抗氧化能力和品质的影响[J]. 陈丽,朱丽婵,张鲁斌,贾志伟,洪克前. 中国农学通报. 2019(34)
[4]基因敲除技术在微生物中的应用[J]. 王雪,黄建忠,李力. 微生物学杂志. 2019(04)
[5]浅析昌江地区芒果炭疽病的发生规律与综合防治措施[J]. 李曲,王义强. 农业科技通讯. 2018(12)
[6]杧果采后病害、品种抗性及其分子基础的研究进展[J]. 杨建波,欧阳秋飞. 现代园艺. 2018(17)
[7]浅谈海南芒果产业发展的现状及应对措施[J]. 黄海峰. 农业科技通讯. 2018(04)
[8]CgRGS7调控胶孢炭疽菌分生孢子产量、附着胞形成及致病性[J]. 吴曼莉,胡坚,张楠,柯智健,柳志强,李晓宇. 西南农业学报. 2017(08)
[9]农药残留对农产品安全的影响及控制措施[J]. 刘守广. 现代农业科技. 2017(11)
[10]我国芒果产业发展问题探析[J]. 南楠,傅再军,徐靖丞. 云南农业大学学报(社会科学). 2017(03)
博士论文
[1]芒果果实潜伏侵染、Botryodiplodia theobromae致腐机理及蒂腐病防治技术基础研究[D]. 胡美姣.海南大学 2013
[2]我国炭疽菌属Colletotrichum部分种分类及芒果胶孢炭疽菌生物学特性研究[D]. 兰建强.西北农林科技大学 2012
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[1]小麦赤霉菌FGSG11341基因敲除及功能研究[D]. 郭雪芳.内蒙古师范大学 2018
[2]硼酸盐对芒果胶孢炭疽菌和链格孢菌线粒体蛋白表达的影响[D]. 何书婷.海南大学 2017
[3]橡胶树炭疽菌候选效应蛋白基因Cg4LysM的分离鉴定和初步功能分析[D]. 苏慧君.海南大学 2017
[4]我国芒果生产布局演变的实证研究[D]. 周启凡.海南大学 2017
[5]苹果树腐烂病菌木聚糖酶基因的克隆及功能分析[D]. 史祥鹏.青岛农业大学 2016
[6]橡胶树胶孢炭疽病菌两个候选效应蛋白基因CgBASP2和CgCFEM3的分离鉴定和功能分析[D]. 汪倩.海南大学 2015
[7]广西百色芒果炭疽病抗药性研究[D]. 杨光.广西大学 2014
[8]芒果炭疽病菌漆酶基因Lac1的克隆与致病相关功能鉴定[D]. 韦运谢.海南大学 2014
[9]苹果树腐烂病菌4个多聚半乳糖醛酸酶基因功能的初步研究[D]. 宋娜.西北农林科技大学 2014
[10]苹果树腐烂病菌2个己糖激酶基因功能的初步研究[D]. 戴青青.西北农林科技大学 2014
本文编号：3420626
本文链接：https://www.wllwen.com/nykjlw/dzwbhlw/3420626.html
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