环境水中植物病毒的检测及鉴定

发布时间：2021-10-14 23:09

　　环境水（河流、湖泊、灌溉水、海水、自来水等）中致病性病毒的存在严重威胁着人类健康和农业生产。在环境水中已被证实存在有众多的植物病毒,这些水源的植物病毒有可能进入病害循环,从而导致植物病毒病害的传播和扩散。本研究主要检测环境水中的植物病毒,通过浓缩分离方法,建立环境水中植物病毒检测与鉴定的技术体系,同时测试环境水中植物病毒分离物对寄主植物的侵染性。主要结果如下:1.对山东、河北、内蒙古和黑龙江地区采集的65份水样品浓缩提纯后,利用4对属引物和15对特异性引物进行检测。其中,山东地区从泰安、济南、烟台、滨州、淄博、威海、聊城、济宁、德州和潍坊10个地区采样,共检测到黄瓜绿斑驳花叶病毒（Cucumber green mottle mosaic virus,CGMMV）、烟草花叶病毒（Tobacco mosaic virus,TMV）、番茄花叶病毒（Cucumber mosaic virus,ToMV）、黄瓜花叶病毒（Cucumber mosaic virus,CMV）、辣椒轻斑驳病毒（Pepper mild mottle virus,PMMoV）、番茄褪绿病毒（Tomato chlorosi... 

【文章来源】：山东农业大学山东省

【文章页数】：62 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
中文摘要
Abstract
1 前言
    1.1 环境水中植物病毒的简介
        1.1.1 植物病毒在环境水中的来源
        1.1.2 植物病毒在水中的存活
        1.1.3 水作为传播植物病毒的介体及制约因素
    1.2 水体中病毒的浓缩方法与检测技术
        1.2.1 水体中病毒的浓缩方法
        1.2.2 水体中病毒的检测技术
    1.3 水体中检出的部分病毒简介
        1.3.1 烟草花叶病毒简介
        1.3.2 番茄花叶病毒简介
        1.3.3 黄瓜绿斑驳花叶病毒简介
    1.4 本研究的目的与意义
2 材料与方法
    2.1 实验材料与仪器
        2.1.1 样品采集
        2.1.2 菌株、分子生物学及生化试剂
        2.1.3 主要试验仪器
        2.1.4 实验试剂的配制方法
    2.2 环境水中植物病毒的鉴定及检测
        2.2.1 环境水中植物病毒的浓缩方法
        2.2.2 病毒粒子DNA/RNA共提取
        2.2.3 引物设计与合成
        2.2.4 反转录cDNA的合成
        2.2.5 PCR扩增
        2.2.6 PCR产物的琼脂糖凝胶电泳检测
        2.2.7 PCR产物目的片段回收
        2.2.8 连接载体
        2.2.9 大肠杆菌感受态细胞的制备
        2.2.10 连接产物转化大肠杆菌
        2.2.11 PCR方法鉴定阳性菌落
        2.2.12 序列测定及数据分析
    2.3 环境水中植物病毒接种鉴定
        2.3.1 摩擦接种法
        2.3.2 接种病株RNA提取
        2.3.3 引物设计与合成
        2.3.4 反转录cDNA的合成
        2.3.5 PCR扩增
        2.3.6 PCR产物的琼脂糖凝胶电泳检测
        2.3.7 PCR产物目的片段回收
        2.3.8 连接载体
        2.3.9 连接产物转化大肠杆菌
        2.3.10 PCR方法鉴定阳性菌落
        2.3.11 序列测定及数据分析
3 结果与分析
    3.1 环境水中植物病毒检测及鉴定
        3.1.1 环境水中植物病毒种类检测结果
        3.1.2 环境水中植物病毒检出率
        3.1.3 不同环境水中植物病毒分布情况
        3.1.4 不同环境水中植物病毒的检出类型
    3.2 烟草花叶病毒的接种鉴定与分析
        3.2.1 济南地区TMV接种检测及鉴定
        3.2.2 序列一致性分析
        3.2.3 系统进化树分析
    3.3 黄瓜绿斑驳花叶病毒的接种鉴定与分析
        3.3.1 山东地区CGMMV接种检测及鉴定
        3.3.2 序列一致性分析
        3.3.3 系统进化树分析
    3.4 番茄花叶病毒的接种鉴定与分析
        3.4.1 济南地区ToMV接种检测及鉴定
        3.4.2 序列一致性分析
        3.4.3 系统进化树分析
4 讨论
    4.1 环境水中植物病毒检测鉴定
    4.2 对环境水中已检出的TMV、ToMV和CGMMV接种鉴定
    4.3 构建TMV、ToMV和CGMMV系统进化树分析
5 结论
参考文献
致谢



本文编号：3436984