甘蔗鞭黑粉菌两个有性配合缺陷突变体目标基因的分离与鉴定
发布时间：2021-10-16 23:47
由甘蔗鞭黑粉菌（Sporisorium scitamineum）引起的甘蔗鞭黑穗病是一种重要的甘蔗病害,已对我国甘蔗糖业造成严重的影响。开展该病菌有性配合与致病相关基因的分离与功能鉴定,可为从分子水平上了解甘蔗鞭黑粉菌的致病机制及病菌与甘蔗的相互作用提供依据,同时也可为抗病育种提供理论基础和技术支撑。本研究以甘蔗鞭黑粉菌野生型菌株WT18和WT17为出发菌株,用根癌农杆菌介导的转化（Agrobacterium tumefaciens-mediated transformation,ATMT）方法,建立了拥有13000个具有潮霉素抗性的T-DNA随机插入突变体库;经营养平板上有性配合试验,筛选获得了12个有性配合能力缺陷突变体,PCR验证和Southern杂交分析结果表明T-DNA插入在甘蔗鞭黑粉菌基因组中且均为单拷贝插入。随机挑选3个出自WT18的缺乏有性配合能力突变体33、91和14137及1个出自WT17的有性配合能力明显减弱突变体6425与相对性系野生型菌株菌体等量混合后注射接种甘蔗苗,结果表明野生型发病率为100%、突变体91和突变体6425发病率为26.67%,而突变体33和...
【文章来源】：华南农业大学广东省
【文章页数】：85 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
Sporisoriumscitamineum的生活史（Tanigutietal.,2015）
调整基因表达，从而使细胞可以应对环境的刺激yces cerevisiae）中，主要与有性配合、菌丝生长、细胞完透压反应相关（Gustin et al., 1998；Panet al., 2000；Gancedo, 20Chen et al., 2007）。Prf1 活性的调控与转录时不同的碳源水后的 cAMP 水平和信息素水平有关（Hartmannet al., 1996）过cAMP–PKA信号途径的磷酸化作用或者通过MAPK 级联994；Durrenberger et al., 1998；Andrews et al., 2000；Muller et a中 prf1 转录因子可以整合来自两个不同途径的信号通路并调控不同的转录反应（Kaffarnik et al., 2003）。
图 3 用于随机突变的双元载体 pAnEX3-gpdA-eGFP2.1.3 主要实验试剂和抗生素利福平（Rifanpicin，Rif），壮观霉素（Spectinomycin，Spec），头孢噻肟钠（Cefotaxime，Cef），氨苄青霉素（Ampicilin，Amp），乙酰丁香酮（Acetosyringone，AS）卡那霉素（ Kannamycin ， Kan ） 购 自 北 京 鼎 国 公 司 ； 2-(N- 吗 啡 啉 ) 乙 磺 酸（2-morpholinoethanesulfonic acid，MES）购自 Sigma 公司；潮霉素（Hygromycin，Hyg）购自 Calbiochem 公司；混合纤维素微孔滤膜（0.45 μm）购自上海新亚净化材料厂；SanPrep 柱式 DNA 胶回收试剂盒、PCR 纯化试剂盒、SanPrep 柱式质粒 DNA小量抽提试剂盒购自 Omega 公司，PrimerSTAR 高保真聚合酶、LATaq 酶和 RACE 试剂盒购自 TAKARA 公司，地高辛 DNA 高效标记与检测试剂盒购自 Roche 公司
【参考文献】：
期刊论文
[1]甘蔗黑穗病发生现状及防控对策[J]. 覃祖送,李德越. 中国园艺文摘. 2015(06)
[2]甘蔗黑穗病及其病原菌研究进展[J]. 沈万宽,姜子德,邓海华,刘睿. 热带作物学报. 2013(10)
[3]甘蔗黑穗病菌拮抗菌HAS的筛选和鉴定[J]. 熊国如,赵更峰,伍苏然,冯翠莲,张树珍. 热带作物学报. 2013(06)
[4]广西甘蔗主要真菌病害调查初报[J]. 韦金菊,邓展云,黄诚华,黄伟华,颜梅新,刘海斌,唐红琴. 南方农业学报. 2012(09)
[5]甘蔗宿根矮化病菌多克隆抗体制备及初步检测[J]. 陈健文,杨湛端,刘睿,沈万宽,齐永文,何方洋,万宇平,余厚美,徐苑娴,邓海华. 广东农业科学. 2012(10)
[6]甘蔗黑穗病的研究[J]. 熊国如,张树珍. 农业灾害研究. 2012(04)
[7]海南蔗区甘蔗病害种类及发生情况[J]. 熊国如,李增平,赵婷婷,蔡文伟,王俊刚,王文治,冯翠莲,张雨良,张树珍. 热带作物学报. 2010(09)
[8]海南蔗区甘蔗黑穗病菌的分离鉴定[J]. 杨志才,熊国如,陈雪婷,张树珍,杨本鹏. 热带作物学报. 2010(05)
[9]甘蔗黑穗病发生及防治研究进展[J]. 卢文洁,李文风,黄应昆. 中国糖料. 2008(03)
[10]海南岛甘蔗病害种类初步调查[J]. 吴伟怀,李锐,贺春萍,郑肖兰,郑服丛. 热带作物学报. 2007(04)
硕士论文
[1]棉花GhWD40基因的克隆及功能验证[D]. 李洁.华中农业大学 2013
本文编号：3440720
【文章来源】：华南农业大学广东省
【文章页数】：85 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
Sporisoriumscitamineum的生活史（Tanigutietal.,2015）
调整基因表达，从而使细胞可以应对环境的刺激yces cerevisiae）中，主要与有性配合、菌丝生长、细胞完透压反应相关（Gustin et al., 1998；Panet al., 2000；Gancedo, 20Chen et al., 2007）。Prf1 活性的调控与转录时不同的碳源水后的 cAMP 水平和信息素水平有关（Hartmannet al., 1996）过cAMP–PKA信号途径的磷酸化作用或者通过MAPK 级联994；Durrenberger et al., 1998；Andrews et al., 2000；Muller et a中 prf1 转录因子可以整合来自两个不同途径的信号通路并调控不同的转录反应（Kaffarnik et al., 2003）。
图 3 用于随机突变的双元载体 pAnEX3-gpdA-eGFP2.1.3 主要实验试剂和抗生素利福平（Rifanpicin，Rif），壮观霉素（Spectinomycin，Spec），头孢噻肟钠（Cefotaxime，Cef），氨苄青霉素（Ampicilin，Amp），乙酰丁香酮（Acetosyringone，AS）卡那霉素（ Kannamycin ， Kan ） 购 自 北 京 鼎 国 公 司 ； 2-(N- 吗 啡 啉 ) 乙 磺 酸（2-morpholinoethanesulfonic acid，MES）购自 Sigma 公司；潮霉素（Hygromycin，Hyg）购自 Calbiochem 公司；混合纤维素微孔滤膜（0.45 μm）购自上海新亚净化材料厂；SanPrep 柱式 DNA 胶回收试剂盒、PCR 纯化试剂盒、SanPrep 柱式质粒 DNA小量抽提试剂盒购自 Omega 公司，PrimerSTAR 高保真聚合酶、LATaq 酶和 RACE 试剂盒购自 TAKARA 公司，地高辛 DNA 高效标记与检测试剂盒购自 Roche 公司
【参考文献】：
期刊论文
[1]甘蔗黑穗病发生现状及防控对策[J]. 覃祖送,李德越. 中国园艺文摘. 2015(06)
[2]甘蔗黑穗病及其病原菌研究进展[J]. 沈万宽,姜子德,邓海华,刘睿. 热带作物学报. 2013(10)
[3]甘蔗黑穗病菌拮抗菌HAS的筛选和鉴定[J]. 熊国如,赵更峰,伍苏然,冯翠莲,张树珍. 热带作物学报. 2013(06)
[4]广西甘蔗主要真菌病害调查初报[J]. 韦金菊,邓展云,黄诚华,黄伟华,颜梅新,刘海斌,唐红琴. 南方农业学报. 2012(09)
[5]甘蔗宿根矮化病菌多克隆抗体制备及初步检测[J]. 陈健文,杨湛端,刘睿,沈万宽,齐永文,何方洋,万宇平,余厚美,徐苑娴,邓海华. 广东农业科学. 2012(10)
[6]甘蔗黑穗病的研究[J]. 熊国如,张树珍. 农业灾害研究. 2012(04)
[7]海南蔗区甘蔗病害种类及发生情况[J]. 熊国如,李增平,赵婷婷,蔡文伟,王俊刚,王文治,冯翠莲,张雨良,张树珍. 热带作物学报. 2010(09)
[8]海南蔗区甘蔗黑穗病菌的分离鉴定[J]. 杨志才,熊国如,陈雪婷,张树珍,杨本鹏. 热带作物学报. 2010(05)
[9]甘蔗黑穗病发生及防治研究进展[J]. 卢文洁,李文风,黄应昆. 中国糖料. 2008(03)
[10]海南岛甘蔗病害种类初步调查[J]. 吴伟怀,李锐,贺春萍,郑肖兰,郑服丛. 热带作物学报. 2007(04)
硕士论文
[1]棉花GhWD40基因的克隆及功能验证[D]. 李洁.华中农业大学 2013
本文编号：3440720
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