基于16S rRNA高通量测序技术的两种蝉科昆虫贮菌体细菌多样性研究
发布时间：2021-10-17 01:38
蝉科昆虫具有刺吸式口器,若虫和成虫均以植物木质部汁液为食。木质部汁液中的碳水化合物、氨基酸和维生素等含量极低,营养成分极度不均衡。在长期的进化过程中,蝉科昆虫与体内的细菌形成密切的共生关系,并通过共生菌获得营养代谢和生长发育所必须的部分营养物质。共生菌与寄主协同进化,能够影响寄主种群扩张和物种分化。蝉科昆虫的内共生菌通常存在于体内特殊的器官——贮菌体。截至目前,关于蝉科同一物种不同地理种群、不同发育阶段的贮菌体和生殖器官的共生菌多样性研究较少,相关的细菌群落组成也不清楚。鉴于此,本文采用16S rRNA高通量测序技术对枯蝉Subpsaltria yangi Chen两个地理种群和不同发育阶段的蒙古寒蝉Meimuna mongolica（Distant）贮菌体、卵巢、精巢、卵的细菌多样性进行了研究,并对其解剖结构进行形态学观察,主要研究结果如下。（1）分布于宁夏贺兰山和陕西韩城的两个枯蝉种群,生活环境及寄主植物都不同。形态学研究表明这两个种群的贮菌体及生殖器官没有差别。韩城种群的贮菌体和生殖器官细菌多样性明显高于贺兰山种群,两个种群均以精巢的细菌多样性最高。专性共生菌Sulcia mue...
【文章来源】：西北农林科技大学陕西省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：58 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
取食不同寄主植物的枯蝉AB
第二章材料与方法9蝉的卵，选取适量的刚羽化的成虫（雌雄比例约为1:1）置于罩有杜梨树枝（未经产卵的枝条）的养虫笼内。几天后，雌虫和雄虫均性成熟并完成交配（图2-2B），待雌虫产卵后，收集卵，并解剖性成熟的雌、雄成虫用于后续实验。AB图2-2蒙古寒蝉成虫A,刚羽化的成虫;B,性成熟的成虫Figure2-2AdultsofM.mongolicaA,Newlyemergedadult;B,Sexuallymatureadults2.1.4实验试剂和仪器2.1.4.1主要试剂血液/细胞/组织基因组DNA提取试剂盒（天根，北京）、TaKaMinBESTUniversalGenomicDNAExtractionKitVer.5.0、DNAMaker（Takara生物，大连）、Taq酶（Takara生物，大连）、细菌16SrRNA通用引物：27F（5-AGAGTTTGATCMTGGCTCAG-3）和1492R（5-ATGGGYTACCTTGTTACGACTT-3）、细菌16SrRNAV4区引物：515F（5-GTGCCAGCMGCCGCGGTAA-3）和806R（5-GGACTACVSGGGTATCTAAT-3）、COI基因特异性引物：L-1490（5-GGTCAACAAATCATAAAGATATTGG-3）和H-2198（5-TAAACTTCAGGGTGACCAAAAAATCA-3）。本实验所用引物由上海生工生物技术有限公司合成。2.1.4.2主要仪器本研究所用仪器见表2-1。
第二章材料与方法15图2-316SrRNA高通量分析流程Figure2-3Theanalysisprocessof16SrRNAhigh-throughputsequencing2.2.4卵的分子鉴定实验中使用的蒙古寒蝉的卵是用枝条饲养成虫得到，因此可以确定收集到的卵都是蒙古寒蝉的后代。但枯蝉的卵采自野外，为保证采集到的卵都是枯蝉的后代，测定枯蝉卵的线粒体细胞色素氧化酶I（COI）基因序列。2.2.4.1基因组DNA的提取与检测以保存于–80°C冰箱中的卵为材料，采用试剂盒（TaKaMinBESTUniversalGenomicDNAExtractionKitVer.5.0）的方法提取基因组DNA。2.2.4.2COI基因的PCR扩增（1）引物将获得的基因组DNA用于PCR扩增。扩增的目的基因片段为线粒体COI基因的部分序列。扩增引物为COI：L-1490和H-2198（Simonetal.1994）。
本文编号：3440870
【文章来源】：西北农林科技大学陕西省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：58 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
取食不同寄主植物的枯蝉AB
第二章材料与方法9蝉的卵，选取适量的刚羽化的成虫（雌雄比例约为1:1）置于罩有杜梨树枝（未经产卵的枝条）的养虫笼内。几天后，雌虫和雄虫均性成熟并完成交配（图2-2B），待雌虫产卵后，收集卵，并解剖性成熟的雌、雄成虫用于后续实验。AB图2-2蒙古寒蝉成虫A,刚羽化的成虫;B,性成熟的成虫Figure2-2AdultsofM.mongolicaA,Newlyemergedadult;B,Sexuallymatureadults2.1.4实验试剂和仪器2.1.4.1主要试剂血液/细胞/组织基因组DNA提取试剂盒（天根，北京）、TaKaMinBESTUniversalGenomicDNAExtractionKitVer.5.0、DNAMaker（Takara生物，大连）、Taq酶（Takara生物，大连）、细菌16SrRNA通用引物：27F（5-AGAGTTTGATCMTGGCTCAG-3）和1492R（5-ATGGGYTACCTTGTTACGACTT-3）、细菌16SrRNAV4区引物：515F（5-GTGCCAGCMGCCGCGGTAA-3）和806R（5-GGACTACVSGGGTATCTAAT-3）、COI基因特异性引物：L-1490（5-GGTCAACAAATCATAAAGATATTGG-3）和H-2198（5-TAAACTTCAGGGTGACCAAAAAATCA-3）。本实验所用引物由上海生工生物技术有限公司合成。2.1.4.2主要仪器本研究所用仪器见表2-1。
第二章材料与方法15图2-316SrRNA高通量分析流程Figure2-3Theanalysisprocessof16SrRNAhigh-throughputsequencing2.2.4卵的分子鉴定实验中使用的蒙古寒蝉的卵是用枝条饲养成虫得到，因此可以确定收集到的卵都是蒙古寒蝉的后代。但枯蝉的卵采自野外，为保证采集到的卵都是枯蝉的后代，测定枯蝉卵的线粒体细胞色素氧化酶I（COI）基因序列。2.2.4.1基因组DNA的提取与检测以保存于–80°C冰箱中的卵为材料，采用试剂盒（TaKaMinBESTUniversalGenomicDNAExtractionKitVer.5.0）的方法提取基因组DNA。2.2.4.2COI基因的PCR扩增（1）引物将获得的基因组DNA用于PCR扩增。扩增的目的基因片段为线粒体COI基因的部分序列。扩增引物为COI：L-1490和H-2198（Simonetal.1994）。
本文编号：3440870
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