黑龙江省苏云金杆菌的分离及新型cry基因的克隆与表达
发布时间：2021-11-07 15:22
夜蛾科（Noctuidae）害虫种类多且危害广,发生周期长,给农业生产带来极大损失。目前夜蛾科害虫的治理仍以化学防治为主,化学农药长期大量施用造成的“3R”问题,使生态环境日趋恶化,也使得有害生物的绿色防控成为众望所归。苏云金杆菌（Bacillus thuringiensis,简称Bt）以其杀虫专一性强、环境友好等特点,在害虫生物防治中得到大量应用,但随着Bt大面积的推广应用,田间抗性种群也不断产生,因此,不断挖掘新的Bt菌株,筛选出高效、广谱的cry基因尤为重要。本研究利用醋酸钠选择筛选法从黑龙江省不同类型的土壤中分离出苏云金杆菌,并对其基因型进行了鉴定,以棉铃虫（Helicoverpa armigera Hubner）、甘蓝夜蛾（Mamestra brassicae Linnaeus）、斜纹夜蛾（Spodoptera litura）为靶标,检测了菌株对夜蛾科害虫的生物活性,并对高毒力菌株的新基因进行了克隆与表达,获得以下实验结果:从黑龙江省不同地区采集的352土样中分离出Bt菌株46株,出菌率为13.6%,其中哈尔滨等地区的黑土与伊春等地区的暗棕壤分离出来的Bt菌株最多,出菌率分别...
【文章来源】：东北农业大学黑龙江省 211工程院校
【文章页数】：73 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
Cry蛋白进化树划分的3个区域Figure1-1ThreeDomainDendrogramtree1.5.2Bt的cry基因型鉴定方法
前 言in I, domain II, and domain III are shown in red, green, and blue, respectively图 1-2 Cry 蛋白的晶体结构Figure 1-2 Crystal structure of Cry Protein
图 2-1 pET 28a（+）表达载体图谱Figure 2-1 pET 28a（+）expression vector map的制备及目的基因的诱导表达的制备挑取 Bt 单菌落接种于 5 mL 液体 LB 培养基内，30绝大部分晶体脱落，取 500 μL 菌液至 EP 管内，冰=0.5 sec）。取 100 μL 菌液加入 50 μL 3×上样 buffen 离心 1 min，取上清液待用。的诱导表达100 接种于含 34 μg/mL 氯霉素的 5 mL 液体 LB 培OD600=0.5-0.6，加入 50 μL 终浓度为 0.5 mmol/L 的 IP rpm 诱导 4 h，以未加 IPTG 诱导剂的作为阴性对照 500 μL PBS（pH 7.4）缓冲液悬浮，超声破碎 6 m吸取上清和沉淀，沉淀用 500 μL 包涵体溶解液（Cl，pH 8.0）溶解。分别取 100 μL 样品和 50 μL 3×pr
【参考文献】：
期刊论文
[1]Complete genome sequence of Bacillus thuringiensis Bt185, a potential soil insect biocontrol agent[J]. LI Yan-qiu,SHU Chang-long,SHAN Yue-ming,GENG Li-li,SONG Fu-ping,ZHANG Jie. Journal of Integrative Agriculture. 2017(03)
[2]苏云金芽孢杆菌及vip基因在不同自然环境中分布情况的比较[J]. 李帅,刘荣梅,李海涛,高继国. 江苏农业科学. 2017(04)
[3]苏云金芽孢杆菌的研究进展[J]. 张航. 黑龙江科技信息. 2016(34)
[4]牡丹江火山口原始森林苏云金芽孢杆菌的分离和cry基因鉴定[J]. 李帅,张茜,高剑,于爽. 牡丹江师范学院学报(自然科学版). 2016(04)
[5]棉铃虫的发生规律与防治策略研讨[J]. 努尔古丽·艾买提. 农民致富之友. 2016(16)
[6]黑龙江省苏云金杆菌的分离及对夜蛾科昆虫高毒力菌株的筛选[J]. 徐馨竹,周长梅,韩岚岚,程媛,赵奎军. 应用昆虫学报. 2016(04)
[7]棉铃虫防治技术[J]. 牛晓丽. 现代农村科技. 2016(09)
[8]对甜菜夜蛾具有杀虫活性的Bt菌株cry1Ca基因研究[J]. 王杨,周子珊,刘永磊,韩榕,张林静,张杰. 植物保护. 2016(02)
[9]转基因抗虫棉花基因类型及原理研究进展[J]. 孙璇,马燕斌,张树伟,段超,王新胜,李燕娥. 山西农业科学. 2016(01)
[10]烟草夜蛾科类害虫发生特点和防治技术[J]. 李石力,李志伟,何孝兵,丁伟. 植物医生. 2015(06)
博士论文
[1]四川生态区苏云金芽胞杆菌资源的筛选鉴定及其新型杀虫基因的克隆表达研究[D]. 谭芙蓉.四川农业大学 2008
硕士论文
[1]不同地区苏云金芽胞杆菌vip3Aa基因的鉴定及杀虫活性分析[D]. 李帅.东北农业大学 2016
[2]棉铃虫、甜菜夜蛾中肠受体蛋白与Bt毒素结合能力的研究[D]. 袁向东.中国农业科学院 2016
[3]苏云金芽胞杆菌的分离鉴定及高毒力菌株的研究[D]. 苏俊平.河北农业大学 2012
[4]四川蒙顶山苏云金芽胞杆菌cry基因鉴定及其新型模式cry基因的克隆与表达[D]. 关鹏.四川农业大学 2010
[5]苏云金芽孢杆菌杀虫基因的鉴定、克隆与表达[D]. 董明.河北大学 2010
[6]雅安周公山苏云金芽胞杆菌基因资源研究和杀虫基因的克隆[D]. 李云艳.四川农业大学 2008
本文编号：3482089
【文章来源】：东北农业大学黑龙江省 211工程院校
【文章页数】：73 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
Cry蛋白进化树划分的3个区域Figure1-1ThreeDomainDendrogramtree1.5.2Bt的cry基因型鉴定方法
前 言in I, domain II, and domain III are shown in red, green, and blue, respectively图 1-2 Cry 蛋白的晶体结构Figure 1-2 Crystal structure of Cry Protein
图 2-1 pET 28a（+）表达载体图谱Figure 2-1 pET 28a（+）expression vector map的制备及目的基因的诱导表达的制备挑取 Bt 单菌落接种于 5 mL 液体 LB 培养基内，30绝大部分晶体脱落，取 500 μL 菌液至 EP 管内，冰=0.5 sec）。取 100 μL 菌液加入 50 μL 3×上样 buffen 离心 1 min，取上清液待用。的诱导表达100 接种于含 34 μg/mL 氯霉素的 5 mL 液体 LB 培OD600=0.5-0.6，加入 50 μL 终浓度为 0.5 mmol/L 的 IP rpm 诱导 4 h，以未加 IPTG 诱导剂的作为阴性对照 500 μL PBS（pH 7.4）缓冲液悬浮，超声破碎 6 m吸取上清和沉淀，沉淀用 500 μL 包涵体溶解液（Cl，pH 8.0）溶解。分别取 100 μL 样品和 50 μL 3×pr
【参考文献】：
期刊论文
[1]Complete genome sequence of Bacillus thuringiensis Bt185, a potential soil insect biocontrol agent[J]. LI Yan-qiu,SHU Chang-long,SHAN Yue-ming,GENG Li-li,SONG Fu-ping,ZHANG Jie. Journal of Integrative Agriculture. 2017(03)
[2]苏云金芽孢杆菌及vip基因在不同自然环境中分布情况的比较[J]. 李帅,刘荣梅,李海涛,高继国. 江苏农业科学. 2017(04)
[3]苏云金芽孢杆菌的研究进展[J]. 张航. 黑龙江科技信息. 2016(34)
[4]牡丹江火山口原始森林苏云金芽孢杆菌的分离和cry基因鉴定[J]. 李帅,张茜,高剑,于爽. 牡丹江师范学院学报(自然科学版). 2016(04)
[5]棉铃虫的发生规律与防治策略研讨[J]. 努尔古丽·艾买提. 农民致富之友. 2016(16)
[6]黑龙江省苏云金杆菌的分离及对夜蛾科昆虫高毒力菌株的筛选[J]. 徐馨竹,周长梅,韩岚岚,程媛,赵奎军. 应用昆虫学报. 2016(04)
[7]棉铃虫防治技术[J]. 牛晓丽. 现代农村科技. 2016(09)
[8]对甜菜夜蛾具有杀虫活性的Bt菌株cry1Ca基因研究[J]. 王杨,周子珊,刘永磊,韩榕,张林静,张杰. 植物保护. 2016(02)
[9]转基因抗虫棉花基因类型及原理研究进展[J]. 孙璇,马燕斌,张树伟,段超,王新胜,李燕娥. 山西农业科学. 2016(01)
[10]烟草夜蛾科类害虫发生特点和防治技术[J]. 李石力,李志伟,何孝兵,丁伟. 植物医生. 2015(06)
博士论文
[1]四川生态区苏云金芽胞杆菌资源的筛选鉴定及其新型杀虫基因的克隆表达研究[D]. 谭芙蓉.四川农业大学 2008
硕士论文
[1]不同地区苏云金芽胞杆菌vip3Aa基因的鉴定及杀虫活性分析[D]. 李帅.东北农业大学 2016
[2]棉铃虫、甜菜夜蛾中肠受体蛋白与Bt毒素结合能力的研究[D]. 袁向东.中国农业科学院 2016
[3]苏云金芽胞杆菌的分离鉴定及高毒力菌株的研究[D]. 苏俊平.河北农业大学 2012
[4]四川蒙顶山苏云金芽胞杆菌cry基因鉴定及其新型模式cry基因的克隆与表达[D]. 关鹏.四川农业大学 2010
[5]苏云金芽孢杆菌杀虫基因的鉴定、克隆与表达[D]. 董明.河北大学 2010
[6]雅安周公山苏云金芽胞杆菌基因资源研究和杀虫基因的克隆[D]. 李云艳.四川农业大学 2008
本文编号：3482089
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