菲牛蛭Eglin C、Guamerin基因的克隆及表达模式研究
发布时间：2021-11-21 09:06
菲牛蛭Poecilobdella manillensis Lesson,别名为马尼拉医蛭,是环节动物门蛭纲无吻蛭目医蛭科牛蛭属动物,药材名金边蚂蟥。具有破血通经,逐瘀消癥之功效。以吸食脊椎动物鲜血为生,其唾液腺分泌物中含有抗凝、抗栓、抗炎、麻醉等活性成分。在吸食期间,吸血蛭通过将大量生物活性物质转移到寄主体内,阻止伤口过早的止血和血液凝固,促使吸血蛭顺利吸食血液,目前对于吸血蛭的研究主要集中在活性物质的挖掘及药理作用方面,而吸血蛭吸食阶段抗凝活性的变化及吸食相关基因表达模式方面的研究较少。本研究从菲牛蛭药材采收加工、吸食阶段各组织抗凝血酶活性及吸食相关基因表达的变化规律等方面入手,为科学地进行药材采收加工和吸食相关基因表达模式提供理论依据。主要研究结果如下:（1）在菲牛蛭药材采收及不同加工方法中,采用凝血酶滴定法对不同加工方法、不同采收部位和体重等级样品进行抗凝血酶活性测定。结果表明,在不同加工方法对菲牛蛭抗凝血酶活性影响试验中,菲牛蛭鲜品经冷冻干燥处理后其抗凝血酶活性最高,达到1303.56 U·g-1,而90 ℃烘干样品最低,为15.44 U·g-1;在不同采收部位抗凝血酶活性比较...
【文章来源】：南京农业大学江苏省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：97 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图３－１吸食阶段对菲牛蛭组织抗凝血酶活性的影响??Ｆｉｇ．?３?
ＮＣＢ１在线对菲牛蛭ＰＭＥ基因编码的氨基酸序列与其他物种Ｅｇｌｉｎ基因编码的氨??基酸序列进行比对分析，通过ＭＥＧＡ?７．０软件，采用Ｔｅｓｔ?Ｎｅｉｇｈｂｏｒ－Ｊｏｉｎｉｎｇ法构建系??统进化树（见图４－５）。结果表明，菲牛蛭ＰＭＥ基因编码氨基酸序列与已报道菲牛蛭??和欧洲医蛭Ｅｇｌｍ基因编码氨基酸序列同源性很高，与欧洲医蛭??的Ｅｇｌｉｎ?Ｃ氨基酸序列的同源性为８１％，与其它科属动植物同源性均较低。从进化树??上可看出菲牛輕ＰＭＥ基因与欧洲医輕ｗｅｄ／ｃ／ｎａｆｅ）、大麦（／／ｏｎｓｆｅｗｗ?ｖｗ／ｇａｒｅ）、??化胺链球菌（＊ＳＹｒｅｐｔｏｃｏｃｏ？／７＿ｙｏｇｅｎｅｉ’ＭＧＡＳ１５２５２）的Ｅｇｌｉｎｓ基因在进化关系上较近；??同科属之间Ｅｇｌｍｓ基因进化比较保守。??３６??
３．３?ＰＭＥ表达量特征分析??３．３．１菲牛蛭ＰＭＥ基因的组织表达量特征分析??如图４－７?（Ａ）所示，吸食前ＰＭＥ基因在菲牛蛭唾液腺、前吸盘、嗉囊、肌肉、??直五个组织中的相对表达量差异显著（户＜０．０５）。其中，嗉囊ＰＭＥ基因的相对表达??量是唾液腺的１３１２倍，显著高于其他组织（Ｐ＜０．０５），前吸盘的相对表达量显著低??于其他组织（Ｐ＜０．０５）。??吸食后ｌｄ，ＰＭＥ基因在菲牛睡五个组织中相对表达量差异显著（Ｐ＜０．０５），如??图４－７?（Ｂ）。其中嗉囊ＰＭＥ基因的相对表达量是唾液腺的７倍，显著高于其他组织??（Ｐ＜０．０５），肌肉的相对表达量显著低于其他组织（Ｐ＜０．０５）。??吸食后５ｄ，菲牛蛭五个组织的ＰＭＥ基因相对表达量差异显著（Ｐ＜０．０５），唾液??腺ＰＭＥ基因的相对表达量显著高于其他组织（尸＜０．０５），肌肉相对表达量显著低于??其他组织（Ｐ＜０．０５）
【参考文献】：
期刊论文
[1]组织蛋白酶与中药[J]. 刘杨,陈凤彩,杨长福,林昶. 中草药. 2015(22)
[2]菲牛蛭近20年的研究进展[J]. 潘雪,严亚萍,林亚明. 中西医结合研究. 2015(04)
[3]水蛭的本草考证及现代研究[J]. 曹静,赵文静,旺建伟,袁帅,高长久. 中医药信息. 2015(04)
[4]温度、密度、喂食周期对菲牛蛭育苗影响的研究[J]. 程搏幸,刘飞,郭巧生,史红专,李蒙蒙,卢昱希. 中国中药杂志. 2015(06)
[5]中药材产地加工的研究现状及展望[J]. 陈林伟,秦昆明,朱艳汇,蔡皓,李伟东,蔡宝昌. 中国中药杂志. 2015(04)
[6]菲牛蛭提取物体外抗肿瘤活性的研究[J]. 黄红坤,郑佳琳,王诺,黄小红,许惠英,王弋,任海涛,邝少松. 时珍国医国药. 2014(12)
[7]4种水蛭粗提物抗凝活性及冻存时间对菲牛蛭抗凝活性影响[J]. 李军,于翔,张健,张涛,龚元,金广海. 水产科学. 2014(09)
[8]不同温度和密度对菲牛蛭越冬成活率的影响[J]. 张涛,于翔,龚元,宋文华,李军,张健. 水产学杂志. 2014(04)
[9]蚂蟥不同月龄口器组织学及组织化学研究[J]. 刘宏,郭巧生,史红专,王嘉,李燕娴. 中国中药杂志. 2014(12)
[10]中药材商品规格等级标准研究现状及几个关键问题的商榷[J]. 杨光,曾燕,郭兰萍,黄璐琦,金艳,郑玉光,王永炎. 中国中药杂志. 2014(09)
博士论文
[1]活血化瘀中药抗肾间质纤维化的实验及临床研究[D]. 许庆友.河北医科大学 2002
硕士论文
[1]水蛭对大鼠肺纤维化模型干预作用及机制的研究[D]. 李晓娟.河北医科大学 2007
[2]水蛭桃仁煎剂对小鼠肝纤维化的治疗作用及机理研究[D]. 陈姝.武汉科技大学 2006
[3]水蛭微粉治疗早期脑梗死的临床研究及对急性脑缺血保护作用的实验研究[D]. 吴玉生.山东中医药大学 2003
[4]脑出血后脑水肿机制及水蛭治疗的实验研究[D]. 何宇平.浙江大学 2001
本文编号：3509205
【文章来源】：南京农业大学江苏省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：97 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图３－１吸食阶段对菲牛蛭组织抗凝血酶活性的影响??Ｆｉｇ．?３?
ＮＣＢ１在线对菲牛蛭ＰＭＥ基因编码的氨基酸序列与其他物种Ｅｇｌｉｎ基因编码的氨??基酸序列进行比对分析，通过ＭＥＧＡ?７．０软件，采用Ｔｅｓｔ?Ｎｅｉｇｈｂｏｒ－Ｊｏｉｎｉｎｇ法构建系??统进化树（见图４－５）。结果表明，菲牛蛭ＰＭＥ基因编码氨基酸序列与已报道菲牛蛭??和欧洲医蛭Ｅｇｌｍ基因编码氨基酸序列同源性很高，与欧洲医蛭??的Ｅｇｌｉｎ?Ｃ氨基酸序列的同源性为８１％，与其它科属动植物同源性均较低。从进化树??上可看出菲牛輕ＰＭＥ基因与欧洲医輕ｗｅｄ／ｃ／ｎａｆｅ）、大麦（／／ｏｎｓｆｅｗｗ?ｖｗ／ｇａｒｅ）、??化胺链球菌（＊ＳＹｒｅｐｔｏｃｏｃｏ？／７＿ｙｏｇｅｎｅｉ’ＭＧＡＳ１５２５２）的Ｅｇｌｉｎｓ基因在进化关系上较近；??同科属之间Ｅｇｌｍｓ基因进化比较保守。??３６??
３．３?ＰＭＥ表达量特征分析??３．３．１菲牛蛭ＰＭＥ基因的组织表达量特征分析??如图４－７?（Ａ）所示，吸食前ＰＭＥ基因在菲牛蛭唾液腺、前吸盘、嗉囊、肌肉、??直五个组织中的相对表达量差异显著（户＜０．０５）。其中，嗉囊ＰＭＥ基因的相对表达??量是唾液腺的１３１２倍，显著高于其他组织（Ｐ＜０．０５），前吸盘的相对表达量显著低??于其他组织（Ｐ＜０．０５）。??吸食后ｌｄ，ＰＭＥ基因在菲牛睡五个组织中相对表达量差异显著（Ｐ＜０．０５），如??图４－７?（Ｂ）。其中嗉囊ＰＭＥ基因的相对表达量是唾液腺的７倍，显著高于其他组织??（Ｐ＜０．０５），肌肉的相对表达量显著低于其他组织（Ｐ＜０．０５）。??吸食后５ｄ，菲牛蛭五个组织的ＰＭＥ基因相对表达量差异显著（Ｐ＜０．０５），唾液??腺ＰＭＥ基因的相对表达量显著高于其他组织（尸＜０．０５），肌肉相对表达量显著低于??其他组织（Ｐ＜０．０５）
【参考文献】：
期刊论文
[1]组织蛋白酶与中药[J]. 刘杨,陈凤彩,杨长福,林昶. 中草药. 2015(22)
[2]菲牛蛭近20年的研究进展[J]. 潘雪,严亚萍,林亚明. 中西医结合研究. 2015(04)
[3]水蛭的本草考证及现代研究[J]. 曹静,赵文静,旺建伟,袁帅,高长久. 中医药信息. 2015(04)
[4]温度、密度、喂食周期对菲牛蛭育苗影响的研究[J]. 程搏幸,刘飞,郭巧生,史红专,李蒙蒙,卢昱希. 中国中药杂志. 2015(06)
[5]中药材产地加工的研究现状及展望[J]. 陈林伟,秦昆明,朱艳汇,蔡皓,李伟东,蔡宝昌. 中国中药杂志. 2015(04)
[6]菲牛蛭提取物体外抗肿瘤活性的研究[J]. 黄红坤,郑佳琳,王诺,黄小红,许惠英,王弋,任海涛,邝少松. 时珍国医国药. 2014(12)
[7]4种水蛭粗提物抗凝活性及冻存时间对菲牛蛭抗凝活性影响[J]. 李军,于翔,张健,张涛,龚元,金广海. 水产科学. 2014(09)
[8]不同温度和密度对菲牛蛭越冬成活率的影响[J]. 张涛,于翔,龚元,宋文华,李军,张健. 水产学杂志. 2014(04)
[9]蚂蟥不同月龄口器组织学及组织化学研究[J]. 刘宏,郭巧生,史红专,王嘉,李燕娴. 中国中药杂志. 2014(12)
[10]中药材商品规格等级标准研究现状及几个关键问题的商榷[J]. 杨光,曾燕,郭兰萍,黄璐琦,金艳,郑玉光,王永炎. 中国中药杂志. 2014(09)
博士论文
[1]活血化瘀中药抗肾间质纤维化的实验及临床研究[D]. 许庆友.河北医科大学 2002
硕士论文
[1]水蛭对大鼠肺纤维化模型干预作用及机制的研究[D]. 李晓娟.河北医科大学 2007
[2]水蛭桃仁煎剂对小鼠肝纤维化的治疗作用及机理研究[D]. 陈姝.武汉科技大学 2006
[3]水蛭微粉治疗早期脑梗死的临床研究及对急性脑缺血保护作用的实验研究[D]. 吴玉生.山东中医药大学 2003
[4]脑出血后脑水肿机制及水蛭治疗的实验研究[D]. 何宇平.浙江大学 2001
本文编号：3509205
本文链接：https://www.wllwen.com/nykjlw/dzwbhlw/3509205.html
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