小麦全蚀病菌重组酶聚合酶检测方法的建立及应用

发布时间：2021-12-30 15:50

　　由禾顶囊壳小麦变种Gaeumannomyces graminis var.tritici引起的小麦全蚀病是危害极大的小麦土传真菌病害。本研究以小麦全蚀病菌β-tubulin为靶标基因设计重组酶聚合酶扩增技术（recombinase polymerase amplification,RPA）引物Gg-RPA-F/Gg-RPA-R和RPA探针Gg-LF-Probe,结合侧流层析试纸条,建立了小麦全蚀病菌RPA快速检测方法,该方法在38℃恒温条件下30 min内完成可视化检测,摆脱PCR仪等仪器设备的限制。小麦全蚀病菌RPA快速检测方法具有较高的检测特异性,其检测极限为10 pg/μL,与普通PCR一致。此外,小麦全蚀病菌RPA快速检测方法可从土壤中快速检测到小麦全蚀病菌,具有较强的实用性。因此,本研究建立的小麦全蚀病菌RPA快速检测方法具备简便高效、实用性强的特点,为小麦全蚀病菌的快速检测和病害早期诊断提供新技术。 

【文章来源】：植物保护. 2020,46(05)北大核心CSCD

【文章页数】：7 页

【部分图文】：

小麦全蚀病菌RPA检测方法的建立

将小麦全蚀病菌基因组DNA进行10倍梯度稀释,并以稀释液为模板分别进行RPA反应和普通PCR扩增。结果显示,1#～5#侧流层析试纸条检测呈阳性,而6#侧流层析试纸条检测呈阴性,表明RPA对小麦全蚀病菌基因组DNA的检测极限为10 pg/μL(图3a);普通PCR扩增产物经琼脂糖凝胶电泳检测,泳道1～泳道5均呈现248 bp的清晰条带,而泳道6无扩增产物,表明普通PCR对小麦全蚀病菌基因组DNA的检测极限亦为10 pg/μL(图3b)。2.4 小麦全蚀病菌RPA检测在土壤样品检测中的应用

对安徽地区9份疑似小麦全蚀病发病田块的土壤基因组DNA进行RPA反应和PCR扩增。结果显示,RPA从8份土壤中成功检测到小麦全蚀病菌,1份土壤不携带小麦全蚀病菌,阴性对照亦未检测到小麦全蚀病菌(图4a)。普通PCR检测结果与RPA检测结果一致(图4b),表明RPA技术可快速准确地从发病土壤中检测到小麦全蚀病菌(表2)。图4 土壤样品中小麦全蚀病菌的RPA检测

【参考文献】：
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本文编号：3558516