木豆内生细菌的分离、鉴定及促生抗菌活性的研究
发布时间：2022-01-05 09:59
目前,人们主要通过使用化学肥料和化学农药来提高农作物的产量,然而其存在很多不利的影响,如效果不持久、土壤环境污染等。通过施用微生物肥料和生防制剂来替代化肥、农药,可以改善化肥和化学农药带来的危害,实现农业的可持续发展。内生细菌是生活于健康植物的各种组织和器官中,而不引起宿主植物任何疾病的一类微生物。内生细菌具有促进植物生长的作用,利用其促生作用来开发微生物菌肥和生防制剂,在农业方面具有重大的研究意义。本研究以药用植物木豆为材料,采用梯度稀释涂板法对木豆内生细菌进行分离,并结合形态观察和16S rRNA序列分析方法对其鉴定;采用Salkowski 比色法,钼锑抗比色法,CAS检测法等方法对木豆内生细菌分泌植物生长素（IAA）,磷酸盐增溶,产铁载体等体外促生活性进行研究;利用平板抑制试验对菌株抗病活性进行研究并利用PCR和Voges-Proskauer法进一步验证菌株的抗菌和促生机制;通过盆栽试验,验证促生菌株对小麦幼苗的促生作用。研究结果如下:1.以木豆根、茎、叶为材料,将不同梯度的组织稀释涂布于NA、LB和TSA 3种培养基上进行分离培养,传代和纯化,最终获得纯化菌株54株。其中从NA...
【文章来源】：东北林业大学黑龙江省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：60 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图２－１培养基种类对内生细菌分离数量的影响??Ｆｕｒｅ?２－１?Ｅｆｆｅｃｔｏｍｅｄｉａ?ｔｅｓ?ｏｎ?ｔｈｅ?ｎｕｍｂｅｒ?ｏｆ?ｅｎｄｏｅｎｏｕｓ?ｂａｃｔｅｒｉａ?ｉｓｏｌａｔｅｄ??
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【参考文献】：
期刊论文
[1]稻田土壤固氮菌株的分离筛选及促生潜力[J]. 靳海洋,王慧,张燕辉,胡天龙,林志斌,刘本娟,蔺兴武,谢祖彬. 生物技术通报. 2020(06)
[2]人参内生假单胞菌G13476分离筛选及其抗肿瘤效果研究[J]. 鞠鑫,钱玮,胡翠英,马雪香,王桃云,郭伟强. 安徽农业科学. 2019(23)
[3]植物内生菌的生态学作用与天然产物研究现状及展望[J]. 郭宾会. 江苏农业科学. 2019(20)
[4]巨菌草内生细菌多样性及其促生特性[J]. 邓振山,李买平,郝雷,陈凯凯,李静,刘玉珍,张宝宝,齐向英. 草地学报. 2019(05)
[5]药用植物内生菌的多样性及其活性代谢产物功能研究进展[J]. 黄磊,高燕燕,许才万,曾亚军. 贵州林业科技. 2019(03)
[6]西双版纳保护区植物根际细菌的筛选及其促生能力研究[J]. 杨妍,龙云川,蒋娟,景兆鹏,周少奇. 微生物学通报. 2019(11)
[7]木豆素衍生物的合成及抗肿瘤活性研究[J]. 张磊,薛司徒,姜海伦,季兴跃,刘睿,李卓荣. 中国药物化学杂志. 2019(01)
[8]1株苎麻生防内生细菌的分离鉴定及抑菌能力[J]. 孙向平,陈梦雅,张梦君,高春生,余永廷,严准. 江苏农业科学. 2019(02)
[9]植物抗镉内生细菌筛选及其对小麦幼苗耐镉能力的影响[J]. 刘军生,解修超,罗阳兰,邓百万,曹乃馨,贾娇. 南方农业学报. 2018(12)
[10]多花黄精内生贝莱斯芽胞杆菌的分离鉴定及其抗菌与促生作用分析[J]. 迟惠荣,张亚惠,曾欣,陈卫良,毛碧增. 植物保护. 2019(04)
博士论文
[1]内生细菌ZSY-1对番茄灰霉病和早疫病的防治及促生效果研究[D]. 高振峰.山西农业大学 2018
[2]枯草杆菌fmb60的NRPS和Ⅰ型PKS基因簇代谢产物发掘及其生物活性研究[D]. 杨杰.南京农业大学 2017
[3]小麦内生细菌的种群多样性调查及其在小麦条锈病生物防治中的利用研究[D]. 庞发虎.广西大学 2016
[4]芽孢杆菌促生抑菌物质鉴定及机理研究[D]. 谢珊珊.南京农业大学 2015
[5]B9601-Y2菌株的基因组解析及部分功能验证[D]. 何鹏飞.华中农业大学 2014
[6]棉花黄萎病生防链霉菌的抗病促生作用及其机制研究[D]. 薛磊.西北农林科技大学 2013
[7]氮磷营养及氮形态对水曲柳幼苗生长和生理的影响机制[D]. 范志强.东北林业大学 2004
硕士论文
[1]木豆叶化学成分分析及单体体外抗细胞增殖活性研究[D]. 何小嫒.浙江工业大学 2019
[2]高产铁载体根际促生菌的筛选及其在土壤修复方面的潜在应用[D]. 李韵雅.江南大学 2018
[3]枯草芽孢杆菌SL-44对辣椒防病促生性能及作用机制研究[D]. 黄媛媛.石河子大学 2018
[4]特异性产牡荆苷木豆内生真菌Dichotomopilus funicola Y3的发酵工艺优化及其生物活性研究[D]. 马慧.东北林业大学 2018
[5]两种生境下山羽藓（Abietinella abietina）内生细菌多样性研究[D]. 萨仁格日勒.内蒙古大学 2017
[6]拮抗根癌土壤杆菌的桃内生细菌的筛选鉴定[D]. 李昱佳.中国农业科学院 2017
[7]莠去津降解菌的分离鉴定、降解特性和机理及其修复效果[D]. 王雲.浙江大学 2016
[8]亚适宜温光环境下营养液NO3--N/NH4+-N对黄瓜幼苗生长、氮吸收与代谢的影响[D]. 张小翠.中国农业科学院 2016
[9]枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）Y14对花生的促生防病效果及其机理研究[D]. 杨倩倩.山东农业大学 2016
[10]四种香料植物内生及根际菌中产香功能菌株的筛选及鉴定[D]. 储晓.云南大学 2016
本文编号：3570145
【文章来源】：东北林业大学黑龙江省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：60 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图２－１培养基种类对内生细菌分离数量的影响??Ｆｕｒｅ?２－１?Ｅｆｆｅｃｔｏｍｅｄｉａ?ｔｅｓ?ｏｎ?ｔｈｅ?ｎｕｍｂｅｒ?ｏｆ?ｅｎｄｏｅｎｏｕｓ?ｂａｃｔｅｒｉａ?ｉｓｏｌａｔｅｄ??
?２内生细菌的分离、鉴定及促生抗菌活性研究???Ｍ?１?２?３??■??２０００ｂｐ＾＾＾ＶＳ??１?ＯＯＯｂｐ?■?ｒ?１１，?ｉ??图２－５?ＢＥ－Ｒ４、ＢＥ－Ｒ２、ＢＥ－Ｌ３菌株的ＰＣＲ扩增产物琼脂糖凝胶电泳图??（Ｍ－标准分子量标记，１－３：?ＢＥ－Ｒ４、ＢＥ－Ｒ２、ＢＥ－Ｌ３）??Ｆｉｇｕｒｅ?２－５?Ａｇａｒｏｓｅ?ｇｅｌ?ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ?ｏｆ?ＰＣＲ?ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｐｒｏｄｕｃｔｓ?ｏｆ?ＢＥ－Ｒ４＾?ＢＥ－Ｒ２，?ＢＥ－Ｌ３??（Ｍ－ｓｔａｎｄａｒｄ?ｍｏｌｅｃｕｌａｒ?ｗｅｉｇｈｔ?ｍａｒｋｅｒ，?１－３：?ＢＥ－Ｒ４，?ＢＥ－Ｒ２，?ＢＥ－Ｌ３?）??将纯化后的ＰＣＲ产物进行测序获得基因序列，与ＢＬＡＳＴ数据库进行比较，找到其??同源序列，如表２－５。然后选取亲缘关系较近的序列进行对比，通过ＭＥＧＡ６邻接法构??建系统发育树，如图２－６所示。从图２－６的试验结果中发现，ＢＥ－Ｒ４与５ａｃ／／／ｗ?？??的支持率高达１００％，结合其菌株的形态特征，分析确定内生细菌ＢＥ－Ｒ４为枯草芽孢杆??菌ＢＥ－Ｒ２与／＾￡１＾〇？５〇？（２？／７以／＜如的支持率高达１００％，结合其菌株的??形态特征，分析确定内生细菌?ＢＥ－Ｒ２?为?Ｐｓｅｗｔ／ｏｍｃｗｏｓ＇ｐｗｎＶ／ａ；?ＢＥ－Ｌ３?与??的支持率高达１００％，结合其菌株的形态特征，分析确定内生细菌ＢＥ－Ｌ３为??Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ?ａｓｂｕｒｉａｅ。??表２－５内生细菌ＢＥ－Ｒ４、ＢＥ－Ｒ２、ＢＥ－Ｌ３序列和与其相近的Ｇｅｎｂａｎｋ序列??Ｔａｂｌｅ?２－５?Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ?ｏｆ?ＢＥ－Ｒ４＞?ＢＥ－Ｒ２＞?ＢＥ－Ｌ３
ｅｒｏｂａｃｔｅｒ?ａｓｂｕｒｉａｅ?ＪＱ７９５７８９??１００???ＢＥ－Ｌ３??Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ?ａｓｂｕｒｉａｅ?ＡＰ０１９６３０??Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ?ｐｕｔｉｄａ?ＫＰ７６２５６６???ＢＥ－Ｒ２??１００??Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ?ｐｕｔｉｄａ?ＦＪ２６２３６８??＾ａｃｉｌｌｕｓ?ｓｕｂｔｉｌｉｓ?ＫＵ９０４２９７????—??—Ｂａｃｉｌｌｕｓ?ｓｕｂｔｉｌｉｓ?ＭＫ３９２０４３??１００??ＢＥ－Ｒ４??Ｉ?１??０．０２０??图２－６ＢＥ－Ｒ４、ＢＥ－Ｒ２、ＢＥ－Ｌ３的菌株的系统发育树??Ｆｉｇｕｒｅ?２－６?Ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃ?ｒｅｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ?ｏｆ?ＢＥ－Ｒ４＞?ＢＥ－Ｒ２＞?ＢＥ－Ｌ３??２．５本章小结??本章利用梯度稀释涂板法，采用已经报道的常用于分离植物内生细菌的ＮＡ、ＬＢ、??ＴＳＡ培养基对木豆根、叶、茎中的内生细菌进行分离鉴定。首次从木豆根、叶、茎中分??离得到５４株内生细菌。其中，从ＮＡ培养基中分离得到２０株内生细菌，从ＬＢ和ＴＳＡ??培养基中分别分离得到１８和１６株内生细菌；在木豆根中发现３４株内生细菌，在叶中??茎中分别发现１５和５株内生细菌。本试验通过对内生细菌的菌落大孝颜色和边缘进??行初步筛选，并结合《伯杰氏细菌鉴定手册》的分析，将得到５４株内生细菌归类为三??种菌属：假单孢菌属ｓｐ．），肠杆菌属ｓｐ．），芽孢杆菌属??ｓｐ．）。并通过分子生物学鉴定法，筛选得到假单抱菌属ｓｐ．），??肠杆菌属（￡＞？如ｓｐ．），芽孢杆菌属（ＳａｃｖＹ／ｚｗ?ｓｐ．）的代表性菌株，分别为８￡－??Ｒ４、ＢＥ－Ｒ２、ＢＥ－Ｌ３。并通过１６Ｓ
【参考文献】：
期刊论文
[1]稻田土壤固氮菌株的分离筛选及促生潜力[J]. 靳海洋,王慧,张燕辉,胡天龙,林志斌,刘本娟,蔺兴武,谢祖彬. 生物技术通报. 2020(06)
[2]人参内生假单胞菌G13476分离筛选及其抗肿瘤效果研究[J]. 鞠鑫,钱玮,胡翠英,马雪香,王桃云,郭伟强. 安徽农业科学. 2019(23)
[3]植物内生菌的生态学作用与天然产物研究现状及展望[J]. 郭宾会. 江苏农业科学. 2019(20)
[4]巨菌草内生细菌多样性及其促生特性[J]. 邓振山,李买平,郝雷,陈凯凯,李静,刘玉珍,张宝宝,齐向英. 草地学报. 2019(05)
[5]药用植物内生菌的多样性及其活性代谢产物功能研究进展[J]. 黄磊,高燕燕,许才万,曾亚军. 贵州林业科技. 2019(03)
[6]西双版纳保护区植物根际细菌的筛选及其促生能力研究[J]. 杨妍,龙云川,蒋娟,景兆鹏,周少奇. 微生物学通报. 2019(11)
[7]木豆素衍生物的合成及抗肿瘤活性研究[J]. 张磊,薛司徒,姜海伦,季兴跃,刘睿,李卓荣. 中国药物化学杂志. 2019(01)
[8]1株苎麻生防内生细菌的分离鉴定及抑菌能力[J]. 孙向平,陈梦雅,张梦君,高春生,余永廷,严准. 江苏农业科学. 2019(02)
[9]植物抗镉内生细菌筛选及其对小麦幼苗耐镉能力的影响[J]. 刘军生,解修超,罗阳兰,邓百万,曹乃馨,贾娇. 南方农业学报. 2018(12)
[10]多花黄精内生贝莱斯芽胞杆菌的分离鉴定及其抗菌与促生作用分析[J]. 迟惠荣,张亚惠,曾欣,陈卫良,毛碧增. 植物保护. 2019(04)
博士论文
[1]内生细菌ZSY-1对番茄灰霉病和早疫病的防治及促生效果研究[D]. 高振峰.山西农业大学 2018
[2]枯草杆菌fmb60的NRPS和Ⅰ型PKS基因簇代谢产物发掘及其生物活性研究[D]. 杨杰.南京农业大学 2017
[3]小麦内生细菌的种群多样性调查及其在小麦条锈病生物防治中的利用研究[D]. 庞发虎.广西大学 2016
[4]芽孢杆菌促生抑菌物质鉴定及机理研究[D]. 谢珊珊.南京农业大学 2015
[5]B9601-Y2菌株的基因组解析及部分功能验证[D]. 何鹏飞.华中农业大学 2014
[6]棉花黄萎病生防链霉菌的抗病促生作用及其机制研究[D]. 薛磊.西北农林科技大学 2013
[7]氮磷营养及氮形态对水曲柳幼苗生长和生理的影响机制[D]. 范志强.东北林业大学 2004
硕士论文
[1]木豆叶化学成分分析及单体体外抗细胞增殖活性研究[D]. 何小嫒.浙江工业大学 2019
[2]高产铁载体根际促生菌的筛选及其在土壤修复方面的潜在应用[D]. 李韵雅.江南大学 2018
[3]枯草芽孢杆菌SL-44对辣椒防病促生性能及作用机制研究[D]. 黄媛媛.石河子大学 2018
[4]特异性产牡荆苷木豆内生真菌Dichotomopilus funicola Y3的发酵工艺优化及其生物活性研究[D]. 马慧.东北林业大学 2018
[5]两种生境下山羽藓（Abietinella abietina）内生细菌多样性研究[D]. 萨仁格日勒.内蒙古大学 2017
[6]拮抗根癌土壤杆菌的桃内生细菌的筛选鉴定[D]. 李昱佳.中国农业科学院 2017
[7]莠去津降解菌的分离鉴定、降解特性和机理及其修复效果[D]. 王雲.浙江大学 2016
[8]亚适宜温光环境下营养液NO3--N/NH4+-N对黄瓜幼苗生长、氮吸收与代谢的影响[D]. 张小翠.中国农业科学院 2016
[9]枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）Y14对花生的促生防病效果及其机理研究[D]. 杨倩倩.山东农业大学 2016
[10]四种香料植物内生及根际菌中产香功能菌株的筛选及鉴定[D]. 储晓.云南大学 2016
本文编号：3570145
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