家蚕热休克蛋白原核表达及其与绿僵菌素A互作的研究

发布时间：2022-01-09 06:41

　　绿僵菌素（destruxin）是金龟子绿僵菌Metarhizium anisopliae产生的一种环缩肽类化合物,绿僵菌素A（DA）是最常见的一种绿僵菌素同系物,具有杀虫活性,能抑制昆虫先天性免疫作用,但其分子水平的作用机制仍不清楚。本课题组在前期研究中,利用DA处理家蚕Bombyx mori Bm12细胞后,提取总蛋白质,再用蛋白酶降解,再通过电泳分离了特异性条带,经质谱鉴定该条带中包5种热休克蛋白（heat shock proteins,HSP）（BmHSP70,BmHSP75,BmHSP90,BmHSCP,BmHSP97）,疑似它们与DA存在互作关系。因此,本研究拟构建这5种家蚕热休克蛋白的原核表达系统,通过镍亲和层析分离纯化目标蛋白,然后采用生物膜干涉（Bio-Layer Interferometry,BLI）技术分析这些热休克蛋白与DA的亲和力,最后通过荧光定量PCR（quantitative real-time PCR,qPCR）技术对DA处理家蚕Bm12细胞后上述热休克蛋白基因表达量进行定量分析,验证其是否为DA的结合蛋白。本文研究结果将为阐明DA作用的分子机理提供参考。... 

【文章来源】：华南农业大学广东省

【文章页数】：66 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

绿僵菌素A(destruxinA)的结构式

图2.1生物膜干涉技术原理图2.3.1 实验仪器及试剂耗材1）Fortebio OctetK2 system（Pall OctetCorp., Menlo Park，CA）2）Assaybuffer：PBS(pH 7.4)+0.05% Tween‐203）StreptavidinSensors（ForteBio, part no. 18‐5019）4）Ligand（固化物）and Analyte（分析物）5）96‐well, flat bottom, black polypropylene microplates(Greiner Bio‐One part no5209)2.3.2 传感器偶联待测样品联样品为BmHSP75、BmHSP90 及 BmHSP70

生物传感器与蛋白样品偶联示意图

【参考文献】：
期刊论文
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[4]绿僵菌素A和B对斜纹夜蛾SL-1细胞的增殖抑制和致凋亡作用[J]. 孟翔,胡俊杰,金丰良,任顺祥.  昆虫学报. 2011(09)
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本文编号：3578167