转GmMAPKKK基因大豆花叶病毒抗性研究

发布时间：2022-01-10 02:53

　　大豆是世界上重要的粮食和油料作物,在其生长过程中感染的大豆花叶病是我国南方大豆最主要的叶部病害之一,不仅影响产量,而且能使籽粒发病形成褐斑,导致品质下降,影响出口外销。基于转基因技术对大豆进行新型育种,用以提高植株对各类胁迫的抗性,在传统育种途径的协同下改善种质,同时获得增强植物对抗病害的最佳方案,从而提高大豆的品质和产量,促进我国大豆产业的发展。促丝裂原活化蛋白激酶（Mitogen-activated protein kinases,MAPK）级联途径是生物体内重要的信号转导系统之一,具体通过三级激酶磷酸化方式进行信号转导（MAPKKKs、MAPKKs、MAPKs）,参与植株生长发育几乎各个过程以及生物胁迫和非生物胁迫的响应。本研究以大豆为材料,克隆得到一个隶属MAPKKKs的基因,命名为GmMAPKKK。采取农杆菌介导大豆子叶节转化法将GmMAPKKK导入到天隆一号受体中得到转基因T2代实验材料。通过摩擦接种花叶病毒,进一步通过对基因表达模式及生物学功能鉴定等研究,得到以下实验结果:（1）转GmMAPKKK基因植株鉴定:获得120株T2代生根苗,依次对其采取草丁膦涂抹法、bar试纸... 

【文章来源】：浙江大学浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

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【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图１．２病原菌、细菌等生物胁迫下激发ＭＡＰＫ级联途径的分子机制??Ｆｉｇ．?１．２?Ｐｌａｎｔ?ｍｉｔｏｇｅｎ－ａｃｔｉｖａｔｅｄ?ｐｒｏｔｅｉｎ?

＾图２．１转ＧｍＭ４尸基因重组表达载体ｐＢ７ＦＷＧ２．０??Ｆｉｇ．２．１?Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｖｅｃｔｏｒ?ｏｆ?ｐＢ７ＦＷＧ２．０?ｆｏｒ?ＧｍＭＡＰＫＫＫ?ｇｅｎｅ．??２．１．２实验试剂??

?２．３．２?６仰试纸条检测法鉴定丁２代转尸？Ｃ基因植株结果??试纸条检测结果如图２．３所示，Ｔ２代非转基因植株ＣＫ的测试线不显??现红色，仅显示一条对照线，由此说明该植株中不含蛋白；对经草丁膦初步??筛检测显示阳性的１０２株转基因植株再进行以ｒ试纸条测定，结果显示，对照线??和测试线均呈现红色，表明均为阳性植株。??ＣＫ?１?２?３?４?５?６?７??８－?ｋＭＭＭ??＿圈??，，葡??Ｉ?＾?｜??Ｍ??图２．?３?Ｔ２代转ＧｗＭ＾ａＡ：基因大豆植株６ａ／■试纸条裣测结果。丨－７表示７个独立的转基因??株系的阳性植株；ＣＫ为非转基因植株。??Ｆｉｇ?．２．３?Ｓｅｖｅｎ?ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔ?Ｔ２?ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ?ｌｉｎｅｓ?（１－７）?ｃｏｍｐａｒｅｄ?ｗｉｔｈ?ｎｏｎ－ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ?ｐｌａｎｔ?ＣＫ?ｗｅｒｅ??ｓｅｌｅｃｔｅｄ?ｆｏｒ?ｖｅｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｂｙ?ｂａｒ?ｐｒｏｔｅｉｎ?ｑｕｉｃｋ?ｄｉｐ?ｓｔｒｉｐ．??２．３．３?ＰＣＲ检测法鉴定Ｔ２代转基因植株结果??ＰＣＲ检测结果如图２．４显示，非转基因植株（ＣＫ）?ＤＮＡ扩增结果显示没有相??应的Ｚｗ基因目的条带（４３６?ｂｐ），？而丨０２株Ｔ２代转基因植株ＤＮＡ扩增产物中均??能检测到目的条带，为阳性植株。??Ｍ?＋?ＣＫ１２３４?５?６?７??图２．３?丁２代转基因大豆植株ＰＣＲ检测结果。１－７表示７个独立的


本文编号：3579919