蝗绿僵菌Macwh基因功能研究
发布时间：2022-01-11 03:56
真菌细胞壁涉及细胞附着,形态建成等多种生理功能。细胞壁在病原性真菌的抗逆及侵染致病过程中发挥着非常重要的作用。荧光增白剂高度敏感蛋白cwh具有维持细胞壁完整性的功能,这一现象仅在酿酒酵母中有报道,在致病真菌中尚无该类基因的研究和报道。昆虫病原真菌具有独特的体壁侵染方式,细胞壁在病原性真菌的抗逆及侵染致病过程中发挥着十分重要的作用。本研究以蝗绿僵菌（Metarhizium acridum）为实验材料,通过同源重组的方法构建该基因的敲除及回复菌株对该基因进行功能研究。获得了以下实验结果:1.Macwh1和Macwh2生物信息学分析根据蝗绿僵菌基因组序列设计引物,克隆得到Macwh1和Macwh2基因,生物信息学分析表明Macwh1与Macwh2编码的氨基酸序列无同源性。其中Macwh1登录号为XP007815818,编码957个氨基酸,等电点为7.02,蛋白质分子量为107.02KDa,基因组含7个内含子。Macwh2登录号为XP007808921,编码的氨基酸133个,等电点为9.48,蛋白质分子量为13.85KDa,基因组含2个内含子。2.M...
【文章来源】：重庆大学重庆市 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：64 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
Macwh1、Macwh2的生物信息学分析
28LCWH1F/PtR2与RCWH1R/BaF2为引物，PCR扩增后分别得到约1200bp、1100bp的条带（图2.2 b），证明Macwh1左右臂成功连接在Bar基因的两侧。在构建回复载体时，先对Macwh1全长序列进行克隆，再连接于带有Sur筛选标记的载体中完成回复载体的构建（图2.2 a）。以农杆菌介导转化蝗绿僵菌，获得Macwh1的敲出转化子，利用选择培养基对转化子进行初步筛选，然后进行Southern blot验证。在野生型中检测得到一条约4000 bp的条带，在敲除突变体中，由于Bar基因成功替代了含有BglII酶切位点的那段序列，得到约2600 bp的条带
同理，以同源重组的原理在抗性筛选标记基因Sur基因的上下游分别连接上Macwh2基因的左右臂，完成敲除载体的构建（图2.3 a）。分别以LCWH2F/Sur-R与RCWH2R/Sur-F为引物， PCR验证后电泳检测得到约1100bp、1200bp的条带（图2.3 b），证明Macwh1左右臂成功连接在Sur基因的两侧。在构建回复载体中，先对Macwh2全长序列进行克隆，再连接于带有Bar基因筛选标记的载体中完成回复载体的构建（图2.3 a）。通过农杆菌介导转化蝗绿僵菌，再利用选择培养基对转化子进行初步筛选，然后进行Southern blot验证，在野生型中检测得到一条约2000 bp的条带
本文编号：3582039
【文章来源】：重庆大学重庆市 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：64 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
Macwh1、Macwh2的生物信息学分析
28LCWH1F/PtR2与RCWH1R/BaF2为引物，PCR扩增后分别得到约1200bp、1100bp的条带（图2.2 b），证明Macwh1左右臂成功连接在Bar基因的两侧。在构建回复载体时，先对Macwh1全长序列进行克隆，再连接于带有Sur筛选标记的载体中完成回复载体的构建（图2.2 a）。以农杆菌介导转化蝗绿僵菌，获得Macwh1的敲出转化子，利用选择培养基对转化子进行初步筛选，然后进行Southern blot验证。在野生型中检测得到一条约4000 bp的条带，在敲除突变体中，由于Bar基因成功替代了含有BglII酶切位点的那段序列，得到约2600 bp的条带
同理，以同源重组的原理在抗性筛选标记基因Sur基因的上下游分别连接上Macwh2基因的左右臂，完成敲除载体的构建（图2.3 a）。分别以LCWH2F/Sur-R与RCWH2R/Sur-F为引物， PCR验证后电泳检测得到约1100bp、1200bp的条带（图2.3 b），证明Macwh1左右臂成功连接在Sur基因的两侧。在构建回复载体中，先对Macwh2全长序列进行克隆，再连接于带有Bar基因筛选标记的载体中完成回复载体的构建（图2.3 a）。通过农杆菌介导转化蝗绿僵菌，再利用选择培养基对转化子进行初步筛选，然后进行Southern blot验证，在野生型中检测得到一条约2000 bp的条带
本文编号：3582039
本文链接：https://www.wllwen.com/nykjlw/dzwbhlw/3582039.html
最近更新
教材专著
