苹果树腐烂病菌一个根皮苷降解酶基因和两个博来霉素抗性基因的功能研究
发布时间：2022-01-21 09:32
苹果树腐烂病是由子囊菌黑腐皮壳属真菌Valsa mali引起的苹果树枝干病害。该病在我国普遍发生,能引起苹果树主干、主枝皮层腐烂,乃至整株枯死,严重影响我国苹果产业的发展。苹果树腐烂病的研究已深入到分子层面,但其治病机理尚不完全明确。苹果树腐烂病能降解根皮苷产生有毒物质,这些有毒物质能引起和树皮自然感病一样的腐烂症状,腐烂的组织内有大量微生物定殖,这些微生物与腐烂病菌之间能发生水平基因转移。本研究基于V.mali全基因组数据,鉴定到糖苷类水解酶（GH）家族Ⅰ的1个乳糖根皮苷水解酶（LPH）基因Vmlph1,及两个具有博来霉素抗性的水平转移基因（HGT）Vmhgt14和Vmhgt32。明确这三个基因在苹果树腐烂病菌侵染和治病过程中的作用,为探究病菌的适应机制及致病机理奠定基础。本研究利用Double-joint PCR构建基因敲除载体,结合PEG介导的原生质体转化对目的基因进行敲除,通过PCR检测及Southern Blot验证单拷贝突变体,并对突变体进行研究,取得如下结果:1.经PCR检测及Southern Blot验证,获得Vmlph1基因的敲除突变体1个。与野生型菌株03-8相比,...
【文章来源】：西北农林科技大学陕西省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：48 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
Vmlph1基因敲除突变体验证Fig.2-1VerificationoftheVmlph1deletionmutant
14苹果树腐烂病菌一个根皮苷降解酶基因和两个博来霉素抗性基因的功能研究图2-2野生型03-8及各突变体在PDA培养基上的营养生长观察与分析Fig.2-2Observationandanalysisofvegetativegrowthofwildtype03-8andthemutantsinPDAmedium2.3.4产孢变化观察在光暗交替（光照∶黑暗=12h/d∶12h/d）条件下培养30d后，PDA和ABA培养基上野生型03-8和突变体菌株都有分生孢子器生成。在PDA和ABA培养基上野生型03-8菌株产生分生孢子器平均数量分别为313、340个，ΔVmlph1菌株产生分生孢子器平均数量分别为133、166个。与野生型03-8相比，突变体ΔVmlph1在PDA和ABA培养基上数量都显著减少（图2-3）。表明Vmlph1影响苹果腐烂病菌分生孢子产生。图2-3野生型03-8和突变体在PDA和ABA培养基上的产孢情况星号(*)表示显著性差异（P=0.05）Figure.2-3Pycnidiaformationofthewildtype03-8andthemutantwereinoculatedonthePDAandABAmediumsasterisk(*)indicatesignificantdifference（P=0.05）2.3.5致病力检测野生型03-8与ΔVmlph1在叶片上侵染病斑平均直径分别为20.70mm、16.10mm，在枝条上侵染病斑平均直径分别为22.70mm、20.20mm。与野生型03-8相比，突变体ΔVmlph1致病力显著降低，在叶片上致病力降低22.0%，在枝条上致病力降低11.0%（图2-4）。表明Vmlph1基因影响病菌致病力。
14苹果树腐烂病菌一个根皮苷降解酶基因和两个博来霉素抗性基因的功能研究图2-2野生型03-8及各突变体在PDA培养基上的营养生长观察与分析Fig.2-2Observationandanalysisofvegetativegrowthofwildtype03-8andthemutantsinPDAmedium2.3.4产孢变化观察在光暗交替（光照∶黑暗=12h/d∶12h/d）条件下培养30d后，PDA和ABA培养基上野生型03-8和突变体菌株都有分生孢子器生成。在PDA和ABA培养基上野生型03-8菌株产生分生孢子器平均数量分别为313、340个，ΔVmlph1菌株产生分生孢子器平均数量分别为133、166个。与野生型03-8相比，突变体ΔVmlph1在PDA和ABA培养基上数量都显著减少（图2-3）。表明Vmlph1影响苹果腐烂病菌分生孢子产生。图2-3野生型03-8和突变体在PDA和ABA培养基上的产孢情况星号(*)表示显著性差异（P=0.05）Figure.2-3Pycnidiaformationofthewildtype03-8andthemutantwereinoculatedonthePDAandABAmediumsasterisk(*)indicatesignificantdifference（P=0.05）2.3.5致病力检测野生型03-8与ΔVmlph1在叶片上侵染病斑平均直径分别为20.70mm、16.10mm，在枝条上侵染病斑平均直径分别为22.70mm、20.20mm。与野生型03-8相比，突变体ΔVmlph1致病力显著降低，在叶片上致病力降低22.0%，在枝条上致病力降低11.0%（图2-4）。表明Vmlph1基因影响病菌致病力。
【参考文献】：
期刊论文
[1]苹果树腐烂病菌多聚半乳糖醛酸酶基因Vmpg7和Vmpg8的功能[J]. 许春景,吴玉星,戴青青,李正鹏,高小宁,黄丽丽. 中国农业科学. 2016(08)
[2]中国苹果病害发生与分布现状调查[J]. 胡清玉,胡同乐,王亚南,王树桐,曹克强. 植物保护. 2016(01)
[3]苹果树腐烂病菌非核糖体多肽合成酶基因VmNRPS12的功能[J]. 马晨琛,李正鹏,戴青青,韩青梅,黄丽丽. 微生物学报. 2016(08)
[4]甘肃省苹果树腐烂病发生和防治情况调查[J]. 薛应钰,靳小刚,李海军,张树武,徐秉良,范万泽. 甘肃农业大学学报. 2015(06)
[5]陕西宝鸡红富士苹果树腐烂病发生情况调查[J]. 焦浩,侯建华,侯红利. 中国果树. 2014(03)
[6]陕西省苹果树腐烂病周年消长及分生孢子传播规律研究[J]. 杜战涛,李正鹏,高小宁,黄丽丽,韩青梅. 果树学报. 2013(05)
[7]陕西渭北地区苹果树腐烂病发生情况调查[J]. 李正鹏,高小宁,杜战涛,胡杨,康振生,黄丽丽. 西北农业学报. 2013(01)
[8]RP-HPLC法测定苹果树枝、叶中根皮苷的含量[J]. 李荣涛,刘杰超,焦中高,王思新,杜先锋. 食品工业科技. 2009(12)
[9]中国苹果树腐烂病发生和防治情况调查[J]. 曹克强,国立耘,李保华,孙广宇,陈汉杰. 植物保护. 2009(02)
[10]高效液相色谱法快速测定红富士苹果渣中的6种多酚[J]. 陈磊,杨建荣,黄雪松. 食品与发酵工业. 2008(08)
硕士论文
[1]苹果树腐烂病菌阿魏酸酯酶家族基因的克隆及其致病功能分析[D]. 许铭.西北农林科技大学 2015
[2]苹果树腐烂病菌4个多聚半乳糖醛酸酶基因功能的初步研究[D]. 宋娜.西北农林科技大学 2014
[3]陕西苹果树腐烂病菌不同分离株生物学特性及致病性研究[D]. 臧睿.西北农林科技大学 2006
本文编号：3600016
【文章来源】：西北农林科技大学陕西省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：48 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
Vmlph1基因敲除突变体验证Fig.2-1VerificationoftheVmlph1deletionmutant
14苹果树腐烂病菌一个根皮苷降解酶基因和两个博来霉素抗性基因的功能研究图2-2野生型03-8及各突变体在PDA培养基上的营养生长观察与分析Fig.2-2Observationandanalysisofvegetativegrowthofwildtype03-8andthemutantsinPDAmedium2.3.4产孢变化观察在光暗交替（光照∶黑暗=12h/d∶12h/d）条件下培养30d后，PDA和ABA培养基上野生型03-8和突变体菌株都有分生孢子器生成。在PDA和ABA培养基上野生型03-8菌株产生分生孢子器平均数量分别为313、340个，ΔVmlph1菌株产生分生孢子器平均数量分别为133、166个。与野生型03-8相比，突变体ΔVmlph1在PDA和ABA培养基上数量都显著减少（图2-3）。表明Vmlph1影响苹果腐烂病菌分生孢子产生。图2-3野生型03-8和突变体在PDA和ABA培养基上的产孢情况星号(*)表示显著性差异（P=0.05）Figure.2-3Pycnidiaformationofthewildtype03-8andthemutantwereinoculatedonthePDAandABAmediumsasterisk(*)indicatesignificantdifference（P=0.05）2.3.5致病力检测野生型03-8与ΔVmlph1在叶片上侵染病斑平均直径分别为20.70mm、16.10mm，在枝条上侵染病斑平均直径分别为22.70mm、20.20mm。与野生型03-8相比，突变体ΔVmlph1致病力显著降低，在叶片上致病力降低22.0%，在枝条上致病力降低11.0%（图2-4）。表明Vmlph1基因影响病菌致病力。
14苹果树腐烂病菌一个根皮苷降解酶基因和两个博来霉素抗性基因的功能研究图2-2野生型03-8及各突变体在PDA培养基上的营养生长观察与分析Fig.2-2Observationandanalysisofvegetativegrowthofwildtype03-8andthemutantsinPDAmedium2.3.4产孢变化观察在光暗交替（光照∶黑暗=12h/d∶12h/d）条件下培养30d后，PDA和ABA培养基上野生型03-8和突变体菌株都有分生孢子器生成。在PDA和ABA培养基上野生型03-8菌株产生分生孢子器平均数量分别为313、340个，ΔVmlph1菌株产生分生孢子器平均数量分别为133、166个。与野生型03-8相比，突变体ΔVmlph1在PDA和ABA培养基上数量都显著减少（图2-3）。表明Vmlph1影响苹果腐烂病菌分生孢子产生。图2-3野生型03-8和突变体在PDA和ABA培养基上的产孢情况星号(*)表示显著性差异（P=0.05）Figure.2-3Pycnidiaformationofthewildtype03-8andthemutantwereinoculatedonthePDAandABAmediumsasterisk(*)indicatesignificantdifference（P=0.05）2.3.5致病力检测野生型03-8与ΔVmlph1在叶片上侵染病斑平均直径分别为20.70mm、16.10mm，在枝条上侵染病斑平均直径分别为22.70mm、20.20mm。与野生型03-8相比，突变体ΔVmlph1致病力显著降低，在叶片上致病力降低22.0%，在枝条上致病力降低11.0%（图2-4）。表明Vmlph1基因影响病菌致病力。
【参考文献】：
期刊论文
[1]苹果树腐烂病菌多聚半乳糖醛酸酶基因Vmpg7和Vmpg8的功能[J]. 许春景,吴玉星,戴青青,李正鹏,高小宁,黄丽丽. 中国农业科学. 2016(08)
[2]中国苹果病害发生与分布现状调查[J]. 胡清玉,胡同乐,王亚南,王树桐,曹克强. 植物保护. 2016(01)
[3]苹果树腐烂病菌非核糖体多肽合成酶基因VmNRPS12的功能[J]. 马晨琛,李正鹏,戴青青,韩青梅,黄丽丽. 微生物学报. 2016(08)
[4]甘肃省苹果树腐烂病发生和防治情况调查[J]. 薛应钰,靳小刚,李海军,张树武,徐秉良,范万泽. 甘肃农业大学学报. 2015(06)
[5]陕西宝鸡红富士苹果树腐烂病发生情况调查[J]. 焦浩,侯建华,侯红利. 中国果树. 2014(03)
[6]陕西省苹果树腐烂病周年消长及分生孢子传播规律研究[J]. 杜战涛,李正鹏,高小宁,黄丽丽,韩青梅. 果树学报. 2013(05)
[7]陕西渭北地区苹果树腐烂病发生情况调查[J]. 李正鹏,高小宁,杜战涛,胡杨,康振生,黄丽丽. 西北农业学报. 2013(01)
[8]RP-HPLC法测定苹果树枝、叶中根皮苷的含量[J]. 李荣涛,刘杰超,焦中高,王思新,杜先锋. 食品工业科技. 2009(12)
[9]中国苹果树腐烂病发生和防治情况调查[J]. 曹克强,国立耘,李保华,孙广宇,陈汉杰. 植物保护. 2009(02)
[10]高效液相色谱法快速测定红富士苹果渣中的6种多酚[J]. 陈磊,杨建荣,黄雪松. 食品与发酵工业. 2008(08)
硕士论文
[1]苹果树腐烂病菌阿魏酸酯酶家族基因的克隆及其致病功能分析[D]. 许铭.西北农林科技大学 2015
[2]苹果树腐烂病菌4个多聚半乳糖醛酸酶基因功能的初步研究[D]. 宋娜.西北农林科技大学 2014
[3]陕西苹果树腐烂病菌不同分离株生物学特性及致病性研究[D]. 臧睿.西北农林科技大学 2006
本文编号：3600016
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