益生菌的筛选及其对王锦蛇影响的初步研究
发布时间：2022-01-24 02:19
益生菌在畜禽养殖业中有着广泛应用,而在特种养殖动物中,特别是蛇类养殖中鲜见研究报道。为了探究益生菌对蛇的影响,本课题筛选出益生菌,以人工养殖的王锦蛇为研究对象,进行了为期42天的喂养试验,为益生菌在蛇类养殖业中的推广应用奠定理论基础。从4株益生菌中挑选到1株经异常毒性检查、安全性检查、消化液耐受和药敏试验符合要求的益生菌,以表型特征检查和16s rDNA序列测定的方法鉴定细菌。采用单因素变量法和正交试验优化培养获得益生菌液,按1mL/100g体重的剂量给试验蛇灌服108cfu/mL的益生菌液,分别采集粪样和血样,进行肠道菌群、蛋白质、白细胞等生理生化指标测定,结果如下:1.筛选到的符合要求的益生菌为地衣芽孢杆菌。2.地衣芽孢杆菌优化培养基组方为蛋白胨10g/L、牛肉膏15g/L、酵母粉3g/L、磷酸二氢钾2g/L,最佳培养条件为37℃,pH7.2,摇床转速200rpm,培养10h。3.灌服了益生菌的试验组王锦蛇的肠道大肠杆菌、产气荚膜梭菌含量比对照组低,肠道粪肠球菌含量比对照组高,粪便蛋白质的含量比对照组低;与对照组相比,实验组王锦蛇血液中总胆红素、丙二醛的含量、谷丙转氨酶的活性均降低...
【文章来源】：广西大学广西壮族自治区 211工程院校
【文章页数】：85 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图２－１细菌鉴定结果??Ｆｉｕｒｅ?２－１?Ｂａｃｔｅｒｉａｌ?ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｒｅｓｕｌｔｓ??
益生菌的筛选及其对王锦蛇影响的初步研究??②号菌ＰＣＲ产物经电泳后在凝胶成像系统观察发现，在１５００ｂｐ处有明显的??条带，如图２－２所示，菌株的１６ＳｒＲＮＡ基因相关序列见附录。将测序得到的序??列登录ＮＣＢＩ进行同源性比对，发现②号菌为地衣芽孢杆菌，与多株己经鉴定的??地衣芽孢杆菌（登陆号ＮＲ１１８９９６．１，ＮＲ０７４９２３．１?和ＮＲ１１６０２３．１）同源性达到９９％。??图２－２②号菌ＰＣＲ产物电泳图??Ｆｉｇｕｒｅ?２－２?Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ?ｍａｐ?ｏｆ?ＰＣＲ?ｐｒｏｄｕｃｔ?ｏｆ?Ｎｏ．?２??在图２－２中Ｍ为Ｍａｒｋｅｒ２０００，２是②号菌，阴为空白对照??Ｉｎ?Ｆｉｇｕｒｅ?２－２，?Ｍ?ｉｓ?Ｍａｒｋｅｒ２０００，?２?ｉｓ?Ｎｏ．?２，?ａｎｄ?ｎｅｇａｔｉｖｅ?ｉｓ?ａ?ｂｌａｎｋ?ｃｏｎｔｒｏｌ．??２．５分析与讨论??本试验所用的４株细菌虽然是在某益生菌产品上分离得到的优势菌株，但产??品是否被污染以及菌株在保存过程中是否出现变异具备了毒性还不得而知。李月??丹等人研究发现，往小鼠腹腔内注射蜡样芽胞杆菌，虽未引起小鼠死亡，但??是可以从肺脏和脑组织中分离到蜡样芽孢杆菌，说明这株细菌存有安全隐患；陈??怀涛［１１２］发现地衣芽孢杆菌也存在安全问题
３．４结果??３．４．１地衣芽孢杆菌最适无机盐??如图３－１所示，益生菌在添加了?４号无机盐即磷酸二氢钾的培养基发酵６ｈ??后菌液〇Ｄ６（Ｍ）最大为０．６６，添加无机盐为氯化钠、氯化钙和硫酸镁的菌液ＯＤ＿??均小于０．６６，说明这株地衣芽孢杆菌的最适无机盐为鱗酸二氢钾。??０．７０??０．６０?ｔ〇．６６??〇５〇?ｍｓ＾?０５５??０．５１??雙?０４０?ｍ?＾０－４３?爨：－）ｍｗ??－?０．４０??Ｉ。３。圓圓繼Ｐ．丨隱到■菌液①值??Ｈ?ＨＩ?Ｂ??Ｈｉ?ＩＨ??〇．〇〇??氯化钠?氯化钙?硫酸镁磷酸二氢钾氪化钾??无机盐种类??图３－１无机盐对地衣芽孢杆菌生长的影??Ｆｉｇｕｒｅ?３－１?Ｅｆｆｅｃｔ?ｏｆ?ｉｎｏｒｇａｎｉｃ?ｓａｌｔｓ?ｏｎ?ｔｈｅ?ｇｒｏｗｔｈ?ｏｆ?Ｂ．Ｌ??３．４．２地衣芽孢杆菌体外培养最适条件??从图３－２可以看出，在一定范围内随着转速的增加，菌液的ＯＤ６（Ｗ值也随着??增加；当摇床的转速为２００ｒｐｍ时ＯＤ６ＱＱ值达到最大，随着转速的再增加菌液的??〇Ｄ６（Ｋ）值呈现下降趋势；所以该菌体外培养的最佳转速为２００ｒｐｍ。??２
【参考文献】：
期刊论文
[1]斑点叉尾■血液学指标及血细胞特点分析[J]. 孙翰昌,杨帆,郭玉阳. 江苏农业科学. 2019(04)
[2]一株牦牛源屎肠球菌对小鼠肠道微生物、形态和免疫功能的影响[J]. 杨运南,杨昌福,刘亚楠,罗璠,字向东,高彦华. 中国饲料. 2019(05)
[3]益生菌制剂治疗2型糖尿病临床疗效的Meta分析[J]. 朱丽丽,薛静,王振,杨小利,李珂,刘萍,王浩. 中国微生态学杂志. 2019(02)
[4]枯草芽孢杆菌产中性蛋白酶发酵条件的优化[J]. 刘文龙,刘胜利,王兴吉,王克芬,王帅. 化学与生物工程. 2019(01)
[5]血尿酸水平在评估急性胃肠炎儿童脱水程度中的应用[J]. 王梵烨,林秀芝,方金涌,朱勇斌,蔡幸生. 广东医科大学学报. 2018(06)
[6]复合益生菌制剂对肉仔鸡生产性能、血清生化指标和免疫功能的影响[J]. 刘淑娇,张东旭,刘丽敏. 中国饲料. 2019(02)
[7]丁酸梭菌和地衣芽孢杆菌对北京鸭生长性能、血清生化和免疫指标及免疫器官指数的影响[J]. 袁慧坤,袁文华,赵文文,刘香杉,李国勤,杜雪,沈军达,李柳萌,卢立志,刁新平. 动物营养学报. 2018(11)
[8]枯草芽孢杆菌产生的抗菌物质的研究进展[J]. 王晓彤,金黎明,宫小明,郝苗,权春善,赵晶,侯熙彦. 轻工科技. 2018(11)
[9]内服中药联合中药结肠透析对慢性肾衰竭早期血肌酐、尿素氮的影响[J]. 张世仙. 现代医学与健康研究电子杂志. 2018(18)
[10]山羊单增李斯特杆菌病的诊断与防治[J]. 唐慕德,温宇婷,吴青青,阿依江·阿比提,伍钢,KASSIM ALIBAKAR,邓秋纯,刘犇,郑文亚. 中国畜牧兽医. 2018(10)
博士论文
[1]新型丁酸梭菌筛选及其对断奶仔猪生长性能和肠道功能影响的研究[D]. 王腾浩.浙江大学 2015
[2]益生菌的筛选鉴定及其对断奶仔猪、犊牛生长和消化道微生物的影响[D]. 董晓丽.中国农业科学院 2013
[3]日粮添加纳豆枯草芽孢杆菌对奶牛生产性能、瘤胃发酵及功能微生物的影响[D]. 邓露芳.中国农业科学院 2009
硕士论文
[1]益生菌对草鱼生长、营养代谢和机体免疫的影响[D]. 薛俊敬.南昌大学 2018
[2]复合益生菌制剂对肉鸡生长、免疫功能及肠道菌群的影响[D]. 谢文惠.黑龙江八一农垦大学 2018
[3]肠道益生菌对非酒精性脂肪肝的肝肾代谢功能的影响[D]. 张琳娜.青岛大学 2017
[4]益生菌发酵工艺、冻干保护剂优化与活性研究[D]. 于焕.辽宁大学 2017
[5]具有缓解结直肠癌功能的乳酸菌的筛选与机制研究[D]. 王尔胤.江南大学 2017
[6]三种益生菌对肉羊甲烷排放、物质代谢和瘤胃发酵的影响[D]. 肖怡.塔里木大学 2016
[7]复合益生菌对断奶幼犬生长和肠道菌群及抗氧化能力的影响[D]. 陈如愿.内蒙古农业大学 2016
[8]产共轭亚油酸乳酸菌对DSS诱导小鼠结肠炎的改善作用[D]. 王俊通.江南大学 2016
[9]益生菌制剂对断奶仔猪肠道黏膜屏障功能的影响及其机理的研究[D]. 庞敏.中国农业科学院 2016
[10]地衣芽孢杆菌H2对坏死性肠炎肉鸡生长性能及肠道菌群的影响[D]. 周梦佳.四川农业大学 2016
本文编号：3605639
【文章来源】：广西大学广西壮族自治区 211工程院校
【文章页数】：85 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图２－１细菌鉴定结果??Ｆｉｕｒｅ?２－１?Ｂａｃｔｅｒｉａｌ?ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｒｅｓｕｌｔｓ??
益生菌的筛选及其对王锦蛇影响的初步研究??②号菌ＰＣＲ产物经电泳后在凝胶成像系统观察发现，在１５００ｂｐ处有明显的??条带，如图２－２所示，菌株的１６ＳｒＲＮＡ基因相关序列见附录。将测序得到的序??列登录ＮＣＢＩ进行同源性比对，发现②号菌为地衣芽孢杆菌，与多株己经鉴定的??地衣芽孢杆菌（登陆号ＮＲ１１８９９６．１，ＮＲ０７４９２３．１?和ＮＲ１１６０２３．１）同源性达到９９％。??图２－２②号菌ＰＣＲ产物电泳图??Ｆｉｇｕｒｅ?２－２?Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ?ｍａｐ?ｏｆ?ＰＣＲ?ｐｒｏｄｕｃｔ?ｏｆ?Ｎｏ．?２??在图２－２中Ｍ为Ｍａｒｋｅｒ２０００，２是②号菌，阴为空白对照??Ｉｎ?Ｆｉｇｕｒｅ?２－２，?Ｍ?ｉｓ?Ｍａｒｋｅｒ２０００，?２?ｉｓ?Ｎｏ．?２，?ａｎｄ?ｎｅｇａｔｉｖｅ?ｉｓ?ａ?ｂｌａｎｋ?ｃｏｎｔｒｏｌ．??２．５分析与讨论??本试验所用的４株细菌虽然是在某益生菌产品上分离得到的优势菌株，但产??品是否被污染以及菌株在保存过程中是否出现变异具备了毒性还不得而知。李月??丹等人研究发现，往小鼠腹腔内注射蜡样芽胞杆菌，虽未引起小鼠死亡，但??是可以从肺脏和脑组织中分离到蜡样芽孢杆菌，说明这株细菌存有安全隐患；陈??怀涛［１１２］发现地衣芽孢杆菌也存在安全问题
３．４结果??３．４．１地衣芽孢杆菌最适无机盐??如图３－１所示，益生菌在添加了?４号无机盐即磷酸二氢钾的培养基发酵６ｈ??后菌液〇Ｄ６（Ｍ）最大为０．６６，添加无机盐为氯化钠、氯化钙和硫酸镁的菌液ＯＤ＿??均小于０．６６，说明这株地衣芽孢杆菌的最适无机盐为鱗酸二氢钾。??０．７０??０．６０?ｔ〇．６６??〇５〇?ｍｓ＾?０５５??０．５１??雙?０４０?ｍ?＾０－４３?爨：－）ｍｗ??－?０．４０??Ｉ。３。圓圓繼Ｐ．丨隱到■菌液①值??Ｈ?ＨＩ?Ｂ??Ｈｉ?ＩＨ??〇．〇〇??氯化钠?氯化钙?硫酸镁磷酸二氢钾氪化钾??无机盐种类??图３－１无机盐对地衣芽孢杆菌生长的影??Ｆｉｇｕｒｅ?３－１?Ｅｆｆｅｃｔ?ｏｆ?ｉｎｏｒｇａｎｉｃ?ｓａｌｔｓ?ｏｎ?ｔｈｅ?ｇｒｏｗｔｈ?ｏｆ?Ｂ．Ｌ??３．４．２地衣芽孢杆菌体外培养最适条件??从图３－２可以看出，在一定范围内随着转速的增加，菌液的ＯＤ６（Ｗ值也随着??增加；当摇床的转速为２００ｒｐｍ时ＯＤ６ＱＱ值达到最大，随着转速的再增加菌液的??〇Ｄ６（Ｋ）值呈现下降趋势；所以该菌体外培养的最佳转速为２００ｒｐｍ。??２
【参考文献】：
期刊论文
[1]斑点叉尾■血液学指标及血细胞特点分析[J]. 孙翰昌,杨帆,郭玉阳. 江苏农业科学. 2019(04)
[2]一株牦牛源屎肠球菌对小鼠肠道微生物、形态和免疫功能的影响[J]. 杨运南,杨昌福,刘亚楠,罗璠,字向东,高彦华. 中国饲料. 2019(05)
[3]益生菌制剂治疗2型糖尿病临床疗效的Meta分析[J]. 朱丽丽,薛静,王振,杨小利,李珂,刘萍,王浩. 中国微生态学杂志. 2019(02)
[4]枯草芽孢杆菌产中性蛋白酶发酵条件的优化[J]. 刘文龙,刘胜利,王兴吉,王克芬,王帅. 化学与生物工程. 2019(01)
[5]血尿酸水平在评估急性胃肠炎儿童脱水程度中的应用[J]. 王梵烨,林秀芝,方金涌,朱勇斌,蔡幸生. 广东医科大学学报. 2018(06)
[6]复合益生菌制剂对肉仔鸡生产性能、血清生化指标和免疫功能的影响[J]. 刘淑娇,张东旭,刘丽敏. 中国饲料. 2019(02)
[7]丁酸梭菌和地衣芽孢杆菌对北京鸭生长性能、血清生化和免疫指标及免疫器官指数的影响[J]. 袁慧坤,袁文华,赵文文,刘香杉,李国勤,杜雪,沈军达,李柳萌,卢立志,刁新平. 动物营养学报. 2018(11)
[8]枯草芽孢杆菌产生的抗菌物质的研究进展[J]. 王晓彤,金黎明,宫小明,郝苗,权春善,赵晶,侯熙彦. 轻工科技. 2018(11)
[9]内服中药联合中药结肠透析对慢性肾衰竭早期血肌酐、尿素氮的影响[J]. 张世仙. 现代医学与健康研究电子杂志. 2018(18)
[10]山羊单增李斯特杆菌病的诊断与防治[J]. 唐慕德,温宇婷,吴青青,阿依江·阿比提,伍钢,KASSIM ALIBAKAR,邓秋纯,刘犇,郑文亚. 中国畜牧兽医. 2018(10)
博士论文
[1]新型丁酸梭菌筛选及其对断奶仔猪生长性能和肠道功能影响的研究[D]. 王腾浩.浙江大学 2015
[2]益生菌的筛选鉴定及其对断奶仔猪、犊牛生长和消化道微生物的影响[D]. 董晓丽.中国农业科学院 2013
[3]日粮添加纳豆枯草芽孢杆菌对奶牛生产性能、瘤胃发酵及功能微生物的影响[D]. 邓露芳.中国农业科学院 2009
硕士论文
[1]益生菌对草鱼生长、营养代谢和机体免疫的影响[D]. 薛俊敬.南昌大学 2018
[2]复合益生菌制剂对肉鸡生长、免疫功能及肠道菌群的影响[D]. 谢文惠.黑龙江八一农垦大学 2018
[3]肠道益生菌对非酒精性脂肪肝的肝肾代谢功能的影响[D]. 张琳娜.青岛大学 2017
[4]益生菌发酵工艺、冻干保护剂优化与活性研究[D]. 于焕.辽宁大学 2017
[5]具有缓解结直肠癌功能的乳酸菌的筛选与机制研究[D]. 王尔胤.江南大学 2017
[6]三种益生菌对肉羊甲烷排放、物质代谢和瘤胃发酵的影响[D]. 肖怡.塔里木大学 2016
[7]复合益生菌对断奶幼犬生长和肠道菌群及抗氧化能力的影响[D]. 陈如愿.内蒙古农业大学 2016
[8]产共轭亚油酸乳酸菌对DSS诱导小鼠结肠炎的改善作用[D]. 王俊通.江南大学 2016
[9]益生菌制剂对断奶仔猪肠道黏膜屏障功能的影响及其机理的研究[D]. 庞敏.中国农业科学院 2016
[10]地衣芽孢杆菌H2对坏死性肠炎肉鸡生长性能及肠道菌群的影响[D]. 周梦佳.四川农业大学 2016
本文编号：3605639
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