树锦鸡儿枯枝病的研究
发布时间：2022-01-26 05:06
树锦鸡儿（Caragana arborescens（Amm.）Lam.）枯枝病是在树锦鸡儿枝干上发现的一种新病害,需明确该病害的病原菌,了解其发生和侵染,并制定相应的防治措施。本文依据柯赫氏法则,对该病害进行了分离、纯化、接种和再分离确定病原菌,并结合形态学和分子生物学鉴定出了该病害的病原菌;随后对其进行了培养特性研究,确定最适生长条件;测定了该病原菌接种后引起的树锦鸡儿枝条皮层内主要防御酶的变化;在对1～5年生的树锦鸡儿枝条内生真菌群落分离鉴定基础上,选取4株生防菌对病原菌进行室内对峙培养,筛选出具有最优生防潜力的菌株;采用8种常见低毒杀菌剂对该病原菌菌丝生长和孢子萌发的抑制效果进行测定,并选出最佳药剂。这些研究为该病害的防控奠定了基础。主要研究结果如下:1、树锦鸡儿枯枝病病原菌的确定:采用单孢分离和组织分离的方法分离得到疑似病原菌的菌株S1,用烧伤、划伤、无伤三种方法接种健康3～5年生水培枝条,30d后仅烧伤接种表现出典型症状。选择烧伤接种进行野外接种试验,发现野外接种的发病时间较室内接种的短,且发病率高达83.3%。经形态学鉴定和rDNA-ITS序列分析表明引起该病害的病原菌S1...
【文章来源】：东北林业大学黑龙江省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：63 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图２－２树锦鸡儿枯枝病的症状??Ｆｉｇ．２－２?Ｔｈｅ?ｓｙｍｐｔｏｍｓ?ｏｆ?Ｃａｒａｇａｎａ?ａｒｂｏｒｅｓｃｅｎｓ?（Ａｍｍ．）?Ｌａｍ．?ｂｒａｎｃｈ?ｂｌｉｇｌｉｔ??
?毛样菌丝，每个子座上产生１？３个半透明的孔口，随着分生孢子器的成熟，颜色逐渐加??深，成熟后变为橙黄色，直径０．６０？１．６８?＿（ｎ＝３０），个别直径达到３．５?ｍｍ（图２－３：?ｉ）。??另外，从菌丝的分支上也可以产生分生孢子，产孢细胞瓶梗形，（６．２？１６．０）?ｐｍｘ（１．７￣３．０）??ｐｍ（ｎ＝３０）。分生孢子顶生或侧生，单细胞，无色，与自然寄主上产生的分生孢子形状相??同，（４．２？５＿５）ｐｍｘ（ｌ．ｌ？２．１）叫ｉ（ｎ＝５０）（图２－３：ｆ）。分生孢子２４ｈ左右开始萌发，从两头分??别长出芽管（图２－３：?ｈ）。ＰＤ液体培养基２５°Ｃ摇培３？４?ｄ后摇培液变浑浊，镜检发现菌丝??上开始分枝并产生分生孢子，产孢细胞瓶梗样，７?ｄ后镜检，４００倍镜下一个视野中孢子??超过２００个，但菌丝量很少，整个视野中几乎全是孢子。??根据病原菌的形态特征和培养特性初步鉴定该菌为树锦鸡子座丛赤壳菌??｛Ｓｔｒｏｍａｔｏｎｅｃｔｒｉａ?ｃａｒａｇａｎａｅ）?〇??＿１１八??－?ｖｙ??＿??图２－３树锦鸡子座丛赤壳菌（＆??Ｆｉｇ．２－３?Ｓｔｒｏｍａｔｏｎｅｃｔｒｉａ?ｃａｒａｇａｎａｅ?（Ｈｏｈｎ．）?Ｊａｋｌｉｔｓｃｈ?＆?Ｖｏｇｌｍａｙｒ．??ａ、ｂ．分生孢子器；ｃ．分生孢子器切片；ｄ、ｅ．分生孢子器中产生的分生孢子梗（标本Ｓｃ－１）；?ｆ．菌丝??上产生的分生孢子和分生孢子梗；ｇ．分生孢子；ｈ．萌发的孢子；ｉ．菌落形态特征（ＰＤＡ培养基）。??对比该菌原始资料［２８］，研究标本的形态特征与原始描述基本相同。在原始描述中该??菌的无性型在自然寄主上产生的子座大小为０．３？０．９?ｍｍ
树锦鸡儿枯枝病病原菌Ｓ１的序列在ＧｅｎＢａｎｋ上进行了注册，菌株号为ＭＧ１９０３４５。并??用菌株Ｓ１与ＢＬＡＳＴ结果中的近缘菌株构建系统发育树，结果表明Ｓ１与菌株５：??在同一分支上，亲缘关系最近，可信度为１００（图２－３）。??８４??ＩｊｕｈｖａｃｏｎｒｎｏｓｐｏｎｉＫＹ６Ｑ７５３９．１）??９４１??????Ｉｊｕｈｙａ?／？？ｒ／／？（ＫＹ６０７５４３－１）???ｉｊｕｈｙａ?ｖｉｔｅｉｉｉｎａ｛?ＫＹ６０７５３１．５???ｐ?Ｓｌ（ＭＣｆ?１９０３４５）????＾?＾?Ｓｔｒｏｍａｔｏｍｃｉｒｋｉ?ｃａｒａｇａｎａ＾?ＩＱ?１?１２２?８８＊?ｌ｜????Ｎｅｃｔｒｉａｃｅｉｅ?ｓｐ＊?（ＫＲ５２７Ｉ４８．１）??７５??Ｎｅｃｔｒｉａ?／＞￡ｆ／￡ｒｍ￡？＾＜ＫＲ９０９２０７．１）??９３?Ｈ?ｖｐｏｃｒｅａｋｓｓｐ．?＜?ＨＱ３２８０２６．１）??Ｂｋｍｅｃｔｒｉａ?ｏｃｈｒｏｋｕｃａ（ＥＸＷ３５５Ｓ，?Ｉ）??＼?１??图２－３?ＳＩ菌株与ＧｅｎＢａｎｋ数据库中的近缘菌株的系统发育树??Ｆｉｇ．２－３?Ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃ?ｔｒｅｅ?ｏｆ?ｓｔｒａｉｎ?ＳＩ??２．４本章小结??本章试验通过对树锦鸡儿枯枝病野生标本进行切片观察并分离得到活体菌株ｓｉ，??根据柯赫氏法则进行接种和再分离确定了病原菌。结合对该菌株的培养特性、形态学鉴??定及ｒＤＮＡＩＴＳ序列分析鉴定此菌为树锦鸡子座丛赤壳菌（Ｓ．?ｃｆｌｒａｇｍｗ）。??致病性试验则表明该病在无伤接种和划伤接种的枝条上未产生明显发病症状，只有??烧伤接种可大量发病
【参考文献】：
期刊论文
[1]小叶锦鸡儿化学成分及药理作用研究进展[J]. 贺程,朴惠顺. 延边大学医学学报. 2015(02)
[2]沈阳地区油松枝枯病病原菌的鉴定[J]. 王月,高国平,张瑶琪,周阳,王允,祁金玉. 西北林学院学报. 2015(03)
[3]青藏高原20种灌木抗旱形态和生理特征[J]. 邱权,潘昕,李吉跃,王军辉,马建伟,杜坤. 植物生态学报. 2014(06)
[4]南方红豆杉内生真菌的分离鉴定及其细胞毒活性研究[J]. 张庆波,陈玉婵,李浩华,潘清灵,王磊,李冬利,陶美华,章卫民. 生物技术通报. 2013(01)
[5]锦鸡儿属植物化学成分及药理活性研究新进展[J]. 杜庆波,蔡红. 宿州学院学报. 2012(11)
[6]植物病害生物防治概述[J]. 李凯,袁鹤. 山西农业科学. 2012(07)
[7]树锦鸡儿、柠条锦鸡儿、小叶锦鸡儿和鹰嘴豆干旱适应能力比较[J]. 方向文,李凤民,张海娜,蒋志荣. 生态学报. 2011(09)
[8]一种适用于多数植物病原真菌的单孢分离方法[J]. 邱小燕,汤智鹏,张敏,荆海瑜. 安徽农业科学. 2011(09)
[9]我国植物病害生物防治的现状及发展策略[J]. 邱德文. 植物保护. 2010(04)
[10]我国害虫化学防治现状与发展策略[J]. 高希武. 植物保护. 2010(04)
博士论文
[1]南方红豆杉内生真菌多样性、次生代谢产物及其与宿主的相关性研究[D]. 吴令上.第二军医大学 2012
硕士论文
[1]锦鸡儿属响应干旱胁迫的形态适应特征和生理机制的研究[D]. 周萌.兰州大学 2016
[2]小叶锦鸡儿化学成分及抗癌活性初步研究[D]. 贺程.延边大学 2015
[3]水杉赤枯病发生规律及防治技术研究[D]. 匙明强.南京林业大学 2012
[4]柠条籽化学成分及生物活性研究[D]. 金桂林.第二军医大学 2011
本文编号：3609873
【文章来源】：东北林业大学黑龙江省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：63 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图２－２树锦鸡儿枯枝病的症状??Ｆｉｇ．２－２?Ｔｈｅ?ｓｙｍｐｔｏｍｓ?ｏｆ?Ｃａｒａｇａｎａ?ａｒｂｏｒｅｓｃｅｎｓ?（Ａｍｍ．）?Ｌａｍ．?ｂｒａｎｃｈ?ｂｌｉｇｌｉｔ??
?毛样菌丝，每个子座上产生１？３个半透明的孔口，随着分生孢子器的成熟，颜色逐渐加??深，成熟后变为橙黄色，直径０．６０？１．６８?＿（ｎ＝３０），个别直径达到３．５?ｍｍ（图２－３：?ｉ）。??另外，从菌丝的分支上也可以产生分生孢子，产孢细胞瓶梗形，（６．２？１６．０）?ｐｍｘ（１．７￣３．０）??ｐｍ（ｎ＝３０）。分生孢子顶生或侧生，单细胞，无色，与自然寄主上产生的分生孢子形状相??同，（４．２？５＿５）ｐｍｘ（ｌ．ｌ？２．１）叫ｉ（ｎ＝５０）（图２－３：ｆ）。分生孢子２４ｈ左右开始萌发，从两头分??别长出芽管（图２－３：?ｈ）。ＰＤ液体培养基２５°Ｃ摇培３？４?ｄ后摇培液变浑浊，镜检发现菌丝??上开始分枝并产生分生孢子，产孢细胞瓶梗样，７?ｄ后镜检，４００倍镜下一个视野中孢子??超过２００个，但菌丝量很少，整个视野中几乎全是孢子。??根据病原菌的形态特征和培养特性初步鉴定该菌为树锦鸡子座丛赤壳菌??｛Ｓｔｒｏｍａｔｏｎｅｃｔｒｉａ?ｃａｒａｇａｎａｅ）?〇??＿１１八??－?ｖｙ??＿??图２－３树锦鸡子座丛赤壳菌（＆??Ｆｉｇ．２－３?Ｓｔｒｏｍａｔｏｎｅｃｔｒｉａ?ｃａｒａｇａｎａｅ?（Ｈｏｈｎ．）?Ｊａｋｌｉｔｓｃｈ?＆?Ｖｏｇｌｍａｙｒ．??ａ、ｂ．分生孢子器；ｃ．分生孢子器切片；ｄ、ｅ．分生孢子器中产生的分生孢子梗（标本Ｓｃ－１）；?ｆ．菌丝??上产生的分生孢子和分生孢子梗；ｇ．分生孢子；ｈ．萌发的孢子；ｉ．菌落形态特征（ＰＤＡ培养基）。??对比该菌原始资料［２８］，研究标本的形态特征与原始描述基本相同。在原始描述中该??菌的无性型在自然寄主上产生的子座大小为０．３？０．９?ｍｍ
树锦鸡儿枯枝病病原菌Ｓ１的序列在ＧｅｎＢａｎｋ上进行了注册，菌株号为ＭＧ１９０３４５。并??用菌株Ｓ１与ＢＬＡＳＴ结果中的近缘菌株构建系统发育树，结果表明Ｓ１与菌株５：??在同一分支上，亲缘关系最近，可信度为１００（图２－３）。??８４??ＩｊｕｈｖａｃｏｎｒｎｏｓｐｏｎｉＫＹ６Ｑ７５３９．１）??９４１??????Ｉｊｕｈｙａ?／？？ｒ／／？（ＫＹ６０７５４３－１）???ｉｊｕｈｙａ?ｖｉｔｅｉｉｉｎａ｛?ＫＹ６０７５３１．５???ｐ?Ｓｌ（ＭＣｆ?１９０３４５）????＾?＾?Ｓｔｒｏｍａｔｏｍｃｉｒｋｉ?ｃａｒａｇａｎａ＾?ＩＱ?１?１２２?８８＊?ｌ｜????Ｎｅｃｔｒｉａｃｅｉｅ?ｓｐ＊?（ＫＲ５２７Ｉ４８．１）??７５??Ｎｅｃｔｒｉａ?／＞￡ｆ／￡ｒｍ￡？＾＜ＫＲ９０９２０７．１）??９３?Ｈ?ｖｐｏｃｒｅａｋｓｓｐ．?＜?ＨＱ３２８０２６．１）??Ｂｋｍｅｃｔｒｉａ?ｏｃｈｒｏｋｕｃａ（ＥＸＷ３５５Ｓ，?Ｉ）??＼?１??图２－３?ＳＩ菌株与ＧｅｎＢａｎｋ数据库中的近缘菌株的系统发育树??Ｆｉｇ．２－３?Ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃ?ｔｒｅｅ?ｏｆ?ｓｔｒａｉｎ?ＳＩ??２．４本章小结??本章试验通过对树锦鸡儿枯枝病野生标本进行切片观察并分离得到活体菌株ｓｉ，??根据柯赫氏法则进行接种和再分离确定了病原菌。结合对该菌株的培养特性、形态学鉴??定及ｒＤＮＡＩＴＳ序列分析鉴定此菌为树锦鸡子座丛赤壳菌（Ｓ．?ｃｆｌｒａｇｍｗ）。??致病性试验则表明该病在无伤接种和划伤接种的枝条上未产生明显发病症状，只有??烧伤接种可大量发病
【参考文献】：
期刊论文
[1]小叶锦鸡儿化学成分及药理作用研究进展[J]. 贺程,朴惠顺. 延边大学医学学报. 2015(02)
[2]沈阳地区油松枝枯病病原菌的鉴定[J]. 王月,高国平,张瑶琪,周阳,王允,祁金玉. 西北林学院学报. 2015(03)
[3]青藏高原20种灌木抗旱形态和生理特征[J]. 邱权,潘昕,李吉跃,王军辉,马建伟,杜坤. 植物生态学报. 2014(06)
[4]南方红豆杉内生真菌的分离鉴定及其细胞毒活性研究[J]. 张庆波,陈玉婵,李浩华,潘清灵,王磊,李冬利,陶美华,章卫民. 生物技术通报. 2013(01)
[5]锦鸡儿属植物化学成分及药理活性研究新进展[J]. 杜庆波,蔡红. 宿州学院学报. 2012(11)
[6]植物病害生物防治概述[J]. 李凯,袁鹤. 山西农业科学. 2012(07)
[7]树锦鸡儿、柠条锦鸡儿、小叶锦鸡儿和鹰嘴豆干旱适应能力比较[J]. 方向文,李凤民,张海娜,蒋志荣. 生态学报. 2011(09)
[8]一种适用于多数植物病原真菌的单孢分离方法[J]. 邱小燕,汤智鹏,张敏,荆海瑜. 安徽农业科学. 2011(09)
[9]我国植物病害生物防治的现状及发展策略[J]. 邱德文. 植物保护. 2010(04)
[10]我国害虫化学防治现状与发展策略[J]. 高希武. 植物保护. 2010(04)
博士论文
[1]南方红豆杉内生真菌多样性、次生代谢产物及其与宿主的相关性研究[D]. 吴令上.第二军医大学 2012
硕士论文
[1]锦鸡儿属响应干旱胁迫的形态适应特征和生理机制的研究[D]. 周萌.兰州大学 2016
[2]小叶锦鸡儿化学成分及抗癌活性初步研究[D]. 贺程.延边大学 2015
[3]水杉赤枯病发生规律及防治技术研究[D]. 匙明强.南京林业大学 2012
[4]柠条籽化学成分及生物活性研究[D]. 金桂林.第二军医大学 2011
本文编号：3609873
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