香蕉细菌性软腐病菌多胺转运信号通路的功能研究

发布时间：2022-02-14 17:59

　　香蕉细菌性软腐病菌（DickeyazeaeMS3）为革兰氏阴性细菌,其寄主范围广、能同时侵染单、双子叶植物,在我国虽无频繁报道,但在病害流行地区会造成较大损失,目前已被列为302号检疫性有害生物,尤其近年来在广东香蕉产区大规模爆发,造成严重的经济损失。病原细菌与寄主细胞之间存在着广泛而复杂的信号交流,但这方面的研究刚刚开始。本项目以香蕉细菌性软腐病菌D.zeae MS3为主要研究对象,研究病原菌多胺信号途径在病原—寄主互作过程中的作用,重点研究多胺对病原菌重要毒力相关基因,包括重要致病因子、运动性、生物膜形成和T3SS分泌系统的调控作用,同时,根据T3SS效应蛋白基因的表达情况,构建特异性多胺检测体系,揭示多胺信号应答线索和调控网络,阐明香蕉软腐菌的致病机理,从分子水平上认识病原-寄主互作机制,为发展新型病害防控策略建立理论基础。主要的研究结果如下:1、通过比对香蕉细菌性软腐病菌D.zeae MS1基因组序列,预测得到MS1中与多胺合成途径相关的基因4个,分别为speA、speC、spe D和speE,并查找到4套与多胺转运相关的ABC transporter proteins（共16... 

【文章来源】：华南农业大学广东省

【文章页数】：119 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

多胺合成通路

具体的序列见附录。另外，查找到 4 套与多胺转运相关的 ABC transporter proteins，如图2.2 所示。一套完整的转运系统包括一个 ABC transporter substract-binding protein、一个 ATPase 和两个内膜蛋白。另外，在 MS3 中还查找到可特异性转运腐胺的两个内膜蛋白编码基因，分别为 plaP 和 puuP。本研究对这 22 个基因进行基因敲除（基因序列见附录），明确多胺信号在病原菌致病过程中的作用。图 2.2 香蕉软腐菌 MS3 中 4 套多胺转运系统2.4.2 MS3 基因组总 DNA 的提取与克隆载体的双酶切香蕉软腐菌 MS3 基因组含有一个大小约为 4.7 Mb 的染色体，不含质粒 DNA。用EasyPure Bacteria Genomic DNA Kit 提取 MS3 基因组 DNA 后溶于 ddH2O，吸取 5μL

凝胶成像系统观察发现基因组总 DNA 无降解现象作为 MS3 基因组总 DNA 的 PCR 模板。得到的质粒 pKNG101，使用 SpeI-HF 和 BamHI-HF 进行双酶切约为 360bp，37℃酶切 4 h。将提取得到的质粒 pKNG101 与经吸取 5μL 进行琼脂糖凝胶电泳, 观察发现质粒 pKNG101 双酶B 所示）。

【参考文献】：
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本文编号：3625013