湖北省烟草赤星病病原学及遗传多样性分析

发布时间：2022-02-18 18:01

　　烟草是湖北省重要的经济作物,种植烟草是烟农脱贫致富的重要途径之一。近几年来,湖北省烟区烟草赤星病发生严重,降低了烟草品质和产量,影响了烟草种植业的发展。本研究通过形态学和分子生物学方法对湖北省烟草赤星病的病原进行鉴定,在此基础上研究病原菌的生物学特性和遗传多样性,主要研究结果如下:从湖北省恩施、十堰、襄阳和宜昌4个产烟区烟草赤星病样本上分离获得72株链格孢菌,在致病性测定基础上通过形态学和基于rDNA-ITS、Calmodulin和Plasma membraneATPase基因序列的分子辅助鉴定,证实引起湖北省烟草赤星病的病原菌为长柄链格孢（Alternaria longipes）、细极链格孢（Alternaria tenuissima）、链格孢（Alternaria alternata）和鸭梨链格孢（Alternaria yaliinficiens）。长柄链格孢和细极链格孢产孢链均为直链,少有分支,但长柄链格孢大部分孢子顶端常延伸成40⁷0μm长的假喙,而细极链格孢成熟分生孢子孢身中部有颜色加深的横隔膜,且隘缩更明显;链格孢和鸭梨链格孢产孢链都有大量分支;但链格... 

【文章来源】：华中农业大学湖北省211工程院校教育部直属院校

【文章页数】：72 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第一章 文献综述
    1 烟草赤星病
        1.1 烟草赤星病发生与危害
        1.2 烟草赤星病流行因素
    2 烟草赤星病病原的分类鉴定
        2.1 烟草赤星病病原种类
        2.2 链格孢菌的鉴定
            2.2.1 形态学鉴定
            2.2.2 分子鉴定
    3 烟草赤星病的生物学特性研究
        3.1 烟草赤星病致病机理
            3.1.1 致病相关毒素
            3.1.2 致病相关酶类
        3.2 烟草赤星病病原菌的致病力分化
        3.3 不同温湿度、pH对烟草赤星病菌生长的影响
        3.4 不同氮源、碳源对烟草赤星病菌生长的影响
    4 烟草赤星病菌的遗传多样性的分子标记
        4.1 限制性片段长度多态性(RFLP)
        4.2 随机扩增多态性DNA(RAPD)
        4.3 限制性扩增片段长度多态性(AFLP)
        4.4 简单重复序列(SSR)
        4.5 简单重复序列区间(ISSR)
    5 研究的目的和意义
第二章 湖北省烤烟烟草赤星病病原鉴定
    1 材料和方法
        1.1 病害样来源
        1.2 培养基及所用试剂
        1.3 病原菌的单孢分离与保存
        1.4 病原菌的致病性测定
        1.5 病原菌的形态学鉴定
        1.6 病原菌的分子鉴定
            1.6.1 供试菌株
            1.6.2 基因组DNA提取
            1.6.3 PCR反应体系
            1.6.4 PCR引物序列以及反应程序
            1.6.5 PCR反应检测
            1.6.6 PCR产物序列分析及系统发育树构建
    2 结果与分析
        2.1 湖北省烟草赤星病病原菌分离
        2.2 致病性测定
        2.3 病原菌的形态学鉴定结果
        2.4 病原菌的分子鉴定
            2.4.1 基于rDNA-ITS序列鉴定结果
            2.4.2 基于Calmodulin序列鉴定结果
            2.4.3 基于Plasma membrane ATPase序列鉴定结果
            2.4.4 基于三个基因序列综合鉴定结果
        2.5 四种链格孢致病菌在湖北的地理分布
    3 小结和讨论
第三章 湖北省烟草赤星病菌生物学特性研究
    1 材料和方法
        1.1 材料
            1.1.1 供试菌株
            1.1.2 供试植物
        1.2 试验方法
            1.2.1 不同温度条件对菌丝生长影响
            1.2.2 不同pH值对菌丝生长的影响
            1.2.3 不同碳源对菌丝生长影响
            1.2.4 不同氮源对菌丝生长影响
            1.2.5 不同种烟草赤星病病菌的致病力测定
            1.2.6 不同温度对长柄链格孢致病力的影响
            1.2.7 不同保湿时间对长柄链格孢致病力的影响
            1.2.8 数据统计与分析
    2 结果
        2.1 不同温度对4种链格孢菌菌丝生长的影响
        2.2 不同pH值对4种链格孢菌菌丝生长的影响
        2.3 不同碳源对4个种链格孢菌菌丝生长的影响
        2.4 不同氮源对4种链格孢菌菌丝生长的影响
        2.5 不同链格孢菌的致病力比较
        2.6 不同温度对长柄链格孢菌致病力的影响
        2.7 不同保湿时间对长柄链格孢致病力的影响
    3 小结和讨论
第四章 湖北省烟草赤星病长柄链格孢遗传多样性分析
    1 材料和方法
        1.1 材料
            1.1.1 供试菌株
            1.1.2 试验仪器
        1.2 方法
            1.2.1 基因组DNA提取及检测
            1.2.2 ISSR-PCR反应体系的建立
                1.2.2.1 PCR反应体系
                1.2.2.2 ISSR-PCR扩增程序
                1.2.2.3 引物的筛选及退火温度的确定
            1.2.3 遗传多样性数据统计与分析
    2 结果
        2.1 ISSR引物的筛选及退火温度的确定
            2.1.1 引物的初次筛选及最佳退火温度的确定
            2.1.2 引物的复筛
                2.1.2.1 基因组DNA浓度及纯度检测
                2.1.2.2 ISSR引物的复筛
        2.2 长柄链格孢菌菌株的遗传多样性分析
            2.2.1 长柄链格孢菌菌株的遗传多态性
            2.2.2 长柄链格孢不同地理来源菌株的遗传多样性
            2.2.3 长柄链格孢不同地理种群的遗传距离分析
            2.2.4 烟草长柄链格孢菌(A.longipes)ISSR聚类分析结果
    3 小结与讨论
参考文献
致谢


【参考文献】：
期刊论文
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本文编号：3631295