Cry1Ca诱导的二化螟中肠差异磷酸化蛋白组分析

发布时间：2022-02-21 19:55

　　鳞翅目害虫二化螟Chilo suppressalis（Walker）是危害我国水稻生产最严重的害虫之一。苏云金芽孢杆菌（Bacillus thuringiensis,Bt）产生的杀虫蛋白（Cry）已经成功地转入到水稻中用于防治二化螟等害虫。研究昆虫对Cry蛋白的防御机制有利于更好地应用转基因抗虫作物。昆虫对Cry蛋白的细胞防御反应主要受丝裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase,MAPK）路径调控,而MAPK只是应急信号通路之一,并不直接参与对抗成孔杀虫蛋白,其下游基因才起真正的防御作用。实验室前期研究发现,p38 MAPK参与了二化螟对Cry1Ca的防御过程,但对Cry1Ca起防御作用的p38 MAPK下游基因并不清楚。MAPK下游基因的激活可能受p38MAPK通路磷酸化进行调控的。因此,本研究首先利用差异磷酸化蛋白质组筛选受Cry1Ca诱导的差异磷酸化蛋白、再通过RNA干扰技术鉴定候选蛋白与Cry蛋白毒力之间的关系、最后利用q PCR等技术分析目的基因的表达模式及其与p38 MAPK的上下游关系。研究结果对明确昆虫对Cry蛋白的防御机制具有... 

【文章来源】：华中农业大学湖北省211工程院校教育部直属院校

【文章页数】：96 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
1 前言
    1.1 文献综述
        1.1.1 Cry蛋白
        1.1.2 MAPK信号通路
        1.1.3 磷酸化蛋白质组
        1.1.4 小热激蛋白(sHsp)
        1.1.5 二化螟
    1.2 论文设计
        1.2.1 技术路线
        1.2.2 目的和意义
2 材料与方法
    2.1 实验材料
        2.1.1 供试昆虫及饲养方法
        2.1.2 实验试剂
        2.1.3 实验仪器及设备
    2.2 实验方法与步骤
        2.2.1 磷酸化蛋白组的分析
        2.2.2 候选基因的多序列比对与系统进化分析
        2.2.3 候选基因序列片段克隆及筛选结果分析
        2.2.4 Elf2基因的时空表达及与p38基因调控关系的验证
3 结果与分析
    3.1 磷酸化蛋白质组数据分析
    3.2 候选基因的多序列比对与系统进化分析
        3.2.1 Up101基因多序列比对与系统进化分析
        3.2.2 Up105基因多序列比对与系统进化分析
        3.2.3 Gph基因多序列比对与系统进化分析
        3.2.4 Arp基因多序列比对与系统进化分析
        3.2.5 Elf2基因多序列比对与系统进化分析
        3.2.6 Sac基因多序列比对与系统进化分析
        3.2.7 Trtp基因多序列比对与系统进化分析
    3.3 候选基因的序列克隆及筛选分析
        3.3.1 二化螟中肠总RNA的提取
        3.3.2 qPCR引物特异性分析
        3.3.3 候选基因沉默效果分析
        3.3.4 候选基因在应对Cry蛋白防御反应的分析
    3.4 Elf2基因的时空表达及与p38基因调控关系的验证结果分析
        3.4.1 Elf2基因时空表达模式分析
        3.4.2 Elf2与p38调控关系的分析
4 结论与讨论
    4.1 主要结论与讨论
    4.2 创新点
参考文献
附录 硕士期间发表论文
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]2020年全国农作物重大病虫害发生趋势预报[J]. 姜玉英,刘万才,黄冲,陆明红,刘杰,次仁卓嘎.  中国植保导刊. 2020(02)
[2]Activation and signaling of the p38 MAP kinase pathway[J]. Tyler ZARUBIN.  Cell Research. 2005(01)
[3]二化螟抗药性监测和对三唑磷抗性的遗传分析[J]. 曹明章,沈晋良,张金振,吕梅,刘晓宇,周威君.  中国水稻科学. 2004(01)
[4]二化螟对杀虫单等4种杀虫剂的抗药性[J]. 李秀峰,韩召军,陈长琨,李国清,王荫长.  南京农业大学学报. 2001(01)



本文编号：3637941