噻虫啉单克隆抗体的制备及其免疫分析方法研究

发布时间：2022-02-22 23:17

　　噻虫啉（thiacloprid）是拜耳公司开发的一种高效、低毒、广谱的新烟碱类杀虫剂,广泛应用于对刺吸式和咀嚼式口器害虫的防治。目前关于噻虫啉的检测方法仍以高效液相色谱法（HPLC）为主,然而仪器检测存在费用高、有机溶剂使用量大、操作程序复杂和难以实现高通量检测等问题。本研究制备了高质量噻虫啉单克隆抗体,建立了基于噻虫啉单克隆抗体的间接竞争酶联免疫分析方法（ic-ELISA）、荧光偏振免疫分析方法（FPIA）和上转换荧光试纸条免疫层析分析方法（U-ICA）,研究结果表明,建立的三种免疫分析方法可以应用于农产品和环境样品中噻虫啉残留的快速检测。本研究利用实验室制备的噻虫啉半抗原,采用活泼酯法制备了噻虫啉包被原,其偶联结合比为14:1。使用实验室已制备的噻虫啉免疫原,分别采用常规免疫和快速佐剂免疫两种方法对BALB/c雌性小白鼠进行免疫。实验结果表明,常规免疫结果更理想,细胞融合后共得到了三株杂交瘤细胞株并最终筛选到一株可以稳定分泌抗噻虫啉单克隆抗体且灵敏度最高的杂交瘤细胞株,命名为C9。经测定,所得到的单克隆抗体亚型为IgG2b型。利用制备的单克隆抗体建立了噻虫啉ic-ELISA方法,并... 

【文章来源】：南京农业大学江苏省211工程院校教育部直属院校

【文章页数】：99 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
绪论
第一章 文献综述
    1 农药残留快速检测技术现状
        1.1 酶抑制法
        1.2 活体生物测定法
        1.3 免疫分析法
    2 农药残留免疫分析方法现状分析
        2.1 小分子化合物抗原制备研究进展
        2.2 小分子化合物抗体制备研究进展
        2.3 农药残留免疫分析技术
    3 噻虫啉残留检测研究进展
        3.1 理化性质及毒理学数据
        3.2 噻虫啉残留检测概况
    4 本研究的目的、意义及内容
第二章 噻虫啉单克隆抗体的制备
    1 引言
    2 材料与方法
        2.1 试验材料与仪器设备
        2.2 试验方法
    3 结果与分析
        3.1 人工抗原偶联结合比测定
        3.2 小鼠常规免疫与快速免疫血清效价比较及细胞株系的建立
        3.3 单克隆抗体亚型的鉴定
        3.4 抗体可变区序列的测定
    4 结论与讨论
第三章 噻虫啉IC-ELISA的建立
    1 引言
    2 材料与方法
        2.1 试验材料与仪器设备
        2.2 试验方法
    3 结果与分析
        3.1 抗原、抗体工作浓度的确定
        3.2 工作缓冲液的优化
        3.3 灵敏度
        3.4 特异性评价
        3.5 基质效应
        3.6 准确性
        3.7 仪器相关性
    4 结论与讨论
        4.1 灵敏度
        4.2 特异性
第四章 噻虫啉荧光偏振免疫分析方法研究
    1 引言
    2 材料与方法
        2.1 试验材料与仪器设备
        2.2 试验方法
    3 结果与分析
        3.1 荧光示踪物鉴定
        3.2 FPIA工作缓冲液条件优化
        3.3 灵敏度
        3.4 特异性
        3.5 准确性
        3.6 仪器相关性
    4 结论与讨论
第五章 噻虫啉上转换荧光试纸条免疫层析分析方法研究
    1 引言
    2 材料与方法
        2.1 试验材料与仪器设备
        2.2 试验方法
    3 结果与讨论
        3.1 UCNPs修饰前后的表征
        3.2 UCNPS试纸条的优化
        3.3 UCNPs试纸条定量检测噻虫啉的标准曲线
        3.4 UCNPS试纸条检测性能的评价
        3.5 仪器相关性
    4 结论与讨论
全文总结
参考文献
附录
攻读学位期间发表的学术论文
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]酶联免疫吸附技术在食品安全检测中的应用研究[J]. 秦蕾影,陈昊,项水兰,钟超,姚翔宇,汪德洪.  农业科技与信息. 2016(32)
[2]纳米抗体技术及其在疾病诊断和治疗中的应用[J]. 周陶然,詹守斌,翟飞,汪洋,易军.  生物化学与生物物理进展. 2016(10)
[3]黄曲霉毒素B1半抗原分子设计与抗原合成及抗体特性研究进展[J]. 王亚楠,王晓斐,牛琳琳,雷壮,张海棠,王自良.  食品工业科技. 2016(23)
[4]快速检测农药残留技术的应用现状[J]. 冯俊宸,徐华能.  世界农药. 2016(02)
[5]噻虫啉防治茶尺蠖的效果评价及残留研究[J]. 张田田,徐加利,路兴涛,马冲,周超.  山东农业科学. 2016(02)
[6]中国农药使用现状及对策建议[J]. 陈晓明,王程龙,薄瑞.  农药科学与管理. 2016(02)
[7]噻虫啉在草地牧草和土壤中的残留研究[J]. 于红妍,侯秀敏,唐俊伟.  青海草业. 2015(04)
[8]小分子免疫分析技术及其研究进展[J]. 邓省亮,李平,贺伟华.  食品科学. 2016(11)
[9]单链抗体的研究进展及其应用[J]. 黄静,张括川,刘晓丹,王琳,张璐,赵宝华.  畜牧与饲料科学. 2014(11)
[10]电化学发光免疫分析方法检测蔬菜中噻虫啉的含量[J]. 单云,张红琳,彭智敏.  南京晓庄学院学报. 2014(06)

博士论文
[1]噻虫胺抗体制备及免疫分析方法研究[D]. 李明.南京农业大学 2015
[2]量子点荧光探针的设计及检测应用[D]. 穆亲.华东理工大学 2014
[3]有机磷农药单残留及多残留免疫分析方法的建立与应用[D]. 华修德.南京农业大学 2012

硕士论文
[1]DON全抗原的生物合成及其在免疫分析中的应用[D]. 杨宏威.南昌大学 2016
[2]噻虫啉模拟表位的筛选及噬菌体酶联免疫分析方法研究[D]. 殷维.南京农业大学 2015
[3]土壤化学屏障中联苯菊酯快速检测方法的研究[D]. 刘晓凤.南京农业大学 2015
[4]药物分子的计算机辅助理论模拟及分子设计[D]. 邓芳芳.兰州大学 2014
[5]噻虫啉对南方根结线虫和烟粉虱的控制作用及对土壤酶活性的影响[D]. 董飒.山东农业大学 2014
[6]噻虫啉和氟虫双酰胺在水稻、土壤与田水中的残留规律研究[D]. 王点点.南京信息工程大学 2013
[7]噻虫啉在黄瓜和土壤中的检测方法及残留研究[D]. 张丹莉.长安大学 2011
[8]计算机模拟辅助氯霉素人工抗原的设计与合成[D]. 陈婷婷.南昌大学 2011
[9]氯噻啉酶联免疫吸附分析方法研究[D]. 方松.南京农业大学 2011
[10]基于量子点的荧光免疫分析在几种农兽药残留检测中的应用研究[D]. 陈翊平.华中农业大学 2010



本文编号：3640382