中国野生毛葡萄VqWRKY56基因的克隆及抗白粉病功能研究

发布时间：2022-02-24 14:38

　　葡萄是世界上具有重要经济价值的栽培果树,国内外广泛种植的品种主要为欧洲葡萄,欧洲葡萄果实品质优良,而且加工产品丰富,其缺点是抗病性差,易受葡萄白粉病等真菌病害的影响。葡萄白粉病是一种生物营养型真菌,能侵染葡萄所有绿色组织,导致葡萄果实品质下降和产量降低。挖掘葡萄抗病基因,通过转基因技术来培育抗病性强、品质优良的葡萄新品种具有重要意义。课题组前期对葡萄WRKY转录因子进行了生物信息学分析以及抗病和感病葡萄在不同病原菌诱导下的差异基因表达分析,筛选出了白粉菌诱导显著差异表达的VqWRKY56基因。本研究在此基础上,从抗白粉病的中国野生毛葡萄‘商-24’中克隆VqWRKY56基因,利用农杆菌介导法转化易感病的欧洲葡萄无核白,开展VqWRKY56基因功能及其作用机制研究。主要研究结果如下:1.中国野生毛葡萄VqWRKY56基因克隆及其序列分析。VqWRKY56在抗病毛葡萄‘商-24’接种白粉菌后的表达分析结果表明,白粉菌诱导VqWRKY56基因显著上调表达,并在120 h时表达量最大;利用同源序列克隆得到VqWRKY56开放阅读框,长度为1491 bp,编码496个氨基酸残基;VqWRKY56... 

【文章来源】：西北农林科技大学陕西省211工程院校985工程院校教育部直属院校

【文章页数】：53 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第一章 文献综述
    1.1 引言
    1.2 葡萄白粉病介绍
    1.3 植物免疫系统
    1.4 WRKY转录因子的研究进展
        1.4.1 WRKY转录因子的概述
        1.4.2 WRKY转录因子植物中的研究进展
        1.4.3 WRKY转录因子在葡萄中的研究进展
    1.5 本研究的目的和意义
第二章 中国野生毛葡萄VqWRKY56基因的克隆与遗传转化无核白
    2.1 材料
        2.1.1 植物材料
        2.1.2 载体与菌株
        2.1.3 供试病原菌
        2.1.4 主要试剂
        2.1.5 仪器设备
    2.2 方法
        2.2.1 葡萄叶片DNA、RNA的提取以及RNA的反转录
        2.2.2 VqWRKY56基因的克隆与过表达载体的构建
        2.2.3 VqWRKY56转化无核白
        2.2.4 VqWRKY56过量表达株系的鉴定
        2.2.5 VqWRKY56基因过量表达株系的扩繁、炼苗
        2.2.6 统计分析
    2.3 结果与分析
        2.3.1 中国野生毛葡萄‘商-24’接种白粉菌后VqWRKY56的表达分析
        2.3.2 VqWRKY56基因的克隆与生物信息学分析
        2.3.3 VqWRKY56过表达载体的构建与无核白胚性愈伤组织的诱导及遗传转化
        2.3.4 VqWRKY56过表达株系的鉴定
        2.3.5 VqWRKY56过表达株系的扩繁与炼苗
    2.4 讨论与小结
第三章 中国野生毛葡萄VqWRKY56调控白粉病的功能鉴定
    3.1 材料
        3.1.1 植物材料
        3.1.2 供试病原菌
        3.1.3 主要试剂
        3.1.4 仪器设备
    3.2 方法
        3.2.1 接种葡萄白粉菌处理
        3.2.2 组织化学染色
        3.2.3 半定量分析抗病相关基因表达
        3.2.4 VqWRKY56酵母双杂交BD载体的构建
        3.2.5 VqWRKY56自激活检测
        3.2.6 统计分析
    3.3 结果分析
        3.3.1 葡萄VqWRKY56过表达株系和野生型株系接种白粉菌表型观察
        3.3.2 细胞死亡和活性氧积累的染色观察
        3.3.3 半定量分析防御相关基因的表达
        3.3.4 VqWRKY56酵母双杂交BD载体的构建
        3.3.5 VqWRKY56自激活检测
    3.4 讨论
第四章 结论
参考文献
附录A 附录
附录B 附录
致谢
个人简历
发表的学术论文


【参考文献】：
期刊论文
[1]MdWRKY15 improves resistance of apple to Botryosphaeria dothidea via the salicylic acid-mediated pathway by directly binding the MdICS1 promoter[J]. Xian-Yan Zhao,Chen-Hui Qi,Han Jiang,Ming-Shuang Zhong,Chun-Xiang You,Yuan-Yuan Li,Yu-Jin Hao.  Journal of Integrative Plant Biology. 2020(04)
[2]植物WRKY转录因子及其生物学功能研究进展[J]. 谢政文,王连军,陈锦洋,王娇,苏一钧,杨新笋,曹清河.  中国农业科技导报. 2016(03)
[3]葡萄白粉病的症状与防治[J]. 孙之巍,黄文萍.  现代园艺. 2014(02)
[4]葡萄抗病分子育种研究进展[J]. 李慧娥,郭其强.  园艺学报. 2012(01)
[5]植物WRKY转录因子结构及功能研究进展[J]. 陈欧,王振英.  生物学通报. 2008(06)
[6]分子标记在葡萄品种鉴定和辅助筛选上的应用[J]. 刘庆香,韩继成,赵胜建,孔德军.  河北果树. 2003(06)
[7]葡萄白粉病（Uncinula necator）及其防治[J]. 李华.  中外葡萄与葡萄酒. 2003(03)
[8]葡萄白粉病的发生规律及防治[J]. 杜连彩.  植物医生. 2002(02)
[9]中国葡萄属野生种叶片抗白粉病遗传研究[J]. 王跃进,贺普超.  中国农业科学. 1997(01)

博士论文
[1]中国野生毛葡萄转录因子VqWRKY52抗病功能和调控机理研究[D]. 王现行.西北农林科技大学 2019
[2]葡萄WRKY家族基因的鉴定及VlWRKY58和VaWRKY10的功能分析[D]. 郭春磊.西北农林科技大学 2018



本文编号：3642930