葡萄霜霉菌效应因子PvCRN11和PvCRN20功能分析

发布时间：2022-02-26 12:52

　　葡萄（Vitis L.）是世界上种植最广泛且具有重要经济价值的果树,葡萄霜霉菌可以感染葡萄的叶片、花序和幼嫩组织,导致其产量和品质下降。效应蛋白是由病原菌分泌的小分子量蛋白,在病原菌侵染植物的过程中起重要作用。目前,关于葡萄霜霉菌效应因子及其与宿主间的相互作用机制报道较少。本课题组前期对陕西杨陵地区采集的一个葡萄霜霉菌菌株进行了基因组测序分析,预测到31个编码CRN蛋白的基因序列,在本氏烟草中瞬时表达克隆到的候选PvCRN基因,发现PvCRN11可以诱导本氏烟草叶片细胞死亡而PvCRN20可以抑制INF1诱导的本氏烟草叶片细胞死亡。本研究通过对PvCRN11和PvCRN20进行亚细胞定位分析、调控植物PCD试验及作用机制、瞬时转化烟草后对辣椒疫霉菌致病力影响分析等,探讨了不同PvCRNs对植物免疫应答的调节作用。以接种葡萄霜霉菌的感病葡萄‘黑比诺’叶片的cDNA为模板,通过半定量分析PvCRN11的表达模式,发现PvCRN11受到葡萄霜霉菌诱导表达,并在侵染前期有明显上调。通过亚细胞定位实验发现PvCRN11定位在细胞膜和细胞核中,推测其发挥作用的场所可能在细胞膜和细胞核。在本氏烟叶片... 

【文章来源】：西北农林科技大学陕西省211工程院校985工程院校教育部直属院校

【文章页数】：64 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第一章 文献综述
    1.1 研究背景
    1.2 葡萄对霜霉病的抗性机制
        1.2.1 植物与病原菌互作机制
        1.2.2 葡萄霜霉病抗性机制
    1.3 卵菌胞内效应因子研究进展
        1.3.1 卵菌RxLR类效应因子研究进展
        1.3.2 卵菌CRN类效应因子研究进展
        1.3.3 葡萄霜霉菌CRN类效应因子研究进展
    1.4 本研究意义
第二章 葡萄霜霉菌效应因子PvCRN11 功能分析
    2.1 实验材料
        2.1.1 植物材料与菌株
        2.1.2 试验溶液及试剂
        2.1.3 仪器设备及耗材
    2.2 方法
        2.2.1 Pv CRN11 效应因子的克隆
        2.2.2 农杆菌介导的瞬时转化
        2.2.3 PvCRN11 效应因子细胞凋亡调控活性分析
        2.2.4 本氏烟叶片接种辣椒疫霉菌测试
        2.2.5 过氧化氢含量的测定
        2.2.6 本氏烟叶片离子渗透率的测定
        2.2.7 本氏烟叶片台盼蓝染色
        2.2.8 Pv CRN11 效应因子的亚细胞定位分析
        2.2.9 葡萄霜霉菌效应因子PvCRN11 的表达模式分析
        2.2.10 酵母双杂交筛选PvCRN11 在葡萄内的靶蛋白
        2.2.11 拟南芥的转化与转基因鉴定
        2.2.12 转基因拟南芥的抗病性分析
    2.3 结果与分析
        2.3.1 Pv CRN11 的克隆与生物信息学分析
        2.3.2 Pv CRN11 的表达模式分析
        2.3.3 PvCRN11 诱导细胞死亡的功能分析
        2.3.4 Pv CRN11 亚细胞定位分析
        2.3.5 Pv CRN11 增强烟草抗病性分析
        2.3.6 PvCRN11 寄主靶蛋白的筛选
        2.3.7 Pv CRN11 转基因拟南芥的功能分析
    2.4 讨论
    2.5 小结
第三章 葡萄霜霉菌效应因子PvCRN20 功能分析
    3.1 方法
        3.1.1 葡萄霜霉菌效应因子PvCRN20 的克隆
        3.1.2 农杆菌介导的瞬时转化
        3.1.3 本氏烟接种辣椒疫霉测试
        3.1.4 葡萄霜霉菌效应因子PvCRN20 细胞凋亡调控活性分析
        3.1.5 葡萄霜霉菌效应因子PvCRN20与INF1共表达后INF1 通路相关基因的表达分析
        3.1.6 本氏烟叶片离子渗透率的测定
        3.1.7 本氏烟叶片的台盼蓝染色
        3.1.8 葡萄霜霉菌效应因子PvCRN20 在酵母中转录自激活验证
    3.2 结果与分析
        3.2.1 Pv CRN20 的克隆与生物信息学分析
        3.2.2 Pv CRN20 的表达模式分析
        3.2.3 PvCRN20 抑制INF1 诱导的本氏烟草叶片细胞死亡的分析
        3.2.4 Pv CRN20 抑制INF1 相关基因的表达分析
        3.2.5 PvCRN20 减弱本氏烟草抗病性的分析
        3.2.6 PvCRN20 抑制H2O2 积累的分析
        3.2.7 Pv CRN20 发挥功能不依赖细胞核定位的分析
        3.2.8 Pv CRN20 在酵母中的转录自激活分析
    3.3 讨论
    3.4 小结
第四章 结论
附录
缩略词
参考文献
致谢
个人简历



本文编号：3644554