蚕蛹蛋白免疫肽的分离纯化、结构鉴定及功能分析

发布时间：2022-02-26 19:04

　　蚕蛹自古就是滋补强身,温和脾肾的食品,具有很高的营养和药用价值。蚕蛹中含有丰富的蛋白质和人体必需的氨基酸、维生素及微量元素,是一种优质蛋白质原料。我国每年可产新鲜蚕蛹70万吨以上,大多当作动物饲料处理,并未得到合理的利用。研究表明蛋白质经酶的降解可产生大量小分子肽段,而人类摄食蛋白质经消化道的酶作用后,大多也是以低肽形式消化吸收。其中有些多肽片段能显著改善肌体的生命活动,如促进消化吸收,增强免疫力,调节激素分泌等,这些多肽被称为生物活性肽。为了拓展蚕蛹利用途径,以蚕蛹作为蛋白原料制备生物活性肽。本文采用碱处理法提取蚕蛹蛋白,分别对其进行超微粉碎和超声波粉碎处理,并结合碱性蛋白酶酶解的方法获得酶解液;之后以促小鼠脾细胞增殖能力为指标,经葡聚糖凝胶层析法分离蚕蛹蛋白免疫肽;高效液相色谱-质谱联用鉴定免疫肽的氨基酸序列;小鼠脾淋巴细胞诱导和体外抗氧化试验验证其生物学活性;体外模拟胃肠道实验评价该免疫肽对胃肠道酶的耐受性;通过检测其对小鼠脾细胞免疫相关细胞因子的表达,探索蚕蛹蛋白免疫肽的作用机制。取得如下研究结果:蚕蛹进行石油醚脱脂后,采用碱提取法获得蚕蛹蛋白,分别经碱性蛋白酶酶解,超微粉碎-... 

【文章来源】：江苏科技大学江苏省

【文章页数】：73 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
第1章 绪论
    1.1 生物活性肽
        1.1.2 生物活性肽的分类
        1.1.3 生物活性肽的制备
    1.2 蚕蛹蛋白活性肽的研究进展
        1.2.1 蚕蛹蛋白活性肽的制备方法
        1.2.2 蚕蛹蛋白活性肽的分离纯化方法
        1.2.3 蚕蛹蛋白活性肽在食品工业中的应用
        1.2.4 蚕蛹蛋白活性肽在医药中的应用
        1.2.5 蚕蛹蛋白活性肽应用中存在的问题
    1.3 本研究的目的与意义
第2章 蚕蛹蛋白酶解液的制备
    2.1 前言
    2.2 试验材料与仪器设备
        2.2.1 材料与试剂
        2.2.2 试验仪器与设备
    2.3 试验方法
        2.3.1 蚕蛹基本组成及含量测定
        2.3.2 蚕蛹蛋白质的制备
        2.3.3 蚕蛹蛋白酶解液的制备
        2.3.4 酶解液浓度测定
        2.3.5 小鼠脾淋巴细胞实验
    2.4 结果与讨论
        2.4.1 蚕蛹基本成分测定
        2.4.2 不同酶解液对小鼠脾淋巴细胞的作用效果
    2.5 本章小结
第3章 蚕蛹蛋白免疫肽的分离纯化与结构鉴定
    3.1 前言
    3.2 试验材料与仪器设备
        3.2.1 试验材料
        3.2.2 试验仪器与设备
    3.3 试验方法
        3.3.1 多肽的分离筛选
        3.3.2 多肽浓度测定
        3.3.3 小鼠脾淋巴细胞实验
        3.3.4 液相色谱分析
        3.3.5 氨基酸序列测定
    3.4 结果与讨论
        3.4.1 超声波-酶解组主要组分分离纯化及氨基酸序列鉴定
        3.4.2 超微-酶解组主要组分分离纯化及氨基酸序列鉴定
    3.5 本章小结
第4章 蚕蛹蛋白免疫肽功能性分析
    4.1 前言
    4.2 试验材料与仪器设备
        4.2.1 试验材料
        4.2.2 试验仪器与设备
    4.3 试验方法
        4.3.1 多肽溶液浓度的测定
        4.3.2 小鼠脾淋巴细胞试验
        4.3.3 蚕蛹蛋白免疫肽对胃肠道酶耐受性测定
        4.3.4 蚕蛹蛋白免疫肽活性鉴定
        4.3.5 蚕蛹蛋白免疫肽体外抗氧化活性测定
    4.4 结果与讨论
        4.4.1 免疫肽对人体胃肠道酶耐受性测定结果
        4.4.2 蚕蛹蛋白免疫肽活性鉴定结果
        4.4.3 免疫肽抗氧化能力测定结果
    4.5 本章小结
第5章 蚕蛹蛋白免疫肽作用机制初探
    5.1 前言
    5.2 试验材料与仪器设备
        5.2.1 试验材料
        5.2.2 试验仪器与设备
    5.3 试验方法
        5.3.1 多肽溶液浓度的测定
        5.3.2 小鼠脾淋巴细胞试验
        5.3.3 小鼠脾淋巴细胞总RNA的提取
        5.3.4 RNA浓度及纯度的测定
        5.3.5 RNA完整性测定
        5.3.6 消化残余DNA
        5.3.7 cDNA的合成
        5.3.8 荧光定量PCR检测
    5.4 结果与讨论
        5.4.1 RNA 浓度、纯度及完整性测定结果
        5.4.2 免疫相关细胞因子表达量差异
    5.5 本章小结
结论
参考文献
攻读学位期间发表的学术论文
致谢



本文编号：3644950