新蚜虫疠霉弹孢前中后阶段的表达谱与代谢组分析及其电转化初探
发布时间：2022-02-28 20:41
虫霉门（Entomophthoromycota）真菌能够通过主动弹射分生孢子的方式侵染寄主,这一独特能力使得虫霉能击中和粘住难以碰上的昆虫目标,对虫霉的侵染、定殖、宿存和形成流行病至关重要。新蚜虫疠霉（Pandoraneoaphidis）是全世界分布最广泛的蚜虫专化病原真菌,常引发各种蚜虫的流行病,在多种蚜虫自然控制中发挥关键作用,但其在分子生物学方面的研究进展一直停滞不前,导致其在寄主专化性功能基因的理论研究和生防应用方面的潜力受到了极大的限制。本课题以新蚜虫疠霉为研究对象,利用RNA-seq测序技术和代谢组检测技术对弹孢前（Before discharge,BD）、弹孢高峰期（During discharge,DD）及弹孢后（After discharge,AD）3个阶段的菌丝进行分析。通过对不同状态下菌丝中差异表达基因的分析,筛选可能与孢子主动弹射相关的基因,同时利用电转化法对适用于新蚜虫疠霉的遗传转化体系的构建进行了尝试,以期为后续的基因功能研究打下基础。主要结果如下:一、新蚜虫疠霉弹孢前中后阶段菌丝的RNA-seq测序通过RNA-seq技术对新蚜虫疠霉3种状态菌丝BD,DD,...
【文章来源】：中国计量大学浙江省
【文章页数】：123 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１．１虫霉目真菌的侵染循环??Ｆｉｇｕｒｅ?１．１?Ｌｉｆｅ?ｃｙｃｌｅ?ｏｆ?ｅｎｔｏｍｏｐｈｔｈｏｒａｌｅａｎ?ｆｕｎｇｉ??在虫霉的侵染过程中，虫霉菌丝在体外的生长表型是其形成流行病的关??
２．３?结果与分析??２．３．１样本菌丝电镜拍照结果??新蚜虫疠霉通过主动弹射孢子的方式释放分生孢子，下图（图２．２）分别是新??蚜虫疠霉弹孢前菌丝（ＢＤ）、弹孢高峰期菌丝（ＤＤ）与弹孢后菌丝（ＡＤ）的电镜照??片。从图中可以看出，处于ＢＤ状态的菌丝较饱满，正处于营养生长的旺盛时??期。ＤＤ状态的菌丝除了饱满的菌丝外，还有正在不断生成的孢子，以及即将弹??射的孢子，Ｂ图中箭头处为孢子即将脱离菌丝的状态。ＡＤ状态的菌丝大多有孔??不完整，或呈丝状，表明菌丝在完成孢子弹射、繁殖后代的任务后，各种生理??机能开始下降，临近死亡。ＤＤ与ＢＤ状态菌丝相比，除了正常营养生长所必需??的代谢与调控外的基因，与生殖相关的基因也在大量表达，尤其是与弹孢在相??关的基因的表达正处于高表达时期。由于ＡＤ状态菌丝己趋于死亡，ＢＤ／ＤＤ状??态菌丝与其相比
说明所提ＲＮＡ纯度较好，且蛋白、多糖等有机物污染较少，符合ＲＮＡ－ｓｅｑ测??序样本的要求。各取５?ｐＬ产物跑琼脂糖凝胶电泳，结果显示９个样本都有１８Ｓ??条带（图２．３），但其中ＡＤ１、ＡＤ２、ＡＤ３条带相对较弱，可能与其所处生长状态??有关。可能是由于新蚜虫疠霉物种特异性的原因，２８Ｓ条带较弱。??表２．１?ＲＮＡ质量检测结果??Ｔａｂｌｅ?２．１?ＲＮＡ?ｔｅｓｔ?ｒｅｓｕｌｔｓ?ｗｉｔｈ?Ｎａｎｏｄｒｏｐ?２０００??符号?浓度（ｎｇ／ｆｔＬ）?ＯＤ２６０／２８０?体积（ｐＬ）?总量（Ｍｇ）??ＢＤ１?２４０．５２?２．３７?４５?１０．８２??ＢＤ２?５７８．３５?２．３３?４５?２６．０３??ＢＤ３?７３３．７０?２．３１?４５?３３．０２??
【参考文献】：
期刊论文
[1]潮霉素B抗性为选择标记的整合型表达载体的构建及在米根霉中的遗传转化[J]. 张旻,姜绍通,郑娟,郑志,李兴江,潘丽军,罗水忠. 生物工程学报. 2015(08)
[2]基因工程改良在昆虫病原真菌中的应用[J]. 边强,王广君,张泽华,高松,农向群. 中国生物工程杂志. 2009(03)
[3]代谢组研究[J]. 唐惠儒,王玉兰. 生命科学. 2007(03)
[4]限制性内切酶介导的玫烟色拟青霉原生质转化体系构建[J]. 杨旭芬,应盛华,冯明光. 浙江大学学报(农业与生命科学版). 2006(06)
[5]虫生真菌分子生物学研究进展[J]. 王成树,李增智. 微生物学通报. 2001(03)
[6]新蚜虫疠霉连续液体培养的菌丝生物量、产孢量及杀蚜毒力[J]. 许谦,冯明光. 微生物学报. 2001(03)
博士论文
[1]球孢白僵菌热激蛋白家族、Ca2+ATP激酶Pmr1、磷酸化酶Cdc14及腺苷酸环化酶的功能解析[D]. 王洁.浙江大学 2014
[2]蚜虫专化性病原真菌（虫霉目）随寄主迁飞扩散而传播流行的生物学实证研究[D]. 陈春.浙江大学 2005
硕士论文
[1]基于新蚜虫疠霉RNA-seq数据的内参基因及产孢相关基因的筛选和验证[D]. 解廷娜.中国计量大学 2016
[2]几株绿僵菌清除自由基活性物质及代谢组学的研究[D]. 庄梦敏.安徽农业大学 2013
[3]雅致放射毛霉培养条件优化及apt1基因的克隆表达[D]. 杨善岩.浙江工业大学 2012
[4]采后不同时期的草菇菌柄表达谱差异分析[D]. 鄢淑琴.福建农林大学 2011
本文编号：3645546
【文章来源】：中国计量大学浙江省
【文章页数】：123 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１．１虫霉目真菌的侵染循环??Ｆｉｇｕｒｅ?１．１?Ｌｉｆｅ?ｃｙｃｌｅ?ｏｆ?ｅｎｔｏｍｏｐｈｔｈｏｒａｌｅａｎ?ｆｕｎｇｉ??在虫霉的侵染过程中，虫霉菌丝在体外的生长表型是其形成流行病的关??
２．３?结果与分析??２．３．１样本菌丝电镜拍照结果??新蚜虫疠霉通过主动弹射孢子的方式释放分生孢子，下图（图２．２）分别是新??蚜虫疠霉弹孢前菌丝（ＢＤ）、弹孢高峰期菌丝（ＤＤ）与弹孢后菌丝（ＡＤ）的电镜照??片。从图中可以看出，处于ＢＤ状态的菌丝较饱满，正处于营养生长的旺盛时??期。ＤＤ状态的菌丝除了饱满的菌丝外，还有正在不断生成的孢子，以及即将弹??射的孢子，Ｂ图中箭头处为孢子即将脱离菌丝的状态。ＡＤ状态的菌丝大多有孔??不完整，或呈丝状，表明菌丝在完成孢子弹射、繁殖后代的任务后，各种生理??机能开始下降，临近死亡。ＤＤ与ＢＤ状态菌丝相比，除了正常营养生长所必需??的代谢与调控外的基因，与生殖相关的基因也在大量表达，尤其是与弹孢在相??关的基因的表达正处于高表达时期。由于ＡＤ状态菌丝己趋于死亡，ＢＤ／ＤＤ状??态菌丝与其相比
说明所提ＲＮＡ纯度较好，且蛋白、多糖等有机物污染较少，符合ＲＮＡ－ｓｅｑ测??序样本的要求。各取５?ｐＬ产物跑琼脂糖凝胶电泳，结果显示９个样本都有１８Ｓ??条带（图２．３），但其中ＡＤ１、ＡＤ２、ＡＤ３条带相对较弱，可能与其所处生长状态??有关。可能是由于新蚜虫疠霉物种特异性的原因，２８Ｓ条带较弱。??表２．１?ＲＮＡ质量检测结果??Ｔａｂｌｅ?２．１?ＲＮＡ?ｔｅｓｔ?ｒｅｓｕｌｔｓ?ｗｉｔｈ?Ｎａｎｏｄｒｏｐ?２０００??符号?浓度（ｎｇ／ｆｔＬ）?ＯＤ２６０／２８０?体积（ｐＬ）?总量（Ｍｇ）??ＢＤ１?２４０．５２?２．３７?４５?１０．８２??ＢＤ２?５７８．３５?２．３３?４５?２６．０３??ＢＤ３?７３３．７０?２．３１?４５?３３．０２??
【参考文献】：
期刊论文
[1]潮霉素B抗性为选择标记的整合型表达载体的构建及在米根霉中的遗传转化[J]. 张旻,姜绍通,郑娟,郑志,李兴江,潘丽军,罗水忠. 生物工程学报. 2015(08)
[2]基因工程改良在昆虫病原真菌中的应用[J]. 边强,王广君,张泽华,高松,农向群. 中国生物工程杂志. 2009(03)
[3]代谢组研究[J]. 唐惠儒,王玉兰. 生命科学. 2007(03)
[4]限制性内切酶介导的玫烟色拟青霉原生质转化体系构建[J]. 杨旭芬,应盛华,冯明光. 浙江大学学报(农业与生命科学版). 2006(06)
[5]虫生真菌分子生物学研究进展[J]. 王成树,李增智. 微生物学通报. 2001(03)
[6]新蚜虫疠霉连续液体培养的菌丝生物量、产孢量及杀蚜毒力[J]. 许谦,冯明光. 微生物学报. 2001(03)
博士论文
[1]球孢白僵菌热激蛋白家族、Ca2+ATP激酶Pmr1、磷酸化酶Cdc14及腺苷酸环化酶的功能解析[D]. 王洁.浙江大学 2014
[2]蚜虫专化性病原真菌（虫霉目）随寄主迁飞扩散而传播流行的生物学实证研究[D]. 陈春.浙江大学 2005
硕士论文
[1]基于新蚜虫疠霉RNA-seq数据的内参基因及产孢相关基因的筛选和验证[D]. 解廷娜.中国计量大学 2016
[2]几株绿僵菌清除自由基活性物质及代谢组学的研究[D]. 庄梦敏.安徽农业大学 2013
[3]雅致放射毛霉培养条件优化及apt1基因的克隆表达[D]. 杨善岩.浙江工业大学 2012
[4]采后不同时期的草菇菌柄表达谱差异分析[D]. 鄢淑琴.福建农林大学 2011
本文编号：3645546
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