水稻白叶枯病菌致病相关sRNA的筛

发布时间：2022-06-02 22:25

　　细菌非编码sRNA是一类长度范围在50-500bp之间的核酸分子,对靶基因的表达调控主要是与靶基因的mRNA序列通过碱基互补配对的方式来完成的。多数sRNA是由位于编码蛋白质的基因的5’和3’端之间的基因间区域或非翻译区编码。sRNA是生物体内重要的调控因子,参与生物体内的很多活动。为筛选出与稻黄单胞菌Xanthomonas oryzae pv.oryzae PX099A中与致病性相关的非编码小RNA,将PX099A分别在普通生长培养基PSA和hrp基因簇诱导培养基XOM2中进行培养,分别提取菌体总RNA,送公司进行高通量测序。对高通量测序结果进行分析,构建水稻白叶枯病菌Xoo PX099A sRNA文库。根据编码区域的不同及在基因组中的位置信息将测序得到的sRNA分为顺式（cis-）和反式（trans-）两类,其中cis-sRNA有337个,trans-sRNA有264个;对比sRNA在两种培养基中的表达水平,筛选出差异性表达比较明显的10个sRNA,通过qRT-PCR对高通量测序结果进行实验验证,得到的结果基本上一致;通过TargetRNA软件预测表达差异明显的sRNA的靶标基因,... 

【文章页数】：88 页

【学位级别】：硕士

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摘要
ABSTRACT
上篇 文献综述
    第一章 水稻黄单胞菌致病相关sRNA的作用机制
        1 sRNA种类与结构特性
        2 sRNA基本功能
        3 sRNA调控病菌致病性的机制
            3.1 sRNA对T3SS的影响
            3.2 sRNA对细菌运动性的影响
            3.3 sRNA与hrp基因的功能关系
    第二章 水稻黄单胞菌致病相关sRNA的研究意义
        1 研究现状
        2 筛选与鉴定方法
            2.1 高通量测序技术
            2.2 Northern印迹
            2.3 荧光定量PCR
        3 存在的问题与研究设想
        4 研究目的
    第三章 Harpin蛋白研究进展
        1 Harpin蛋白的遗传学特性
            1.1 植物病原细菌hrp基因簇
            1.2 Ⅲ型分泌系统及效应蛋白
            1.3 Harpin在植物细胞中的致病性作用
        2 Harpin蛋白的生物学效应
            2.1 诱导植物抗病性
            2.2 促进植物生长发育
            2.3 增加净光合效率
        3 Harpin蛋白的信号传导机制
        4 Harpin蛋白的研究目的
下篇 研究内容
    第一章 水稻白叶枯病致病相关sRNA的筛选与鉴定
        1 材料与方法
            1.1 供试菌株
            1.2 培养基
            1.3 菌株培养条件与保存
            1.4 基因表达量分析
        2 结果与分析
            2.1 Xoo PXO99~A sRNA文库的概况
            2.2 候选sRNA的分类
            2.3 sRNA的差异表达分析
            2.4 sRNA基因组位置信息
            2.5 sRNA靶基因的筛选
        3 讨论
    第二章 水稻白叶枯病致病相关sRNA的功能研究
        1 材料与方法
            1.1 供试菌株和质粒
            1.2 培养基与抗生素
            1.3 植物材料
            1.4 sRNA突变体的产生
            1.5 sRNA缺失突变菌株的获得
            1.6 sRNA突变体回补菌株的产生
            1.7 sRNA的突变对水稻致病性的测定
            1.8 过敏反应的测定
        2 结果与分析
            2.1 sRNA突变体的产生
            2.2 PX099~A trans191、trans217、trans3287回补菌株的构建
            2.3 通过qRT-PCR验证成功敲除、回补
            2.4 sRNA敲除突变体的生长
            2.5 水稻上致病力的测定
            2.6 烟草上过敏性反应的测定
            2.7 不同突变体中hrp基因簇相关基因的表达
        3 讨论
    第三章 Hpal与质膜嵌入蛋白PIP1;4互作对光合作用的影响
        1 材料与方法
            1.1 植物材料
            1.2 供试菌株及载体
            1.3 基因表达分析
            1.4 BiFC方法验证蛋白互作
            1.5 植株光合作用值的测定
        2 结果与分析
            2.1 AtPIP1;4基因表达
            2.2 Hpa1与PIP1;4在细胞膜上的BiFC验证
            2.3 植株光合作用值的测定
        3 讨论
参考文献
致谢
硕士期间发表的论文


【参考文献】：
期刊论文
[1]十字花科黑腐病菌中一个与HR反应相关的小RNA的鉴定[J]. 李良贤,肖波,黄晓韵,唐东阶.  基因组学与应用生物学. 2015(07)
[2]细菌非编码小RNA研究进展[J]. 王勇祥,孟霞,孟宪臣,聂佳佳,朱国强.  中国预防兽医学报. 2014(11)
[3]细菌非编码小RNA的分类及功能简介[J]. 聂佳佳,金鑫,孟宪臣,朱国强.  中国动物传染病学报. 2013(03)
[4]铜绿假单胞菌群体感应系统的研究进展[J]. 陈树林,黄彬.  中国微生态学杂志. 2012(12)
[5]国外新引进水稻品种(系)对我国水稻白叶枯病致病型的抗性反应[J]. 袁筱萍,徐群,余汉勇,王一平,魏兴华.  植物保护. 2011(05)
[6]病原菌非编码小RNA的致病调控功能研究[J]. 孟霞,王亨,朱国强.  中国预防兽医学报. 2011(09)
[7]细菌中非编码小RNA的筛选及鉴定[J]. 唐彬,肖斌,毛旭虎,邹全明.  生命的化学. 2008(04)

博士论文
[1]小麦TaMYB3R1抗逆功能与转Hpal10-42小麦对赤霉病和蚜虫抗性的初步研究[D]. 蔡洪生.南京农业大学 2011
[2]水稻白叶枯病菌致病性功能基因组学分析[D]. 黄贵修.华南热带农业大学 2005



本文编号：3653200