免疫共沉淀联合质谱筛选Pik-H4/Avr-Pik-H4互作蛋白及其功能初步分析

发布时间：2022-06-02 22:47

　　稻瘟病属于世界范围内的真菌性病害,严重威胁世界的粮食安全,由子囊菌亚门丝状真菌稻瘟病菌（Magnaporthe oryzae）侵染引起。水稻-稻瘟病菌的互作模式符合经典的“基因对基因”学说,通过筛选抗病基因和无毒基因的互作蛋白揭示各自参与的信号通路,有助于进一步阐明宿主与病原菌间的互作机制。Pik-H4由Pik₁-H4和Pik₂-H4组成,对广东的稻瘟病菌生理小种大多都表现出高抗。Pik₁-H4蛋白含有NBS-LRR结构域,Pik₂-H4蛋白含有NB-ARC结构域,该类结构域在植物的免疫系统中扮演重要角色。稻瘟病菌生理小种容易发生遗传变异,对抗病机制的诠释才能从根本上解决该问题。本研究主要通过瞬时表达系统利用免疫共沉淀技术筛选Pik-H4及Avr-Pik互作蛋白,结果如下:1、本研究中将水稻种子剥壳后种植在1/2 MS中8-10天左右,利用纤维素酶降解水稻叶鞘得到水稻的原生质体,将构建好的瞬时载体通过PEG介导转化到细胞中,能够在14-16 h左右得到目标蛋白的高效表达。通过实验发现,酶解的最佳时间... 

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【学位级别】：硕士

【部分图文】：

瞬时表达体系简化图

合物定位调节、涉及转录后修饰的互作、监视新的互作蛋白、架等（范安然等，2009）。BiFC 技术也存在相应的缺点，（有不可逆性，限制蛋白互作的动态学过程研究。（2）空间位的形成，造成结果假阴性。（3）对温度要求比较敏感，一般4）双分子荧光信号可能滞后于蛋白质相互作用过程，不同的一样。随着 BiFC 基础理论研究的深入和新的性能优异的互补研究蛋白组学方面会有更加广泛的应用前景。

以及弱相互作用的蛋白。同时，也具备一些缺点限于核蛋白的筛选。（2）一些蛋白具有自身转录激活3）酵母细胞内的环境不能引导所有蛋白进行正）在酵母菌株中大量表达外源蛋白可能会产生毒。总之，酵母双杂技术相对比较成熟，应用得比义，不仅可以筛选水稻自身蛋白的互作网络还可络。


本文编号：3653229