香蕉CMV和BBTV检测方法的建立及其含量变化的研究

发布时间：2022-07-27 16:25

　　香蕉（Musa spp.）为单子叶草本植物,属于芭蕉科（Musaceae）芭蕉属（Musa）,是仅位于水稻、小麦和玉米之后的第四大粮食作物,世界上鲜果消费量和贸易量最大的热带水果之一。然而,黄瓜花叶病毒（Cucumber mosaic virus,CMV）和香蕉束顶病毒（Banana bunchy top virus,BBTV）病害大规模爆发和流行已成为限制香蕉大量生产的主要因素之一,也严重影响了香蕉产业的发展。因此本研究主要通过建立香蕉CMV和BBTV检测的组织免疫印迹技术和明确这两种病毒在巴西蕉不同部位及不同时间的相对含量变化两方面内容,为有效防控病害奠定基础。本研究利用SYBR Green实时荧光定量PCR中的绝对定量技术,对香蕉样品叶片中的CMV和BBTV进行了准确的定量,确定CMV和BBTV实时荧光定量PCR反应条件的合理性及检测方法的可靠性;应用CMV和BBTV的单克隆抗体,建立了快速检测田间样品的组织免疫印迹技术（Tissue blot immunobiding assay,TBIA）;明确了巴西蕉不同部位及不同季节CMV和BBTV的相对含量变化,结果如下:1、依据CMV... 

【文章页数】：68 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
abstract
缩写词及英汉对照
1 前言
    1.1 香蕉病毒病害的概况
    1.2 香蕉CMV和BBTV两种病毒的生理学特征及病理学特性
        1.2.1 黄瓜花叶病毒（Cucumber mosaic virus，CMV）
        1.2.2 香蕉束顶病毒（Banana bunchy top virus，BBTV）
    1.3 分子生物学检测
        1.3.1 实时荧光定量PCR技术
        1.3.2 环介导等温扩增技术
    1.4 血清学检测技术
    1.5 本研究的目的与意义
2 材料与方法
    2.1 实验材料
        2.1.1 植物材料
        2.1.2 菌株及抗血清
        2.1.3 主要试剂
        2.1.4 主要仪器
        2.1.5 主要试剂的配制
        2.1.6 数据分析
    2.2 实验方法
        2.2.1 RNA提取用具的处理
        2.2.2 感染CMV病毒的香蕉叶片总RNA的抽提
        2.2.3 感染BBTV病毒的香蕉叶片总DN A的抽提
        2.2.4 实时荧光定量PCR标准曲线的制作
        2.2.5 病毒CMV和BBTV的实时荧光定量
        2.2.6 LAMP（RT-LAMP）检测
        2.2.7 组织免疫印迹检测
        2.2.8 间接ELISA（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）检测
3 结果与分析
    3.1 香蕉叶片总DNA及RN A的抽提
    3.2 香蕉叶片CMV和BBTV含量的检测
        3.2.1 CMV和BBTV标准曲线标准品的制备
        3.2.2 实时荧光定量PCR检测体系的建立
        3.2.3 三个香蕉样品叶片的CMV含量分析
        3.2.4 香蕉叶片的BBTV含量分析
    3.3 TBIA法和LAMP法检测香蕉病株的灵敏度分析
        3.3.1 TBIA法一抗、二抗最适稀释度选择
        3.3.2 比较TBIA法和RT- LAMP法检测香蕉CMV病株的灵敏度
        3.3.3 比较TBIA法和LAMP法检测香蕉BBTV病株的灵敏度
    3.4 TBIA法检测香蕉病株的稳定性分析
        3.4.1 TBIA法检测香蕉CMV病株的稳定性分析
        3.4.2 TBIA法检测香蕉BBTV病株的稳定性分析
    3.5TBIA法、LAMP法和PCR/RT-PCR法田间样品检测效果评价
        3.5.1 比较TBIA法、RT- LAMP和RT-PCR法检测CMV病株
        3.5.2 比较TBIA法、LAMP法和PCR/RT-PCR法检测BBTV病株
    3.6 香蕉CMV和BBTV含量的变化
        3.6.1 香蕉不同部位CMV和BBTV的相对含量变化
        3.6.2 香蕉不同季节CMV和BBTV病毒的相对含量变化
4 讨论与结论
    4.1 讨论
        4.1.1 香蕉叶片CMV和BBTV实时荧光定量PC R定量分析
        4.1.2 CMV和BBTV检测方法的研究
        4.1.3 巴西蕉CMV和BBTV相对含量的变化分析
    4.2 结论
致谢
参考文献


【参考文献】：
期刊论文
[1]海南香蕉病毒病害调查及检测[J]. 王达新,马蔚红,殷晓敏,郭刚.  南方农业学报. 2014(02)
[2]以梅花鹿P21基因为模板比较相对和绝对荧光定量PCR的准确性[J]. 王大涛,郭倩倩,朱宏伟,刘振,王桂武,李春义.  特产研究. 2013(04)
[3]香蕉病毒病发生和防控[J]. 饶雪琴,孙洁,周翎,李华平.  中国果业信息. 2013(10)
[4]逆转录环介导等温扩增技术检测花生条纹病毒[J]. 谢宏峰,迟玉成,许曼琳,樊堂群,张建建,吴菊香,许婷婷.  植物病理学报. 2011(06)
[5]香蕉束顶病毒研究新进展[J]. 余乃通,刘志昕.  微生物学通报. 2011(03)
[6]基因芯片技术检测黄瓜花叶病毒、烟草花叶病毒和马铃薯Y病毒[J]. 贾慧,王艳辉,王进忠,王升启,董金皋.  华北农学报. 2011(01)
[7]RT-LAMP技术检测菜豆荚斑驳病毒的研究[J]. 闻伟刚,杨翠云,崔俊霞,张颖.  植物保护. 2010(06)
[8]实时荧光定量PCR技术原理与应用[J]. 周晓丽,朱国坡,李雪华,王艳玲,刘兴友.  中国畜牧兽医. 2010(02)
[9]香蕉束顶病毒海口分离物基因组的克隆及序列分析[J]. 冯团诚,王健华,刘志昕.  植物病理学报. 2010(01)
[10]单抗免疫斑点法和组织印迹法检测侵染蝴蝶兰的建兰花叶病毒[J]. 董晓辉,孟春梅,黎军英,吴建祥,荣松,张超,洪健.  微生物学通报. 2009(10)

硕士论文
[1]香蕉束顶病毒DNA组分启动子的研究及香蕉条斑病毒的初步鉴定[D]. 庄军.华南热带农业大学 2005



本文编号：3665791