斑翅果蝇气味结合蛋白OBP56h、OBP69a及OBP76a与小分子化合物的结合特征

发布时间：2022-10-11 12:18

　　斑翅果蝇（Drosophila suzukii）为害草莓、蓝莓、樱桃、葡萄等软皮水果,对水果产业造成了巨大的经济损失。与黑腹果蝇（Drosophila melanogaster）不同的是,斑翅果蝇雌虫喜欢将卵产于新鲜、即将成熟的水果中,其嗅觉感受行为发生了改变;顺-11-十八碳烯酸乙酯（11-cis-vaccenyl acetate,c VA）是果蝇属昆虫普遍存在的信息素,促进黑腹果蝇雌虫交配,但在斑翅果蝇中缺失,且抑制斑翅果蝇雌虫交配。前人研究表明,黑腹果蝇气味结合蛋白（odorant binding proteins,OBPs）Dm OBP56h、Dm OBP69a和Dm OBP76a参与信息素行为调控,但目前关于斑翅果蝇的嗅觉分子机制尚不清楚。鉴于此,本文以斑翅果蝇为研究对象,筛选差异表达DsOBPs,原核表达纯化蛋白,检测蛋白与c VA的结合能力,利用同源建模和分子对接技术计算关键的结合位点,用虚拟突变分析变化的氨基酸位点,通过荧光竞争结合筛选潜在配体,为深入理解斑翅果蝇的嗅觉分子机制提供依据。主要结果如下:1.斑翅果蝇信息素结合蛋白筛选为探究斑翅果蝇中识别信息素的DsOBPs... 

【文章页数】：68 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
缩略语表
第一章 文献综述
    1.1 斑翅果蝇的研究概况
        1.1.1 斑翅果蝇的发生与为害
        1.1.2 斑翅果蝇的化学生态学
        1.1.3 斑翅果蝇的防治
    1.2 果蝇信息素
        1.2.1 黑腹果蝇信息素
        1.2.2 斑翅果蝇信息素
    1.3 昆虫气味结合蛋白
        1.3.1 黑腹果蝇气味结合蛋白
        1.3.2 斑翅果蝇气味结合蛋白
    1.4 研究目的与意义
    1.5 创新点
技术路线
第二章 斑翅果蝇信息素结合蛋白筛选
    2.1 材料与方法
        2.1.1 转录组数据获取
        2.1.2 转录组数据分析
    2.2 结果与分析
        2.2.1 转录组基因表达量
        2.2.2 DsOBPs表达量
    2.3 讨论
第三章 斑翅果蝇DsOBPs基因克隆、蛋白表达与纯化
    3.1 材料与方法
        3.1.1 实验材料
        3.1.2 斑翅果蝇总RNA提取
        3.1.3 第一链cDNA的合成
        3.1.4 引物设计
        3.1.5 斑翅果蝇DsOBPs基因克隆
        3.1.6 斑翅果蝇DsOBPs序列分析
        3.1.7 斑翅果蝇DsOBPs的原核表达
        3.1.8 斑翅果蝇DsOBPs的纯化
        3.1.9 蛋白浓度测定
    3.2 结果与分析
        3.2.1 斑翅果蝇DsOBPs克隆与序列分析
        3.2.2 蛋白表达与纯化
    3.3 讨论
第四章 斑翅果蝇DsOBP76a与 cVA的结合机制
    4.1 材料与方法
        4.1.1 实验材料
        4.1.2 荧光猝灭
        4.1.3 同源建模
        4.1.4 分子对接
        4.1.5 虚拟突变
    4.2 结果与分析
        4.2.1 荧光猝灭
        4.2.2 同源建模
        4.2.3 分子对接
        4.2.4 虚拟突变
    4.3 讨论
第五章 斑翅果蝇DsOBPs的结合特性分析
    5.1 材料与方法
        5.1.1 实验材料
        5.1.2 荧光探针适合性的检测
        5.1.3 荧光竞争性结合
    5.2 结果与分析
        5.2.1 斑翅果蝇DsOBPs与荧光探针的适合性检测
        5.2.2 斑翅果蝇DsOBPs的荧光竞争结合
    5.3 讨论
第六章 结论与展望
    6.1 结论
    6.2 展望
参考文献
硕士期间发表的学术论文
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]水果害虫铃木氏果蝇的入侵及其防控研究进展[J]. 任路明,秦胜楠,丁心婷,万方浩,褚栋.  生物安全学报. 2014(03)
[2]斑翅果蝇（Drosophila suzukii）研究现状[J]. 张开春,闫国华,郭晓军,王晶,张晓明,周宇.  果树学报. 2014(04)



本文编号：3690559