中华蜜蜂和意大利蜜蜂对囊状幼虫病病毒（Sacbrood virus）敏感性差异机制及其RNAi研究

发布时间：2022-10-19 16:36

　　蜜蜂囊状幼虫病病毒（Sacbrood virus,SBV）所引起的蜜蜂囊状幼虫病（Sacbrood）严重威胁蜜蜂生存,在其幼虫期、蛹期和成年蜜蜂阶段均可感染,具有极强的传染性,既能够侵染东方蜜蜂（Apis cerana）,也可以在西方蜜蜂（Apis mellifera）体内增殖繁衍,但对东方蜜蜂造成的危害更为严重。为了寻找这两种蜜蜂对SBV侵染的敏感性和致病性差异的机制,本试验分别给中华蜜蜂和意大利蜜蜂2日龄幼虫及新出房成蜂饲喂接种SBV,研究被SBV侵染后中、意蜂幼虫的体重、发育历期、死亡率及成蜂的重量变化和存活率改变。结果发现被SBV侵染的中蜂幼虫均不能正常化蛹并全部死亡;染病意蜂幼虫体重表现为显著降低（P＜0.001）,并有12%能够渡过化蛹阶段,但其预蛹期延长了1.5 d;中、意蜂成蜂在饲喂病毒5日后体重表现为显著降低（P＜0.05）,死亡率未发现显著性差异（P＞0.05）。试验表明SBV主要对蜜蜂幼虫造成危害,其对中蜂幼虫的致命性要高于意蜂幼虫。利用荧光定量PCR技术对SBV接种后的4日龄、7日龄幼虫和10日龄、20日龄成蜂体内的变态发育、营养代谢和免疫相关基因的表达水平进行... 

【文章页数】：71 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第一章 绪论
    1 蜜蜂囊状幼虫病
    2 SBV研究现状
    3 蜜蜂免疫与抗病毒反应
        3.1 蜜蜂免疫
        3.2 抗病毒反应
    4 RNAi技术及在蜜蜂中的应用
    5 研究意义及内容
第二章 接种SBV后对中意蜂发育的影响
    1 材料与方法
        1.1 实验材料
            1.1.1 供试样本
            1.1.2 主要实验材料和仪器
        1.2 实验方法
            1.2.1 接种病毒液制备
            1.2.2 幼虫样本的室内饲喂与收集
            1.2.3 成蜂样本的饲养与采集
            1.2.4 数据整理与分析
    2 结果与分析
        2.1 SBV对意蜂幼虫体重变化的影响
        2.2 SBV对中意蜂幼虫存活率的改变
        2.3 SBV对意蜂幼虫发育时长的影响
        2.4 SBV对中意蜂成蜂重量的改变
        2.5 SBV病毒对中意蜂成蜂寿命的影响
    3 讨论与结论
第三章 SBV感染后对中意蜂体内免疫发育和代谢等基因的影响
    1 材料和方法
        1.1 实验材料
            1.1.1 供试蜜蜂
            1.1.2 主要试剂与仪器
        1.2 实验方法
            1.2.1 RNA提取与c DNA第一条链的合成
            1.2.2 引物信息
            1.2.3 荧光定量PCR
            1.2.4 数据处理与分析
    2 结果与分析
        2.1 接种SBV对中蜂的影响
            2.1.1 中蜂幼虫和成蜂病毒感染水平
            2.1.2 对4 日龄幼虫的影响
            2.1.3 变态期幼虫的反应
            2.1.4 成年中蜂的影响
        2.2 SBV对意蜂的影响
            2.2.1 意蜂体内的SBV水平比较
            2.2.2 对4 日龄意蜂幼虫的影响
            2.2.3 意蜂变态期幼虫反应
            2.2.4 对成年意蜂的影响
    3 讨论与结论
第四章 RNAi对 SBV侵染后中意蜂的影响
    1 材料和方法
        1.1 实验材料
            1.1.1 供试蜂群
            1.1.2 主要试剂与仪器
        1.2 试验方法
            1.2.1 目的引物的设计与合成
            1.2.2 目的基因的扩增
            1.2.3 PCR产物的回收纯化
            1.2.4 质粒连接反应
            1.2.5 质粒的纯化
            1.2.6 质粒的抽提
            1.2.7 含有T7 启动子的引物合成
            1.2.8 含有T7 启动子目的片段的扩增
            1.2.9 dsRNA的合成
            1.2.10 dsRNA的纯化
            1.2.11 dsRNA干扰试验
            1.2.12 干扰结果检测
            1.2.13 数据处理与分析
    2 结果与分析
        2.1 干扰结果验证
        2.2 意蜂成蜂干扰效果验证
        2.3 中蜂成蜂干扰效果验证
    3 讨论与结论
第五章 总结与展望
参考文献
附录表A 荧光定量PCR引物信息表
附录表B 成蜂RNAi试验引物信息表
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]中华蜜蜂半乳糖凝集素AcGalectin的表达、纯化及性质分析[J]. 岳金金,马宇驰,刘全,姜莉莉,费东亮,张鹤,孙莉,李明,马鸣潇.  昆虫学报. 2018(05)
[2]中华蜜蜂囊状幼虫病病毒单克隆抗体的制备与鉴定[J]. 张鹤,李明,孙莉,费东亮,岳金金,金宏凯,马鸣潇.  病毒学报. 2017(06)
[3]囊状幼虫病病毒的流行及其感染治疗[J]. 沈克飞,曹联飞,曹兰,任勤,谭方明,张邑帆.  中国生物制品学杂志. 2017(09)
[4]中华蜜蜂囊状幼虫病灵芝卵黄抗体的探讨[J]. 刘建华.  吉林畜牧兽医. 2017(03)
[5]蜜蜂囊状幼虫病研究进展[J]. 王永生,宋文菲,杨爽,苗春辉,张永红.  蜜蜂杂志. 2017(02)
[6]二重PCR快速检测中蜂囊状幼虫病病毒与东方蜜蜂微孢子虫方法的建立[J]. 林丽花,黄伟峰,陈琼艳,郭少娟,赵翠霞,雷珊珊,苏松坤,李继莲,黄少康.  中国科技论文. 2016(18)
[7]重庆中华蜜蜂囊状幼虫病病毒多聚蛋白基因分子特性分析[J]. 沈克飞,曹兰,郑华,杨柳,张邑帆,张素辉.  昆虫学报. 2015(09)
[8]中华蜜蜂囊状幼虫病病毒非结构蛋白抗体的制备及其应用[J]. 夏晓翠,周冰峰,魏太云.  福建农林大学学报(自然科学版). 2014(05)
[9]蜜蜂囊状幼虫病病毒的基因型分析[J]. 曹兰,沈克飞,张邑帆,罗文华,王瑞生,任勤,郭军,王志冬,戴荣国.  动物医学进展. 2012(01)
[10]蜜蜂囊状幼虫病研究进展[J]. 张国只,韩日畴.  中国生物防治. 2008(S1)

硕士论文
[1]西方蜜蜂（Apis mellifera）19 kDa血淋巴蛋白HP19的表达与功能研究[D]. 王琦.福建农林大学 2017
[2]西方蜜蜂（Apis mellifera）储存蛋白hex70b和hex110的表达与功能研究[D]. 杨文静.福建农林大学 2016



本文编号：3693720