杧果细菌性干枯病病原菌分离鉴定及全基因组测序分析

发布时间：2022-10-19 19:40

　　杧果是著名热带水果,被称为“热带果王”,近年来随着杧果种植产业的持续扩增,使得杧果产区农业经济得到快速发展,同时杧果病虫害的种类随着种植面积的扩大也越来越多。近两年本课题组在广东、四川等杧果产区病虫害普查时发现了一种危害逐渐加重的细菌性病害。杧果的叶片和枝条在染病初期呈现不规则的黑褐色斑圈,中期病斑向四周蔓延,前期出现的症状与细菌性角斑病相似,但后期染病的叶片和枝条干枯坏死,与细菌性角斑病后期出现的病害症状完全不同,固本课题称之为杧果细菌性干枯病。为明确该病原菌的种类,采用稀释涂布分离法,对具有明显症状的杧果病害样品进行稀释分离、纯化,Koch法则检测分离物接种杧果枝叶的致病性,并通过观察分离物的形态学特征、生物学活性测定和分子生物学分析确定其分类学地位。经全基因组测序技术,预测病原菌的致病基因、耐药基因、致病毒力和碳水化合物等相关基因,以期为明确病原菌对寄主产生的致病机理和病害防治途径提供理论依据。主要研究内容如下:1.杧果细菌性干枯病病原菌分离及鉴定以典型的干枯病病样为试验材料,采用稀释涂布法获得NY01菌株。经过刺伤接种将NY01菌株回接到杧果的叶片和枝条上,4天后在杧果的叶片和... 

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【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
1 文献综述
    1.1 杧果病害的种类
    1.2 植物病原细菌分类学研究概况
    1.3 细菌基因组学研究进展
        1.3.1 第一代测序技术
        1.3.2 第二代测序技术
        1.3.3 第三代测序技术
    1.4 本研究目的与意义
2 材料与方法
    2.1 供试材料
    2.2 供试培养基
    2.3 仪器
    2.4 试剂
    2.5 病原菌的分离
    2.6 病原菌的致病性测定
    2.7 病原菌形态学鉴定
    2.8 病原菌分子生物学鉴定
    2.9 病原菌的生物学活性测定
        2.9.1 不同碳源对病原菌生长的影响
        2.9.2 不同氮源对病原菌生长的影响
        2.9.3 不同pH对病原菌生长的影响
        2.9.4 不同温度对病原菌生长的影响
        2.9.5 不同盐度对病原菌生长的影响
        2.9.6 病原菌的葡萄糖氧化发酵实验
        2.9.7 病原菌的糖、醇类发酵实验
    2.10 NY01 菌株的全基因组测序与分析
        2.10.1 菌株培养收集
        2.10.2 DNA质量检测、文库构建和全基因组PacBio RS II测序
        2.10.3 测序数据过滤统计
        2.10.4 基因组组装和预测
        2.10.5 公共数据库注释
        2.10.6 专有数据库分析
3 结果与分析
    3.1 杧果细菌性干枯病及其病原菌的分离、鉴定
        3.1.1 杧果细菌性干枯病症状
        3.1.2 病原菌分离
        3.1.3 致病性测定
        3.1.4 病原菌形态学鉴定
        3.1.5 病原菌分子生物学鉴定
    3.2 病原菌的生物学特性测定
        3.2.1 不同碳源对病原菌生长的影响
        3.2.2 不同氮源对病原菌生长的影响
        3.2.3 不同pH对病原菌生长的影响
        3.2.4 不同温度对病原菌生长的影响
        3.2.5 不同盐度对病原菌生长的影响
        3.2.6 病原菌的葡萄糖氧化发酵实验
        3.2.7 病原菌的糖、醇类发酵实验
    3.3 NY01 菌株的全基因组测序及分析
        3.3.1 DNA质量检测
        3.3.2 数据过滤统计
        3.3.3 基因组组装和预测
        3.3.4 公共数据库基因注释
        3.3.5 专有数据库分析
4 结论与讨论
    4.1 主要研究结果
    4.2 讨论
    4.3 有待进一步研究的问题
参考文献
附录1
附录2
附录3
附录 4
致谢
作者简介
导师简介


【参考文献】：
期刊论文
[1]DNA的测序技术及应用[J]. 马云聪.  现代医学与健康研究电子杂志. 2018(09)
[2]全基因组测序在结核病研究中的应用进展[J]. 陈昕昶,张文宏.  中国防痨杂志. 2018 (02)
[3]植物病原细菌分类最新进展[J]. 冯洁.  中国农业科学. 2017(12)
[4]新疆杨树叶纹斑病病原菌分离及致病性测定[J]. 张金萍,蒋萍.  江苏农业科学. 2017(01)
[5]烟草青枯病拮抗菌的筛选及发酵条件试验[J]. 许大凤,倪海军,季学军,李田,高正良,王芳,周本国.  烟草科技. 2016(03)
[6]DNA测序技术方法研究及其进展[J]. 谢浩,赵明,胡志迪,王大巾,孟旭莉,丁先锋.  生命的化学. 2015(06)
[7]植物病原细菌DNA条形码检测技术[J]. 田茜,张美,胡洁,赵文军.  植物检疫. 2014(06)
[8]广西杧果主要病虫害及其防治[J]. 梁清志,文定清,刘丽琴.  中国南方果树. 2014(05)
[9]浅谈进境原木分类的鉴定方法[J]. 陈莹,靳帅,李瑞法,范光辉,柳之光.  绿色科技. 2014(07)
[10]芒果采后病害生物防治研究进展[J]. 黄建新.  南方农业. 2014(03)

博士论文
[1]优良植物根际促生菌Bacillus mycoides Gnyt1特性研究及全基因组测序分析[D]. 李建宏.甘肃农业大学 2017
[2]枯草芽孢杆菌Na-002纳豆激酶基因的克隆、表达及定点突变研究[D]. 周波.山东农业大学 2011

硕士论文
[1]雷州半岛桐花树病害病原菌分离鉴定[D]. 孙兴涛.广东海洋大学 2017
[2]杧果叶片响应细菌性角斑病菌差异蛋白的筛选[D]. 朱飞冀.海南大学 2017
[3]一株羊源肠外致病性大肠杆菌的分离鉴定及全基因组测序分析[D]. 闫展燕.吉林农业大学 2017
[4]伯克氏菌属植物病原菌DNA条形码检测技术研究[D]. 张琦梦.南京农业大学 2016
[5]姜氏菌属菌株全基因组测序及比较基因组学分析[D]. 焦建宇.昆明理工大学 2016
[6]2株溶血不动杆菌全基因组测序及生物信息学分析[D]. 宋程程.天津大学 2016
[7]杧果细菌性角斑病菌致病因子研究[D]. 张大智.海南大学 2015
[8]芒果畸形病病原鉴定及致病机理初步研究[D]. 杨顺锦.海南大学 2010
[9]一株中度嗜盐菌的分离、鉴定及系统发育分析[D]. 王柏玲.东北师范大学 2009



本文编号：3693988