组蛋白磷酸化在草地贪夜蛾Sf9细胞有丝分裂中的动态分布研究

发布时间：2022-11-05 08:32

　　染色体由遗传物质DNA与组蛋白组成,其中核心组蛋白包括H2A,H2B,H3和H4。这4种核心组蛋白的N末端氨基酸残基可以进行一系列的翻译后修饰进而参与不同的生物学功能,这些修饰包括磷酸化、泛素化、甲基化、乙酰化和SUMO化等。这些修饰可以改变组蛋白氨基酸末端的电荷基本性质,从而影响组蛋白与DNA以及非组蛋白之间的相互作用。染色质凝缩是正确执行各种细胞活动所必需的过程。在有丝分裂过程中,诸多因子共同参与调控染色质的凝缩,而染色质的松弛是DNA复制、修复、重组和基因转录所必需的。有丝分裂是动植物细胞进行增殖的主要方式。染色体也随着有丝分裂周期的进行发生动态变化:从间期高度无序的染色质丝状态到中期高度凝缩的在显微镜下清晰可见的染色体状态再到后期染色体解凝缩重新变成染色质丝的状态,许多基因参与该过程中染色质凝缩的调控。组蛋白H3 N末端存在诸多可以发生磷酸化的位点,例如Thr3、Ser10、Thr11和Ser28等。有趣的是,H3在Ser10、Thr11和Ser28位点磷酸化的现象已经在转录活性基因的基因组区域被观察到。在哺乳动物细胞有丝分裂中的研究表明,组蛋白H3 Ser10磷酸化的信号在晚... 

【文章页数】：55 页

【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
第一章 文献综述
    1.1 组蛋白密码
    1.2 有丝分裂周期调控机制
        1.2.1 染色单体分离的机制
        1.2.2 纺锤体组装检验点
    1.3.组蛋白H3 Ser10磷酸化与有丝分裂
    1.4 组蛋白H3 Thr3磷酸化与有丝分裂
    1.5 昆虫细胞有丝分裂研究进展
第二章 材料与方法
    2.1 主要实验材料
    2.2 主要实验仪器
    2.3 主要实验试剂及溶液的配制
        2.3.1 主要实验试剂
        2.3.2 主要实验溶液的配制
    2.4 主要实验方法
        2.4.1 细胞的培养及裂解
        2.4.2 总蛋白的提取
        2.4.3 SDS-PAGE聚丙烯酰胺凝胶电泳步骤
        2.4.4 Western blot检测组蛋白H3 Ser10 以及H3 Thr3磷酸化抗体的特异性
        2.4.5 ELISA酶联免疫吸附试验对抗体效价的检测
        2.4.6 ZEISS激光共聚焦显微镜观察荧光信号
        2.4.7 DAPI染色
        2.4.8 Sf9细胞的免疫荧光标记
        2.4.9 Dot-Blot分析实验
第三章 结果与分析
    3.1 组蛋白H3 Ser10磷酸化抗体的效价检测及特异性分析
    3.2 组蛋白H3 Ser10磷酸化抗体的特异性分析
    3.3 组蛋白H3 Ser10磷酸化在Sf9细胞有丝分裂中的动态分布
    3.4 组蛋白H3 Thr3磷酸化抗体的效价检测
    3.5 组蛋白H3 Thr3磷酸化抗体的特异性分析
    3.6 组蛋白H3 Thr3磷酸化在Sf9细胞有丝分裂中的动态分布
第四章 结论与讨论
参考文献
攻读硕士学位期间取得的研究成果
致谢



本文编号：3702256