油棕抗菌肽的抑菌性分析及效果研究
发布时间：2022-12-09 01:33
油棕茎干基腐病,又名油棕黑腐病是一种世界性的病害,油棕茎干基腐病病原菌为奇异根串珠霉Thielaviopsis paradoxa,主要侵染油棕的果实、叶片和茎干造成油棕的落果与死亡,进而对全球的油棕产业造成一定的影响。目前针对该病害主要采用化学防治与物理防治方法,化学防治用药量大、防治成本高且污染环境,物理防治主要是砍掉染病株消毒后集中焚烧,造成损失较大且对环境有害,更容易引发火灾。因此油棕茎干基腐病的绿色防控需要另辟蹊径,开发新技术。抗菌肽（Antimicrobial peptides,AMPs）是一类具有广谱抑菌活性的小分子多肽,广泛的分布在自然界的各种生物体中,因其高效、环保、不易产生抗性且对人畜无害而被广泛应用在植物病害防治领域中。本论文通过生物信息学技术与基因工程技术在油棕全基因组范围内进行抗菌肽基因的预测、筛选与抑菌活性分析,获得具有广谱、高效抑菌作用的油棕抗菌肽。根据油棕茎干基腐病的发病特点,将对病原菌广谱、高效的油棕抗菌肽转化到拟南芥中并稳定的表达,为油棕茎干基腐病的防治提供了新途径,主要研究结果如下:（1）以胚诱导的方法成功培养出89棵无菌油棕苗,诱导成活率为4.57...
【文章页数】：101 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
摘要
Abstract
1 引言
1.1 油棕茎干基腐病概述
1.1.1 油棕茎干基腐病的分布特点与发病症状
1.1.2 奇异根串珠霉分类地位与特征
1.1.3 根串珠霉的寄主范围
1.1.4 根串珠霉的国内外研究进展
1.2 植物抗菌肽的研究现状
1.2.1 抗菌肽及其发病机制相关(PR)防御蛋白
1.2.2 抗菌肽主要类别
1.2.3 抗菌肽的作用机制
1.2.4 抗菌肽的数据库
1.2.5 抗菌肽的生产与应用
1.3 植物转脂蛋白研究现状
1.4 油棕茎干基腐病防治研究进展
1.5 本研究的目的、意义和主要研究内容
1.6 技术路线
2 材料与方法
2.1 油棕的组织培养与真菌病害的病原鉴定的试验材料与方法
2.1.1 试验材料
2.1.2 试验方法
2.2 油棕抗菌肽的筛选与原核表达研究试验材料与方法
2.2.1 试验材料
2.2.2 试验方法
2.3 油棕新型抗菌肽8-1 的原核优化表达与活性检测的实验材料与方法
2.3.1 实验材料
2.3.2 试验方法
2.4 转油棕抗菌肽基因拟南芥抑制茎干基腐病的实验材料与方法
2.4.1 实验材料
2.4.2 试验方法
3 结果与分析
3.1 油棕的组织培养与真菌病害的病原鉴定
3.1.1 油棕组培苗的获得
3.1.2 油棕茎干基腐病病原菌的鉴定
3.1.3 油棕叶炭疽病原菌的鉴定
3.2 油棕抗菌肽的筛选与原核表达研究
3.2.1 油棕RNA的提取
3.2.2 油棕cDNA的合成
3.2.3 油棕抗菌肽基因的克隆
3.2.4 油棕抗菌肽的表达与纯化
3.2.5 油棕抗菌肽的抑真菌活性测定
3.2.6 油棕抗菌肽的抑细菌活性测定
3.3 油棕新型抗菌肽8-1 的原核优化表达与活性检测
3.3.1 油棕新型抗菌肽8-1 分离、鉴定与分子进化分析
3.3.2 油棕新型抗菌肽8-1 的表达与纯化
3.3.3 油棕新型抗菌肽8-1 的分子模型构建与分析
3.3.4 油棕新型抗菌肽8-1 的化学合成
3.3.5 油棕新型抗菌肽8-1 的抑菌活性检测
3.4 转油棕抗菌肽基因拟南芥抑制茎干基腐病研究
3.4.1 转基因载体构建
3.4.2 转基因拟南芥T_3 代株系的获得
3.4.3 转基因拟南芥的分子检测
3.4.4 转基因拟南芥的抑菌性鉴定
4 讨论
4.1 油棕的组织培养与真菌病害的病原鉴定
4.2 油棕抗菌肽的筛选与原核表达
4.3 油棕新型抗菌肽8-1 的原核优化表达与活性分析
4.4 转油棕抗菌肽基因拟南芥抑制茎干基腐病研究
5 结论
致谢
参考文献
攻读博士学位期间发表的学术论文
【参考文献】：
期刊论文
[1]蛹虫草中异源表达天蚕菌素抗菌肽[J]. 黄开华,吴莹莹,唐庆九,李燕,茅文俊,候贝贝,汪滢. 食用菌学报. 2018(04)
[2]安徽省烟草根黑腐病病原鉴定及生物学特性分析[J]. 许大凤,王文凤,朱启发,汪文杰,周本国,王芳,檀根甲. 烟草科技. 2018(08)
[3]thanatin串联抗菌肽原核表达研究[J]. 刘伟,李清海,刘仁虎. 浙江农业学报. 2018(05)
[4]抗菌肽在洗发液中防腐效能及安全性评价初探[J]. 桂银雪,杨娜,滕达,王秀敏,毛若雨,郝娅,滕国新,王建华. 生物技术通报. 2018(10)
[5]农杆菌介导木本植物遗传转化的研究进展[J]. 王栋鑫,彭棣,张爽. 北方园艺. 2018(02)
[6]油棕组培苗Mantled变异研究进展[J]. 张大鹏,王永,石鹏,金龙飞,曹红星. 热带农业科学. 2017(12)
[7]烟草根黑腐病菌ISSR标记的遗传多样性分析[J]. 窦彦霞,徐林,马冠华,李六英,张世渠. 烟草科技. 2017(11)
[8]抗菌肽在免疫防御和抗肿瘤中的作用[J]. 张福梅,李明生. 国外医药(抗生素分册). 2017(06)
[9]棘胸蛙抗菌肽Spinosan-C的串联表达与活性检测[J]. 刘悦,詹忠根,朱兵,郑荣泉,程宏毅,聂作明. 生物工程学报. 2018(01)
[10]细粒棘球绦虫转醛醇酶基因的克隆、表达及其潜在免疫诊断价值的研究[J]. 辛奇,景涛,宋晓霞,高海军,孙旭东,吕薇,Nabil Pervaiz,鲁俊. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志. 2017(04)
博士论文
[1]油菜新型抗菌肽的筛选和一种油菜菌核病防治新策略的设计[D]. 曹慧慧.中国农业科学院 2015
[2]人工合成抗菌肽抑制棉花黄萎病菌的机制及应用研究[D]. 倪密.浙江大学 2012
硕士论文
[1]抗菌肽Mytichitin-A和Plantaricin ZJ5的重组表达纯化及活性鉴定[D]. 高晓芳.天津科技大学 2016
[2]超量表达果蝇Drosomycin基因提高植株的抗病能力[D]. 任小东.西南大学 2012
本文编号：3714543
【文章页数】：101 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
摘要
Abstract
1 引言
1.1 油棕茎干基腐病概述
1.1.1 油棕茎干基腐病的分布特点与发病症状
1.1.2 奇异根串珠霉分类地位与特征
1.1.3 根串珠霉的寄主范围
1.1.4 根串珠霉的国内外研究进展
1.2 植物抗菌肽的研究现状
1.2.1 抗菌肽及其发病机制相关(PR)防御蛋白
1.2.2 抗菌肽主要类别
1.2.3 抗菌肽的作用机制
1.2.4 抗菌肽的数据库
1.2.5 抗菌肽的生产与应用
1.3 植物转脂蛋白研究现状
1.4 油棕茎干基腐病防治研究进展
1.5 本研究的目的、意义和主要研究内容
1.6 技术路线
2 材料与方法
2.1 油棕的组织培养与真菌病害的病原鉴定的试验材料与方法
2.1.1 试验材料
2.1.2 试验方法
2.2 油棕抗菌肽的筛选与原核表达研究试验材料与方法
2.2.1 试验材料
2.2.2 试验方法
2.3 油棕新型抗菌肽8-1 的原核优化表达与活性检测的实验材料与方法
2.3.1 实验材料
2.3.2 试验方法
2.4 转油棕抗菌肽基因拟南芥抑制茎干基腐病的实验材料与方法
2.4.1 实验材料
2.4.2 试验方法
3 结果与分析
3.1 油棕的组织培养与真菌病害的病原鉴定
3.1.1 油棕组培苗的获得
3.1.2 油棕茎干基腐病病原菌的鉴定
3.1.3 油棕叶炭疽病原菌的鉴定
3.2 油棕抗菌肽的筛选与原核表达研究
3.2.1 油棕RNA的提取
3.2.2 油棕cDNA的合成
3.2.3 油棕抗菌肽基因的克隆
3.2.4 油棕抗菌肽的表达与纯化
3.2.5 油棕抗菌肽的抑真菌活性测定
3.2.6 油棕抗菌肽的抑细菌活性测定
3.3 油棕新型抗菌肽8-1 的原核优化表达与活性检测
3.3.1 油棕新型抗菌肽8-1 分离、鉴定与分子进化分析
3.3.2 油棕新型抗菌肽8-1 的表达与纯化
3.3.3 油棕新型抗菌肽8-1 的分子模型构建与分析
3.3.4 油棕新型抗菌肽8-1 的化学合成
3.3.5 油棕新型抗菌肽8-1 的抑菌活性检测
3.4 转油棕抗菌肽基因拟南芥抑制茎干基腐病研究
3.4.1 转基因载体构建
3.4.2 转基因拟南芥T_3 代株系的获得
3.4.3 转基因拟南芥的分子检测
3.4.4 转基因拟南芥的抑菌性鉴定
4 讨论
4.1 油棕的组织培养与真菌病害的病原鉴定
4.2 油棕抗菌肽的筛选与原核表达
4.3 油棕新型抗菌肽8-1 的原核优化表达与活性分析
4.4 转油棕抗菌肽基因拟南芥抑制茎干基腐病研究
5 结论
致谢
参考文献
攻读博士学位期间发表的学术论文
【参考文献】：
期刊论文
[1]蛹虫草中异源表达天蚕菌素抗菌肽[J]. 黄开华,吴莹莹,唐庆九,李燕,茅文俊,候贝贝,汪滢. 食用菌学报. 2018(04)
[2]安徽省烟草根黑腐病病原鉴定及生物学特性分析[J]. 许大凤,王文凤,朱启发,汪文杰,周本国,王芳,檀根甲. 烟草科技. 2018(08)
[3]thanatin串联抗菌肽原核表达研究[J]. 刘伟,李清海,刘仁虎. 浙江农业学报. 2018(05)
[4]抗菌肽在洗发液中防腐效能及安全性评价初探[J]. 桂银雪,杨娜,滕达,王秀敏,毛若雨,郝娅,滕国新,王建华. 生物技术通报. 2018(10)
[5]农杆菌介导木本植物遗传转化的研究进展[J]. 王栋鑫,彭棣,张爽. 北方园艺. 2018(02)
[6]油棕组培苗Mantled变异研究进展[J]. 张大鹏,王永,石鹏,金龙飞,曹红星. 热带农业科学. 2017(12)
[7]烟草根黑腐病菌ISSR标记的遗传多样性分析[J]. 窦彦霞,徐林,马冠华,李六英,张世渠. 烟草科技. 2017(11)
[8]抗菌肽在免疫防御和抗肿瘤中的作用[J]. 张福梅,李明生. 国外医药(抗生素分册). 2017(06)
[9]棘胸蛙抗菌肽Spinosan-C的串联表达与活性检测[J]. 刘悦,詹忠根,朱兵,郑荣泉,程宏毅,聂作明. 生物工程学报. 2018(01)
[10]细粒棘球绦虫转醛醇酶基因的克隆、表达及其潜在免疫诊断价值的研究[J]. 辛奇,景涛,宋晓霞,高海军,孙旭东,吕薇,Nabil Pervaiz,鲁俊. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志. 2017(04)
博士论文
[1]油菜新型抗菌肽的筛选和一种油菜菌核病防治新策略的设计[D]. 曹慧慧.中国农业科学院 2015
[2]人工合成抗菌肽抑制棉花黄萎病菌的机制及应用研究[D]. 倪密.浙江大学 2012
硕士论文
[1]抗菌肽Mytichitin-A和Plantaricin ZJ5的重组表达纯化及活性鉴定[D]. 高晓芳.天津科技大学 2016
[2]超量表达果蝇Drosomycin基因提高植株的抗病能力[D]. 任小东.西南大学 2012
本文编号：3714543
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