生防菌及生物诱抗分子在植物免疫激活及枯萎病防治方面的效应及机理研究

发布时间：2022-12-09 04:06

　　枯萎病是一类危害严重的土传类病害,其主要的致病菌是尖孢镰刀菌（Fusarium oxysporum）,并且可以在多种植物中诱发枯萎病。枯萎病可以发生在植物整个生长期间,危害严重,目前尚无有效的方法防治枯萎病。为了通过改变土壤中微生物的营养环境、优化微生物群落结构、提高土壤中微生物多样性而达到抑制枯萎病侵染植株,达到降低枯萎病发生的目的,同时研发生物诱抗分子和生防菌作为生防制剂,本研究在接种枯萎病病原菌条件下,开展了生防制剂使用效果和防治枯萎病的机理研究。主要实验研究结果如下:（1）本文首先选择壳聚糖和海藻多糖,采用双氧水、氢氧化钠等手段制备其寡糖,具体条件为:壳聚糖经盐酸和双氧水在60℃下处理6小时后调节pH,三倍体积乙醇沉淀后烘干制得样品;海藻多糖经双氧水在90℃下处理5小时后调节pH,50℃烘干制得样品;地衣芽孢杆菌A2-10经摇瓶优化及单因素实验优化出最优发酵培养基后经过20 L发酵罐优化发酵参数,最后经过500 L发酵罐中试放大得到聚谷氨酸,最终聚谷氨酸的发酵条件为蛋白胨2%,无水氯化钙0.2%,麦芽糊精1%,无水硫酸镁0.1%,氯化钠0.5%,谷氨酸钠5.4%,pH经氨水调节... 

【文章页数】：102 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第1章 绪论
    1.1 生物诱抗分子简介
    1.2 生防菌简介
    1.3 植物免疫系统的简介
    1.4 枯萎病简介
    1.5 论文的目的及意义
    1.6 本课题实验技术路线
第2章 寡糖类诱抗分子的制备
    2.1 引言
    2.2 实验材料
        2.2.1 实验样品
        2.2.2 实验溶液配制
        2.2.3 实验试剂
        2.2.4 实验设备
    2.3 实验方法
        2.3.1 菌种活化
        2.3.2 摇瓶发酵指标的测定
        2.3.3 壳寡糖的制备及分子量的测定
        2.3.4 海藻寡糖制备及分子量的测定
    2.4 结果与分析
        2.4.1 聚谷氨酸的发酵及寡聚谷氨酸的制备
        2.4.2 壳寡糖的制备及分子量测定
        2.4.3 海藻寡糖的制备及分子量测定
    2.5 本章小结
第3章 生防菌剂的制备
    3.1 引言
    3.2 实验材料
        3.2.1 实验样品
        3.2.2 实验溶液配制
        3.2.3 实验试剂
        3.2.4 实验设备
    3.3 实验方法
        3.3.1 菌种活化
        3.3.2 种子液的培养
        3.3.3 固体发酵培养基的准备及灭菌
        3.3.4 固体发酵配方的单因素优化
        3.3.5 固体发酵的正交试验
        3.3.6固体发酵中试放大实验
        3.3.7 真菌孢子粉的保藏及收集
        3.3.8 发酵水平及指标测定
    3.4 结果与分析
        3.4.1 2种真菌固体发酵配方的优化
        3.4.2 真菌孢子粉的收集及保藏
    3.5 本章小结
第4章 基于叶片侵染的防效初筛
    4.1 引言
    4.2 实验材料
        4.2.1 实验样品
        4.2.2 实验溶液配制
        4.2.3 实验试剂
        4.2.4 实验设备
    4.3 实验方法
        4.3.1 病原菌的分离纯化
        4.3.2 病害菌的鉴定
        4.3.3 尖镰孢菌的培养
        4.3.4 叶片侵染实验材料及侵染方式的筛选
        4.3.5 尖镰孢菌侵染的正交试验优化
        4.3.6 叶片侵染实验的生防效果分析
    4.4 结果与分析
        4.4.1 分离纯化的病害菌C1-1 菌落及菌丝体镜检照片
        4.4.2 病害菌的鉴定
        4.4.3 实验叶片材料的筛选
        4.4.4 叶片侵染方式的筛选
        4.4.5 尖镰孢菌侵染的正交试验优化
        4.4.6 叶片侵染实验的生防效果分析
    4.5 本章小结
第5章 诱抗分子及生防菌效应分析
    5.1 引言
    5.2 实验材料
        5.2.1 实验样品
        5.2.2 实验溶液配制
        5.2.3 实验试剂
        5.2.4 实验设备
    5.3 实验方法
        5.3.1 拟南芥的培养
        5.3.2 病原菌的侵染及生防实验方法的建立
        5.3.3 免疫系统关键基因位点的转录表达分析
        5.3.4 生防菌对根际土壤菌群结构的影响
    5.4 结果与讨论
        5.4.1 拟南芥的培养
        5.4.2拟南芥侵染实验
        5.4.3 植物免疫系统关键位点的转录分析
        5.4.4 土壤总DNA的提取
        5.4.5 土壤中总DNA的 PCR扩增
        5.4.6 土壤中细菌的菌群群落的分析
        5.4.7 土壤中真菌的菌群群落的分析
    5.5 本章小结
第6章 总结与展望
    6.1 总结
    6.2 展望
参考文献
附录
致谢
在学期间主要科研成果


【参考文献】：
期刊论文
[1]芽孢杆菌SDNY-037对黄瓜灰霉病的防治效果及其发酵条件的优化[J]. 王海利,张晓慷,张新刚.  安徽农业科学. 2018(12)
[2]世界首个植物免疫蛋白质生物农药诞生——记中国蛋白质生物农药首席科学家邱德文研究员[J]. 王梅芳,王双超,王晶.  世界农业. 2018(04)
[3]香蕉枯萎病防控实用技术[J]. 方梅玉.  中国热带农业. 2017(03)
[4]马铃薯疮痂病高效拮抗菌的筛选及鉴定[J]. 高同国,姜军坡,郭晓军,张冬冬,朱宝成.  江苏农业科学. 2016(12)
[5]我国植物免疫诱导技术的研究现状与趋势分析[J]. 邱德文.  植物保护. 2016(05)
[6]植物免疫诱抗剂“阿泰灵”为作物生长保驾护航[J]. 贾秀领,张经廷,马贞玉,崔永增,邱德文,李新,陈昶.  现代农村科技. 2016(15)
[7]秦巴山区三尖杉根际土壤放线菌的分离、筛选及活性菌株的鉴定[J]. 晏丽,阮昌应,解修超,彭浩,陈文强,邓百万.  陕西理工学院学报(自然科学版). 2016(02)
[8]植物免疫诱抗剂对番茄灰霉病和早疫病的抑菌效果[J]. 李芳,陈建明,陈忠其,张珏锋,钟海英.  农药. 2016(03)
[9]土壤理化因素对香蕉枯萎病菌生长和侵染的影响[J]. 黄永辉,陈琦光,迟远丽,杨媚,周而勋.  华中农业大学学报. 2016(02)
[10]轮作模式对植烟土壤酶活性及真菌群落的影响[J]. 陈丹梅,段玉琪,杨宇虹,晋艳,袁玲.  生态学报. 2016(08)

硕士论文
[1]棘孢木霉菌的分离及其生防作用的评价与应用[D]. 李琳.吉林大学 2013
[2]生防菌B579发酵条件优化及生防效果的研究[D]. 张艳春.天津科技大学 2011



本文编号：3714788