核盘菌弱毒菌株AH16所含真菌病毒及其生物学特性研究

发布时间：2023-02-21 18:18

　　核盘菌(Sclerotinia sclerotiorum)可危害多种油料作物如油菜、大豆和向日葵等,引起菌核病。目前,开发有效控制核盘菌的措施仍然是值得探讨的研究课题。一些真菌病毒可以导致核盘菌致病力发生衰退,对菌核病具有生防潜力。本研究从安徽省油菜产区发病油菜茎秆内菌核中分离得到一株核盘菌AH16。该菌株表现为菌丝生长缓慢、菌核产量少以及致病力低。深入研究发现AH6菌株携带有两种病毒,即核盘菌线粒体病毒4(Sclerotinia sclerotiorum mitovirus 4,SsMV4/AH16)和核盘菌葡萄孢双节段ds RNA病毒2(Sclerotinia sclerotiorum botybirnavirus 2,SsBRV2)。SsBRV2为未报道的新病毒。进一步发现,SsBRV2单独感染时可以导致寄主致病力减弱。从转录组水平分析比较了SsBRV2和SsBRV1对于核盘菌基因表达的影响。本研究,一方面获得了具有菌核病生物防治潜力的新真菌病毒;另一方面,为认识其导致核盘菌致病力衰退机制及研究葡萄孢双节段RNA病毒与寄主真菌互作奠定了基础。核盘菌病毒SsMV4/AH16是一种+...

【文章页数】：168 页

【学位级别】：博士

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摘要
ABSTRACT
第一章 前言
    1 核盘菌的危害与防治
        1.1 核盘菌的危害与致病机理
        1.2 菌核病防治
            1.2.1 化学防治
            1.2.2 农业防治措施
            1.2.3 生物防治
    2 真菌病毒
        2.1 真菌病毒分类概况
        2.2 真菌病毒的传播
        2.3 真菌病毒与寄主的互作
        2.4 第二代测序技术与真菌病毒的研究
    3 核盘菌病毒
    4 真菌病毒在植病生防中的应用
    5 本研究的意义
第二章 核盘菌弱毒菌株AH16中含真菌病毒鉴定
    1 材料
    2 方法
        2.1 菌株的生物学特性测定
        2.2 核酸提取及纯化
        2.3 病毒序列的克隆与分析
        2.4 病毒粒子的提取和观察
        2.5 核盘菌原生质体制备和再生
        2.6 病毒水平传播及病毒粒子转染核盘菌原生质体
        2.7 病毒结构蛋白肽指纹图谱分析
    3 结果与分析
        3.1 核盘菌菌株AH16的dsRNA片段
        3.2 S-dsRNA片段的分析
            3.2.1 S-dsRNA全长c DNA序列
            3.2.2 Ss MV4/AH16系统进化分析
        3.3 L-dsRNA片段序列分析
            3.3.1 L-dsRNA全长c DNA序列
            3.3.2 两条序列的结构特征
            3.3.3 SsBRV2系统进化分析
        3.4 SsBRV2的病毒粒子
            3.4.1 病毒粒子形态
            3.4.2 从病毒粒子中提取到dsRNA
        3.5 通过原生质体再生技术不能获得AH16的脱毒再生后代
        3.6 SsBRV2的生物学特性
            3.6.1 SsBRV2的水平传播受到寄主营养体不亲和性限制
            3.6.2 SsBRV2通过病毒粒子可以转染Ep-1PNA367R
            3.6.3 感染SsBRV2的Ep-1PNA367RVT致病力减弱
            3.6.4 Ep-1PNA367RVT生长缓慢，丧失产菌核能力
        3.7 SsBRV2病毒粒子蛋白肽指纹图谱分析
    4 结论与讨论
        4.1 dsRNA病毒和ss RNA线粒体病毒同时感染核盘菌
        4.2 SsBRV2属于待定科Botybirnaviridae新成员
        4.3 核盘菌线粒体病毒Ss MV4/AH16与Ss MV1/HC025的比较
        4.4 SsBRV2可单独导致核盘菌致病力发生衰退
第三章 真菌病毒SsBRV2与Ss BRV1影响核盘菌基因表达的比较分析
    1 材料
    2 方法
        2.1 核盘菌生物学特性测定
        2.2 病毒的水平传播
        2.3 转录组测序
            2.3.1 转录组测序总RNA的准备
            2.3.2 建库测序
            2.3.3 数据分析
    3 结果与分析
        3.1 Ep-1PNA367BRV2和Ep-1PNA367BRV1菌株所携带病毒的确认
        3.2 菌株Ep-1PNA367BRV2、Ep-1PNA367BRV1和Ep-1PNA367致病力及菌落形态比较
        3.3 核盘菌Ep-1PNA367、Ep-1PNA367BRV2和Ep-1PNA367BRV1转录组测序数据分析
            3.3.1 原始数据处理
            3.3.2 差异基因筛选
        3.4 GO注释分析
            3.4.1 Ep-1PNA367BRV2与Ep-1PNA367差异基因的GO注释分析
            3.4.2 Ep-1PNA367BRV1与Ep-1PNA367之间GO分析
        3.5 KEGG Pathway分析
            3.5.1 Ep-1PNA367BRV2与Ep-1PNA367之间KEGG分析
            3.5.2 Ep-1PNA367BRV1与Ep-1PNA367之间KEGG分析
        3.6 转录组中特定差异表达基因分析
            3.6.1 Ep-1PNA367BRV2和Ep-1PNA367BRV1与Ep-1PNA367之间相比，变化趋势相同的差异表达基因Go和KEGG分析
            3.6.2 同与Ep-1PNA367相比，Ep-1PNA367BRV2中与Ep-1PNA367BRV1比较特异性变化基因Go和KEGG分析
    4 结论与讨论
全文结论和展望
    1.结论
        1.1 证明核盘菌AH16菌株同时感染了两种真菌病毒，阐明了它们的基因组信息
        1.2 明确了真菌病毒SsBRV2/AH16的分类地位
        1.3 明确了真菌病毒SsBRV2是导致核盘菌弱毒的一个决定因子
        1.4 阐明了真菌病毒SsBRV2和Ss BRV1对于核盘菌基因表达的影响，为认识其导致核盘菌致病力衰退提供了有益线索
    2.展望
        2.1 真菌病毒之间相互作用机制研究
        2.2 重点基因深入研究
参考文献
附表1 本研究用到的引物
附表2 肽指纹图谱鉴定纯化的SsBRV2病毒粒子的蛋白
附表3 Ep-1PNA367BRV2和Ep-1PNA367BRV1变化趋势相同的差异表达基因
附表4 dsRNA片段序列克隆
附录1 培养基和试剂
附录2 发表文章情况
致谢



本文编号：3747773