稻水象甲UDP-糖基转移酶基因的鉴定及原核表达分析

发布时间：2023-02-27 08:41

　　稻水象甲(Lissorhoptrus oryzophilus Kuschel)属鞘翅目(Coleoptera)、象甲科(Curculionidae)、沼泽象亚科(Erirhininae)、水象甲属(Lissorhoptrus),是一种重要的检疫性害虫。在水稻田主要应用化学杀虫剂进行防治,利用化学农药进行防治,不仅容易引起稻水象甲的抗药性,而且会造成农药残留和环境污染。昆虫的嗅觉识别系统,与其取食、趋利避害等各种行为关系密切。因此,从研究嗅觉相关基因入手,对稻水象甲的气味降解酶基因进行挖掘及其作用机制进行探讨,可为稻水象甲的防治提供新思路。UDP-糖基转移酶即尿苷二磷酸糖基转移酶(UGTs)分布广泛,能够催化糖基化反应,是昆虫体内非常重要的代谢酶。它主要催化糖基基团,使其从活化的UDP-葡萄糖供体中转移到受体疏水小分子-糖苷配基上,从而使疏水分子形成更亲水的化合物以利于高效降解排出。研究表明,UGTs能够降解气味小分子,在嗅觉系统中发挥重要作用,是昆虫潜在的气味降解酶之一。本研究以稻水象甲触角转录组数据为基础,共筛选鉴定出13个稻水象甲UGTs(LoryUGTs)基因,并将13个基因与已...

【文章页数】：69 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
中文摘要
abstract
英文缩写表
第一章 前言
    1.1 稻水象甲
    1.2 昆虫嗅觉分子机制
    1.3 昆虫气味降解酶研究进展
    1.4 UGTs在昆虫中的气味降解作用
    1.5 项目立题依据与研究意义
第二章 稻水象甲UGTs基因的鉴定及表达模式分析
    2.1 实验材料
        2.1.1 实验昆虫
        2.1.2 数据库及分析的工具软件
        2.1.3 实验试剂与仪器
    2.2 实验方法
        2.2.1 稻水象甲UGTs基因的筛选和鉴定
        2.2.2 多重序列比对及进化树构建
        2.2.3 稻水象甲各组织的分离
        2.2.4 稻水象甲各组织总RNA的提取
        2.2.5 稻水象甲各组织cDNA的合成
        2.2.6 实时荧光定量PCR
    2.3 结果与分析
        2.3.1 稻水象甲UGTs基因的鉴定
        2.3.2 稻水象甲UGTs基因的序列分析
        2.3.3 稻水象甲UGTs基因的系统进化分析
        2.3.4 稻水象甲UGTs基因在各组织中的表达模式
    2.4 小结
    2.5 讨论
第三章 稻水象甲UGTs蛋白的同源建模及结构分析
    3.1 实验材料
        3.1.1 序列来源
        3.1.2 模板选择及分析的工具软件
    3.2 实验方法
        3.2.1 结构建模
        3.2.2 模型评价
        3.2.3 结合位点在分析模型上的添加
    3.3 结果与分析
        3.3.1 模型构建
        3.3.2 模型评价
        3.3.3 位点预测
    3.4 小结
    3.5 讨论
第四章 稻水象甲UGTs基因的克隆与目的蛋白的表达
    4.1 实验材料
        4.1.1 实验昆虫
        4.1.2 菌种
        4.1.3 实验试剂与仪器
        4.1.4 溶液配方
    4.2 实验方法
        4.2.1 引物设计
        4.2.2 稻水象甲触角的分离
        4.2.3 稻水象甲触角总RNA的提取以及cDNA的合成
        4.2.4 LoryUGT90778和LoryUGT76491 基因全长的克隆
        4.2.5 原核表达载体的构建
        4.2.6 重组质粒的诱导表达
    4.3 结果与分析
        4.3.1 LoryUGT90778和LoryUGT76491 基因的克隆
        4.3.2 重组质粒的电泳检测
        4.3.3 LoryUGT90778和LoryUGT76491 基因酶切位点的添加
        4.3.4 重组质粒的电泳检测
        4.3.5 重组质粒p ET28a-UGT90778 和p ET28a-UGT76491 的构建
        4.3.6 重组质粒p ET28a-UGT90778 和p ET28a-UGT76491 的验证
        4.3.7 稻水象甲UGTs基因的原核表达及分析
    4.4 小结
    4.5 讨论
全文结论
参考文献
作者简介
致谢



本文编号：3751023