番茄褪绿病毒四省区分离物分子鉴定及p22蛋白的互作寄主蛋白筛选
发布时间：2023-03-09 18:48
番茄褪绿病毒(Tomato chlorosis virus,ToCV)是近几年在我国新发生的一种病毒,中国大陆2013年首次在北京地区设施番茄上发现并报道该病毒。由于寄主范围广泛,传播介体烟粉虱难防控,ToCV迅速在我国发展蔓延,目前全国范围内13个省区已有报道。感染ToCV的植株长势弱、果实小、商品性下降,对我国番茄产业造成严重的经济损失。为明确山西、内蒙古、辽宁和吉林四省区ToCV的发生情况,以便及早采取防控措施,本研究利用分子生物学方法,对采自上述地区的123份番茄样品进行ToCV分子鉴定,检出4份阳性样品,首次确定并报道了ToCV在山西、内蒙古、辽宁和吉林四省区的发生。CP、Hsp70h序列的核苷酸、氨基酸相似性分析和系统进化树表明四省区分离物与中国其他地区分离物的核苷酸、氨基酸相似性较高,亲缘关系较近。四省区的ToCV检出率均较低,推测ToCV在上述四省区处于病害发展的初始阶段,尚未对番茄产业造成明显损失。由于该病害具有流行速度快、传播范围广的特点,当地各部门要引起重视,警惕ToCV的流行爆发。目前对ToCV的研究多限于检测鉴定、检测方法优化、进化分析等研究,对于ToCV与寄...
【文章页数】：73 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
中文摘要
Abstract
1 引言
1.1 番茄褪绿病毒研究进展
1.1.1 番茄褪绿病毒的发生及分布范围
1.1.2 番茄褪绿病毒的症状与危害
1.1.3 番茄褪绿病毒的传播方式及田间寄主范围
1.1.4 番茄褪绿病毒的检测方法
1.1.5 番茄褪绿病毒的综合防治措施
1.1.6 番茄褪绿病毒的基因组结构及蛋白功能研究进展
1.2 蛋白互作研究方法进展
1.2.1 酵母双杂交系统
1.2.2 双分子荧光互补
1.3 S期激酶相关蛋白SKP1 研究进展
1.3.1 SKP1 参与泛素蛋白酶降解过程
1.3.2 SKP1 参与激素代谢
1.3.3 SKP1 参与着丝点功能
1.4 研究目的及意义
2 材料与方法
2.1 实验材料与仪器
2.1.1 病毒样品的采集
2.1.2 试剂与耗材
2.1.3 实验仪器
2.1.4 实验所需试剂、培养基及配制
2.2 番茄褪绿病毒的分子鉴定
2.2.1 植物总RNA提取
2.2.2 引物合成
2.2.3 反转录cDNA合成
2.2.4 PCR扩增
2.2.5 PCR产物琼脂糖凝胶电泳
2.2.6 PCR产物回收
2.2.7 核酸纯度和浓度测定
2.2.8 回收片段连接载体
2.2.9 大肠杆菌感受态细胞制备
2.2.10 大肠杆菌感受态细胞转化
2.2.11 菌落PCR鉴定
2.2.12 质粒DNA的提取
2.2.13 重组质粒鉴定
2.3 酵母双杂交筛选与ToCV p22 互作的寄主蛋白
2.3.1 酵母细胞感受态制备(现用现制)
2.3.2 酵母细胞感受态细胞转化
2.3.3 诱饵蛋白自激活活性验证
2.3.4 预实验验证文库效率
2.3.5 酵母双杂交筛选
2.3.6 酵母质粒的提取
2.3.7 质粒PCR鉴定
2.3.8 转化大肠杆菌
2.3.9 菌落PCR鉴定
2.3.10 菌液测序
2.3.11 质粒提取并保存
2.4 ToCV p22与NbSKP1 互作验证
2.4.1 酵母双杂交验证ToCV p22与NbSKP1 互作
2.4.2 BiFC验证ToCV p22与NbSKP1 互作
3 结果与分析
3.1 北方四省区番茄褪绿病毒的分子鉴定
3.1.1 ToCV CP和 Hsp70h基因的扩增
3.1.2 序列分析
3.2 酵母双杂交筛选与ToCV p22 互作的寄主蛋白
3.2.1 诱饵质粒自激活活性验证及文库效率测定
3.2.2 酵母双杂交筛选结果
3.2.3 测序结果统计分析及同源性比对
3.3 ToCV p22与NbSKP1 蛋白互作验证
3.3.1 酵母双杂交验证ToCV p22与NbSKP1 互作
3.3.2 双分子荧光互补验证ToCV p22与NbSKP1 互作
4 讨论
4.1 北方四省区番茄褪绿病毒的分子鉴定
4.2 酵母双杂交筛选与ToCV p22 互作的寄主蛋白
4.3 展望
5 结论
参考文献
致谢
硕士期间发表论文
本文编号：3758105
【文章页数】：73 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
中文摘要
Abstract
1 引言
1.1 番茄褪绿病毒研究进展
1.1.1 番茄褪绿病毒的发生及分布范围
1.1.2 番茄褪绿病毒的症状与危害
1.1.3 番茄褪绿病毒的传播方式及田间寄主范围
1.1.4 番茄褪绿病毒的检测方法
1.1.5 番茄褪绿病毒的综合防治措施
1.1.6 番茄褪绿病毒的基因组结构及蛋白功能研究进展
1.2 蛋白互作研究方法进展
1.2.1 酵母双杂交系统
1.2.2 双分子荧光互补
1.3 S期激酶相关蛋白SKP1 研究进展
1.3.1 SKP1 参与泛素蛋白酶降解过程
1.3.2 SKP1 参与激素代谢
1.3.3 SKP1 参与着丝点功能
1.4 研究目的及意义
2 材料与方法
2.1 实验材料与仪器
2.1.1 病毒样品的采集
2.1.2 试剂与耗材
2.1.3 实验仪器
2.1.4 实验所需试剂、培养基及配制
2.2 番茄褪绿病毒的分子鉴定
2.2.1 植物总RNA提取
2.2.2 引物合成
2.2.3 反转录cDNA合成
2.2.4 PCR扩增
2.2.5 PCR产物琼脂糖凝胶电泳
2.2.6 PCR产物回收
2.2.7 核酸纯度和浓度测定
2.2.8 回收片段连接载体
2.2.9 大肠杆菌感受态细胞制备
2.2.10 大肠杆菌感受态细胞转化
2.2.11 菌落PCR鉴定
2.2.12 质粒DNA的提取
2.2.13 重组质粒鉴定
2.3 酵母双杂交筛选与ToCV p22 互作的寄主蛋白
2.3.1 酵母细胞感受态制备(现用现制)
2.3.2 酵母细胞感受态细胞转化
2.3.3 诱饵蛋白自激活活性验证
2.3.4 预实验验证文库效率
2.3.5 酵母双杂交筛选
2.3.6 酵母质粒的提取
2.3.7 质粒PCR鉴定
2.3.8 转化大肠杆菌
2.3.9 菌落PCR鉴定
2.3.10 菌液测序
2.3.11 质粒提取并保存
2.4 ToCV p22与NbSKP1 互作验证
2.4.1 酵母双杂交验证ToCV p22与NbSKP1 互作
2.4.2 BiFC验证ToCV p22与NbSKP1 互作
3 结果与分析
3.1 北方四省区番茄褪绿病毒的分子鉴定
3.1.1 ToCV CP和 Hsp70h基因的扩增
3.1.2 序列分析
3.2 酵母双杂交筛选与ToCV p22 互作的寄主蛋白
3.2.1 诱饵质粒自激活活性验证及文库效率测定
3.2.2 酵母双杂交筛选结果
3.2.3 测序结果统计分析及同源性比对
3.3 ToCV p22与NbSKP1 蛋白互作验证
3.3.1 酵母双杂交验证ToCV p22与NbSKP1 互作
3.3.2 双分子荧光互补验证ToCV p22与NbSKP1 互作
4 讨论
4.1 北方四省区番茄褪绿病毒的分子鉴定
4.2 酵母双杂交筛选与ToCV p22 互作的寄主蛋白
4.3 展望
5 结论
参考文献
致谢
硕士期间发表论文
本文编号：3758105
本文链接：https://www.wllwen.com/nykjlw/dzwbhlw/3758105.html
